自动化阴道分泌物分析系统复检规则的建议和验证.docx

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1、自动化阴道分泌物分析系统复检规则的建议和验证当前的质量文件尚缺乏对体液范畴内阴道分泌物自动化检测复检规则的统一要求和细则指导，C自动化阴道分泌物分析系统夏检规则的建立与验证专家共识旨在更好地规范自动化阴道分泌物分析系统复检规则的建立，保证检验结果的准确性。阴道分泌物复检是指当自动化阴道分泌物分析系统出现异常计数、病原体阳性警示、异常图形/图谱、仪器有形成分识别结果与干化学检测结果不符时，以公认的参考方法对结果进行确认所采取的措施或行动。阴道分泌物复检的目的是使疾病筛查的假阴性率5%,从而提高筛查的敏感性和准确性。动化阴道分泌物检测系统由有形成分形态学检查和干化学检测两大基础模块组成。干化学检测

2、包括阴道乳杆菌功能评估、炎症反应标志物检测、阴道微生物代谢产物和酶活性检测、阴道酸碱度测定。闩动化阴道分泌物有形成分检测项目包括但不限于真菌菌丝、芽生抱子、他子、阴道毛滴虫、线索细胞、白细胞、上皮细胞、球菌、杆菌：干化学检测项目包括但不限于过氧化氢、白细胞酯酶、唾液酸汗雨、帏品酸氨基肽旃、N-乙酰双基己糖昔雨、B-葡萄糖醛酸酶、氧化酶、PH值。阴道分泌物分析系统复检规则的制定阴道分泌物分析系统第检规则制定过程包括规则的建立和验证两部分。以显微镜检查为参考方法，对H动化仪器的检测结果进行统计分析，筛选出复检条件，明确图谱审核和显微镜复检的程序，建立复检规则，并对其准确性和可行性进行验证。应当建立

3、复检规则的项目臼动化阴道分泌物分析系统基本具备筛查细菌性阴道病（BV）、外阴阴道假丝酵母菌病WC）和滴虫阴道炎（TV）这3类疾病的能力。可将BV、VVCTV这3类疾病所对应的项目列入自动化仪器常规复检项目，当仪器干化学检测结果与有形成分检查报警结果不一致或与样本性状不符时，应进行熨检。，瑞分卷。化仪楼加If1.a与震的时值关系garm，管MItMitWC*MtUQ917MuBKfi爨fi田W.n.MBMW-a*M10M1.M（tfaH三A）MrAMMIHUta1.f建：0）MMMI0MNeaRIMMBMI（MOO下MHOm需氧菌性阴道炎（AV）需要应用相差显微镜，不推荐仅以功能学指标（PH值、

4、炎症反应标志物和乳杆菌、需氧菌代谢产物等）诊断AV,应联合DOnderS评分或改良AV诊断标准，以及临床特征来综合判断。复检项目的参考方法1) )BV0革兰染色镜检是诊断BV的参考方法，湿片镜检与革兰染色镜检结果不符时，以革兰染色镜检结果为准。不建议仅用湿片镜检作为Bv项的参考方法。2) VVC。阴道分泌物湿片和革兰染色镜检见到芽生抱子、泡子、菌丝或假菌丝，可诊断VvC。3) TVo显微镜观察阴道分泌物悬液是否存在阴道毛滴虫是当前最常用来诊断滴虫病的方法，但敏感性只有45%60%,推荐采用核酸扩增试验诊断TV。4) AV0国际公认的AV诊断方法是Donders评分，建议使用基于革兰染色镜检联合

5、临床特征的改良AV诊断为首选参考方法。这2种方法都需要结合患者临床症状和体征作出最终诊断。参考方法的阳性判断标准1) BV阳性。革兰染色镜检菌群分析以Nugent评分与7分或Hay-Ison标准In级为阳性判断标准。2) VVC阳性。湿片镜检或革兰染色镜检任意1种方法检出真菌菌丝和/或芽生电子、抱子即可判定为阳性。3) TV阳性。以滉片镜检阳性为标准，但当镜下活动度减弱疑似不确定时，有条件的实验室可补充核酸检测，并以核酸检测结果为准。4) AV阳性。以Donders评分N3分且有临床特征或改良AV诊断标准4分且有临床特征为阳性判断标准。建立复检规则的样本量建立熨检规则的样本量尽可能大,建议收集

6、8001.OOO例样本。为使纳入研窕的样本与常规工作一致，用于建立复检规则的样本送检科室和受检者年龄不必限制，连续随机纳入，每日不超过50例。建立复检规则的工作流程规则建立的工作流程见图Io图1建立复检规则的工作流程将同一样本的湿片镜检结果和革:兰染色镜检结果按照参考方法的阳性判断标准进行联合判读，得到BV、VVC.TV、AV的参考方法结果。复检程序若BV、VVC、TV检测项目触发规则进入熨检程序时，先进行仪器图谱审核，如图谱辨析不明确，再进入显微倍复检程序。若AV检测项目触发规则熨检，直接用参考方法验证。1)仪器图谱审核程序。当BV、VVC.TV检测项目触发复检规则后，首先应进入仪器图谱审核

