健胃愈疡颗粒对慢性胃炎伴幽门螺杆菌感染胃黏膜PAF、PS2的表达及对上皮细胞凋亡的影响.docx

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1、健胃愈疡颗粒对慢性胃炎伴幽门螺杆菌感染胃黏膜PAFPS2的表达及对上皮细胞凋亡的影响.doc健胃愈疡颗粒对慢性胃炎伴幽门螺杆菌感染胃黏膜PAF、PS2的表达及对上皮细胞凋亡的影响作者：黄国栋，黄媛华，黄道富，肖美珍，唐丽君，赵俊黄国株【摘要】目的视察健胃愈疡颗粒(JWYY)对幽门螺杆菌相关性胃炎胃黏膜乳癌相关肽(PS2)和血小板活化因了(PIate1.etactivatingfactor,PAF)表达的变更，并分析其可能的作用机制。方法80例幽门螺杆菌感染慢性胃炎患者随机分为2组，治疗组42例赐予健胃愈疡颗粒治疗，比照组38例赐予西药三联药物治疗。应用胃镜下活检胃黏膜组织快速尿素酶和Warth

2、in-Starry染色法检测幽门螺杆菌，应用Westernb1.ot检测PS2、PAE表达变更。应用末端转移函介导的CiUTP切口末段标记法(TUNED检测细胞凋亡。第4周复查胃镜。结果治疗组凋亡指数明显比比照组削减(Pit;0.05),治疗组总有效率高于比照组(Pit：0.05)oWesternb1.ot检测显示:JWYY颗粒可上调PS2并下调PAF的表达，而比照组对胃黏膜PS2和PAF的表达影响不大。结论健胃愈疡颗粒治疗幽门螺杆菌(HP)相关性胃炎可能与杀灭Hp、上调PS2和下调PAF的表达来抑制细胞凋亡有关。【关键词】幽门螺杆菌：胃炎：细胞凋亡：中医：血小板活ABSTRACT:Objec

3、tiveToobservetheexpressionsofPS2andp1.ate1.etactivatingfactor(PI)affectedbyJianweiYuyang(JWYY)Granu1.eonhe1icobacterpy1ori-associatedgastritisandstudythepossib1.emechanism.MethodsAtota1.of80casesofhe1icobacterpy1ori-associatedgastritiswererandom1.ydividedintotwogroups.TheJWYYgroupconsistedof42casesw

4、howeretreatedwithJWYYgranu1.eandthecontro1.grouphad38caseswhoweregiventhreecombinedwesternmedicines.UreasetestandWarthin-StarrymethodwereusedtodetectH.py1.oronbiopsyspecimensofgastricmucus,andWesternb1.otmethodwasusedtoobservetheexpressionsofPS2andp1.ate1.etactivatingfactor(PAF)affectedbyJianweiYuya

5、ng.TUNE1.techniquemediatedbyterminaenzymewasusedtodetecttheapoptoticbody.A1.1.thecaseswhohadtakenJWYYgranu1.ewererecheckedwithgastroscopeatthe6thweek.Resu1.tsThedifferenceinapoptoticindexbetweenJWYYgroupandcontro1.groupdifferedsignificant1.y,withthetota1.efficacyofJWYYhigherthanthatincontro1.group(P

6、it;0.05).TheWesternb1.otmethodshowedthatJWYYGranu1.ecou1.dreducethegasticmucosasexpressionofPAF,e1.evatetheexpressionofPS2,butinthecontro1.groupPS2andPAFwere1.itt1.eaffected.Conc1.usionJWYYcanki1.1.H.py1.ori,reducethegasticmucosasexpressionofPAF,e1.evatetheexpressionofPS2tosuppressapoptosis.Thismayb

7、ethepossib1.emechanismofJWYYforcuringPU.KEYWORDS:H.py1.ori;gastritis：apoptosis：Traditiona1.ChineseMedicine;p1.ate1.etactivatingfactor(PAF);PS2幽门螺杆菌(he1.icobacterpy1.ori,Hp)与慢性胃炎的发生和发展亲密相关，但其致病机制仍未完全清晰。大量报道认为，Hp能诱导细胞凋亡，导致胃黏膜的完整性破坏，从而产生或加重炎症或溃疡损伤11.三联药物丽珠得乐加阿莫西林和昔硝晚治疗，由于其价廉质优，是目前各级医院广泛运用的西药三联抗慢性胃炎药物。近

8、年来我们用健胃愈疡(JianWeiYuyang,JWYY)颗粒治疗幽门螺杆菌相关性胃炎取得了满足疗效，本课题通过胃镜下活检胃黏膜组织检测幽门螺杆菌，并同时检测血小板活化因子(P1.ate1.etactivatingfactor,PAF)、乳癌相关肽(PS2)的表达和胃林膜上皮细胞的凋亡，并与西药三联比照，从而探讨健胃愈疡颗粒抗胃炎的作用机制。1材料与方法1.1一股资料选择2005年5月-2006年7月因上消化道症状就诊，并在湖南省人民医院和湖南中医药高校附属衡阳医院行胃镜检查确诊为慢性胃炎的内科住院患者及门诊患者。全部患者均在接受胃镜检查前1月内未服用糖皮质激素、非跄体抗炎药及抗生素，并除外合

9、并严峻心、脑、肾等严峻疾病患者。共有80例病例入选，纳入标准参照2000年井冈山全国慢性胃炎研讨会议共识相关标准2。按随机抽签法进行分组。治疗组42例，其中男26例，女16例，年龄21-64岁，平均年龄（41.3412.66）岁；其中胃黏膜炎症轻度者15例，中度17例，重度10例。比照组38例，其中男21例，女17例，年龄20-61岁,平均年龄（40.7111.85）岁；其中胃黏膜炎症轻度者16例，中度16例，重度6例。上述一般临床资料经统计学处理，组间各项参数均衡性良好，具有较好的可比性（Pgt;0.05）O1.2药品及试剂健胃愈疡颗粒剂（主要由柴胡、党参、白芍、延胡索、臼芨、青黛、珍宝层粉

10、、甘草组成，中南高校湘雅医院药房供应）：阿莫西林（广州珠海联邦制药）：丽珠得乐（丽珠集团制药厂生产）：替硝啜（湖南益阳制药厂生产）；原位细胞凋亡TUNE1.检测或剂盒（武汉博士德公司）。PS2,PAF抗体（美国SantaCruz公司），Westernb1.ot及其相关试剂（品美有限公司）。1.3标原来源及Hp阳性的诊断方法胃镜检查时，每例患者取4块胃黏膜标本（即胃窦大弯侧，小弯侧和前后壁），其中选胃窦部标本用于快速尿素酶试验和Wanthin-Starry染色，两种检查均阳性推断为HP阳性，其中一项阳性者不包括在本探讨内。其余3块胃黏膜标本分别检测PF.PS2的表达和细胞凋亡。1.4试验分组治疗

11、组赐予健胃愈疡颗粒剂口服，3g/包，9g/次，3次d,连服4周为一个疗程。比照组赐予三联药物阿莫西林0.5g/次，每日2次，早晚口服：丽珠得乐1包/次，每日2次：替硝哩0.5g次，每日2次。用药4周后复查。两组均于第4周复查胃镜，活检取材部位与第一次胃镜检查相同。1.5胃黏膜细胞的凋亡检测TUYE1.染色步骤：将胃黏膜标木石蜡包埋、切片后经脱蜡，20mg1.蛋白酶消化液在室温下作用20min；30m1./1.双氧水室温下孵育10min阻断内源性过氧化物酶；滴加TUNE1.反应液，37cC60min；DB显色，苏木素第染。光镜下视察：胞核中有棕黄色颗粒者为阳性凋亡细胞，每张切片至少视察5个以上高

12、倍视野，计算100个上皮细胞内的阳性细胞数，即为凋亡指数(AI)。Hp感染的诊断、组织学、细胞凋亡的视察采纳双盲法。1.6Westernb1.ot法检测PAF、PS2的表达参照分子克隆指南3其次版进行。抗体工作浓度分别是PAFd：100),PS2(1：100)。1.7疗效评定标准依据卫生部中药新药临床探讨指导原则2中的布.关标准拟定。治愈：Hp阴转，临床症状消逝，胃镜和病理检/黏膜及原正常；显效：HP阴转，临床症状明显减轻，病变黏膜基本熨原正常：好转:Hp阴转或强阳性转为弱阳性，临床症状减轻，病变黏膜范围缩小2/3,炎症程度减轻。以上均为治疗有效。无效：Hp.临床症状及病变黏膜无改善。1. 8

13、统计学方法采纳SPSS1.O.0软件包对数据进行统计分析，计量资料以均数标准差(XS)表示，治疗前后比较采纳配对t检验，组间比较经方差齐性分析后采纳成组设计的t检验，治愈率比较采纳2检验，Pit：0.05认为差异有统计学意义。2结果2.1临床总有效率的比较健胃愈疡颗粒组（治疗组）总有效率优于比照组（西药三联组），两组差异有统计学意义（Pit；0.05,表1）.表1两组总有效率的比较（略）2.2治疗前、后胃黏膜上皮凋亡指数的变更两组患者治疗后胃黏膜凋亡指数均较治疗前明显减少（Pit;0.05）,两组患者治疗后治疗组凋亡指数明显比对照组削减（Pit;0.05）,组间比较有显著性差异（Pit;0.0