7、程序。仪器单独有形成分阳性警示或有形成分和对应的干化学检测项目同时报阳提示时，点入工作站阳性图谱分类栏，确认阳性成分形态是否典型可辨，典型阳性形态审核为阳性，错误识别判为阴性：图谱阳性成分形态不典型或图像对焦不清晰难以辨别，应进入显微镜熨检程序。当仪器有形成分阴性而仅有干化学检测项目阳性报警时，点入工作站图谱“未分类、上皮细胞、白细胞”等分类栏查看是否会有未被识别的阳性成分，如有典型的分类错误或未识别的阳性成分，则修正结果为阳性；若未发现相应阳性成分,则判为阴性。2)BV显微镜复检程序。行革兰染色镜检时，在油镜下采用Nugent评分或Hay-Ison标准进行最终确认。3)VVC.TV显微镜复检

8、程序。湿片镜检发现典型的真菌菌丝和/或芽生泡子、泡子、阴道毛滴虫，可直接判定为VVC阳性、TY阳性；未观察到则为阴性。复检规则的筛选方法将仪器有形成分和干化学2个检测模块中与疾病诊断具有对应关系的检测项作为筛选参数，利用阴性、阳性结果交叉熨检原则进行排列组合，得到所有筛选条件。以参考方法结果为评估标准，对所有筛选条件逐一进行分析：1）统计未经任何人工修正的仪器检测结果触发每条筛选条件的样本数量;2）统计每条筛选条件里仪器检测结果的假阴性率和假阳性率；3）剔除检测项全部阴性的条件；4）剔除出现概率为。的条件：5）剔除假阴性率和/或假阳性率低于5%的条件。按照以上步骤，从全部筛选条件中筛出建议复检

9、的规则。分析中若发现有仪器结果假阳性率或假阴性率失控、离群数据偏多的项目，可与仪器工程师一起甄别原因。如与试剂或仪器灵敏度有关，可依据参考方法的结果精细调整，以消除不良影响，并在仪器纠偏校准后重新进行复检规则的筛选。启用复检规则对仪器结果进行审核干预时，若夏检后被评估项目的假阴性率.和/或假阳性率5%,可进入复检规则验证环节：若5%,应采取更进一步的纠偏措施，尽可能地降低假阴性率和假阳性率后再进入复检规则验证环节。启用复检规则后结果分析和纠偏措施将触发复检规则的仪器检测结果依据复检程序进行人工干预（图谱审核和/或显微镜复检），若仅依靠图谱审核即能判断被评估项目阴性、阳性结果，无需再进行显微镜复

10、检，只有当图谱结果不能确认阴性、阳性时，才启动显微镜复检。以参考方法结果为标准对复检干预后的仪器结果进行敏感性、特异性、假阴性率、假阳性率等指标的评估。若被评估项目的假阴性率和/或假阳性率可控制在5%,则设立的复检规则有效，可以进入复检规则验证环节；若被评估项目的假阴性率和/或假阳性率仍超过要求范围，应采取进一步的纠偏措施。纠偏措施：分析出现假阴性、假阳性的原因，增加复检条件，或在显微镜复检率可接受的范围内加大某些复检条件，强制显微镜检查的要求，如“有对应关系/无对应关系”的有形成分和干化学检测项目同时多个阳性报警提示，而图谱审核为阴性。复检规则的验证另外选取临床样本进行复检规则验证，评估启用

11、复检规则后检测结果的符合率、真阳性率、假阳性率、真阴性率、假阴性率和夏检率，验证复检规则的临床适用性。为避免小样本量导致的阳性率过低，影响熨检规则触发效果，M检规则验证的样本例数建议为300-400例，样本送检科室可选择生殖道感染潜在阳性较多的科室。复检规则验证工作流程见图2。antg)图2复检规则殴证工作流程阴道分泌物有形成分背景复杂、干扰因素多，对仪器智能识别度的要求更高。而目前大多数实验室使用的自动化仪器有形成分检测是湿片在光学显微镜（X400）下臼动扫片成像并识别分类，因成像倍数限制，对细菌等微小生物的辨认仍无法达到革兰染色油镜（XI000）下的分辨效果，因而可能会造成依赖于菌群分析的

12、BV、AV假阴性偏后JO另外，干化学分析功能酶的特异性、敏感性、交叉反应等局限和不同品牌仪器及配套试剂性能的差异、检验人员阅片能力差异等可能也会造成假阴性或假阳性难以纠正。此时采取的应对措施为：1）如为检验人员阅片能力问题，需加强定期形态学图谱（湿片高倍镜下、革兰染色油镜下显微摄影照片和仪器图谱）的培训和考核；2）注意仪器形态学结果与样本性状不符时应主动进行显微镜复检；3）主动联系临床，告知某项检测结果有假阴性率偏高的风险，建议临床在该项实验室检测结果与临床症状不相符时选择其他检测方法。小结当复检规则验证的评估指标假阴性率、假阳性率均5%时，建立的熨检规则可应用于临床。当复检规则验证的评估指标假阴性率5%时，需结合仪器性能、方法学的局限性和临床的建议，积极采取相应措施，尽可能降低不良影响。鉴于不同品牌或类型的仪器在检测原理、性能、试剂敏感性等方面可能存在差异，建议各实验室在上述规则建立方法的基础上，制定符合自身性能特点的个性化复检方案，验证可行后方可使用。夏检规则建立后的应用需隙相关标准和仪器性能的完善，及时优化、调整。可将运行成熟的复检规则写入仪器工作软件中，逐步实现仪器的自动审核功能。