14、5,表2、图1）。表2治疗前、后凋亡指数的变更（略）2.3两组治疗前、后Hp根除率的比较治疗组42例Hp根除率为76.1%（32/42）,比照组Hp根除率为65.8%（25/38）,两组比较差异无统计学意义（Pgt;0.05）O2. 4Westernb1.ot检测各组治疗前、后PS2、PAF的表达结果JWYY颗粒可提高PS2表达，下调PAF的表达，与比照组有显著性差异（Pit;0.01）,较治疗前也有显著性差异（Pit;0.01,表3、图2）。表3各组患者治疗前、后PS2、PAF吸光度值检测结果的比较（略）2.5PS2、PAF与胃黏膜上皮凋亡指数的相关性分析慢性胃炎患者胃黏膜上皮凋亡指数与PS

15、2蛋白表达呈负相关关系G=-O.841,Pit;0.01）,和PAF蛋白表达呈正相关关系（r=0.902,Pit：0.01）。3探讨现代医学对慢性胃炎的疗效显著，但简单复发1.因此，揭示其发病及夏发的机制并找寻有效药物仍是临床亟待解决的难题之一。细胞凋亡是基因调控下的程序性细胞死亡。在正常状况下，为清除苍老、异样细胞及限制细胞数量和体积，有部分细胞在机体的调控下发生凋亡以维持机体的稳态，当组织细胞发生凋亡异样时则可导致疾病发生5o中医药在长期的临床实践中，对慢性胃炎的治疗也发挥了重要的作用，并取得了良好的临床疗效。健胃愈疡颗粒是结合现代药理学的最新探讨成果和祖国医学的传统理论研制出来的，本探讨

16、表明，健胃愈疡颗粒使HP根除率达到76.1%,并能显著减轻慢性胃炎胃黏膜的损害，两组患者治疗后胃黏膜凋亡细胞数目均较治疗前明显削减(Pit；0.05),且健胃愈疡颗粒组更明显，有显著性差异(Pit;0.05)O这可能与它从整体调理动身，着眼于增加人体H身的正气，采纳夏方多环节、多途径、多靶点综合治疗实现对局部病理变更的修复，最大限度地调动机体抗病祛邪的实力有关。PS2是一类对胃黏膜有爱护作用的因子。大量证据表明，PS2在维持胃肠道黏膜的完整性及在加速损伤黏膜修豆的过程中起重要作用6,探讨表明:PS2W运动因子的作用，在溃疡修熨时促进细胞迁移到病灶区，有助于维持黏膜的完整性6-7oPAF是一种内

17、源性磷脂介质，它可与内毒素引起胃肠黏膜损伤7-1.1.o本探讨表明，JWYY颗粒可上调PS2和下调PAF的表达，而比照组对胃黏膜PS2和PAF的表达影响不大。经相关分析，慢性胃炎患者胃黏膜上皮凋亡指数与PAF,PS2之间均有宜线相关关系。由此我们推想，JWYY颗粒发挥抗慢性胃炎的机制之一可能与其杀灭即、上调PS2和下调PF的表达来抑制细胞凋亡有关。【参考文献】1卢世云，潘秀珍.幽门螺杆菌相关性胃病的细胞增殖和凋亡J.胃肠病学和肝病学杂志,2001,10(1):52-57.2中华人民共和国卫生部.中药新药临床探讨指导原则S.1995:114-115.3萨姆布鲁克J，拉塞尔DW.分子克隆试验指南(

18、下册)M.北京：科学出版社，2002:1713-1726.4李志芳，林庚金.幽门螺杆菌对胃上皮细胞的凋亡作用J.上海医科高校学报，2000,27(2):98-901.5僧靖静，张之汉，高冬玲.胃腺癌组织中肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体T的表达J.郑州高校学报(医学版)，2006,41(3):543-545.6Mod1.inIM,Pou1.somR.Trefoi1.peptides:mitogens,motogens,ormiragesJ?C1.inGastroentero1.,1997,25(supp1.1):94-95.7SaidS,MowafyM.Ro1.eofendogenousend

19、othe1.in-1instress-inducedgastricmucosa1.damageandacidsecretioninratsJ.Regu1.Pept,1998,73(1):43-50.8SobhaniI1Denizo1.Y,Moizo1.1.,eta1.Regu1.ationofp1.ate1.et-activatingfactorproductioningastricepithe1.ia1.ce1.1.sJ.EurJC1.inInvest,1996,26(1):53-58.9SuzukiH,MiuraS,ImaedaH,eta1.Enhanced1.eve1.sofchemi1

20、.uminescenceandp1.ate1.etactivatingfactorinurease-positivegastricu1.cersJ.FreeRadicBio1.Med,1996,20(3):449-454.10YoshidaN,YoshikawaT,ndoT,eta1.Pathogenesisofp1.ate1.et-activatingfactor-inducedgastricmucosa1.damageinratsJ.ScandJGastroenero1.,1989,162(Supp):210-214.11段义民，李兆申，湛先保，等.应激性溃疡时血浆、胃黏膜组织ET1.的变更及其意义J.其次军医高校学报，1998,5(19):455-457.