生化论文.docx
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1、尿素法提取小麦DNA的评价杜盈雪中央民族大学北京市海淀区100081摘要:目的本实脸以小麦幼叶为实脸材料,进行小麦基因组DNA的提取。通过实脸掌握根本的实脸技能。方法本实脸通过尿素法进行小麦基因组DNA的提取,并且通过实险原理及实脸现象进行方法的改进。结果尿素法可以提取小麦基因组DNA。结论尿素法可以提取小麦基因组DNA,并且提取的DNA能够满足后续测定。关键词:小麦幼叶、基因组DNA、尿素法、OD值,琼脂糖凝胶电泳Eva1.uationofwheatDNAextractionbyureamethodDuyingxueMinzuUniversityofChinaHaidianDistrict,
2、Beijing1.OOOS1.Abstract:ObjectiveInthisexperiment,Weusewheat1.eavesasexperimenta1.materia1.s,toextractthegenomicDNAofwheat.Throughtheexperimentweshou1.dmasterthebasicski1.1.s.MethodsTheexperimentuseureamethodtoextractthegenomeDNAofwheatandimprovetheexperimentthroughtheexperimentprincip1.eandexperime
3、ntphenomeno.Resu1.tsUreamethodcanextractthegenomicDNAofWheat.Conc1.usionsUreamethodcanextractthewheatgenomeDNAextraction,andtheDNAtomeetthesubsequentdetermination.Keywords:Young1.eavesofWheat,ThegenomicDNA,Ureamethod,OD,Agarosege1.e1.ectrophoresis前言【研究背景】DNA是遗传信息的载体和根本遗传物质,它在遗传变异、代谢调控等方面起着重要作用,是分子生物
4、学和基因工程研究的对象,但无论是研究植物DNA的结构和功能,还是开展外源DNA的转化、转导的研究,首先要做的就是从植物组织中提取天然状态的高分子量的纯化DNA,因此从植物中提取高质量的DNA非常重要【研究目的】小麦是全球30%人口的主要粮食来源,是世界第三大粮食作物。随着全球人口2050年预计到达90亿,有预测称普通小麦须增产70%才能满足未来需求。而小麦增产最重要的方法之一就是转基因,转基因的前提就是了解小麦的基因组,因此提取小麦DNA是非常重要的。【解决方法】查阅文献可知,尿素法从未提取过小麦基因组DNA,但曾有人用尿素法提取过小麦相近的植物水稻和玉米,于是猜想尿素法也可以提取小麦DNA。
5、1.材料和方法1.1.实验仪器常温离心机(上海安亭科学仪器厂制造、TG1.-16G)、恒温水箱(金坛市鸿科仪器厂、HH-420)、微波炉(合肥荣事达三洋电器股份、EM-308E81)、高速冷冻离心机(安徽中科中佳科学仪器、HC-2518R)1.2 实验试剂尿素裂解液成分:7mo1.尿素,0.3mo1/1.氯化钠,0.034mo1.1.十二烷基肌氨酸钠,50mmo1./1.Tris(pH8.0),20mmo1.1.EDTA(pH8.0),B-流基乙醇(ME)约2%(参加量可根据所用材料而定,如叶片细胞中次生物质含量高,可适当加量)。氯化钠和-筑基乙醇为国产试剂,其它均为Sigma公司产品。Tri
6、S-饱和酚、氯仿和异戊醇混合液,体积比为25:24:10TE缓冲液成分(pH8.0):10mmo1./1.Tris-HC1.,1mmo1./1.EDTA。1.3 实验方法1.3.1 DNA提取的试验方法在离心管中参加约20u1.-ME(B-苑基乙醇)和2m1.裂解缓冲液,并彻底混合均匀.称取约0.5g小麦叶片,放入预冷的研钵中用液氮迅速研磨,研磨充分后转入裂解液中混匀.参加2m1.Tris-饱和酚、氯仿和异戊醇混合液(通风橱操作),充分混匀,约15min(混合动作要轻柔)以4400转/分(冷冻离心机)转速离心20min,取上清约2m1.,参加0.3m1.10mo1.NH1AC混合均匀(裂解、离
7、心充分的上清透明不浑浊,如上清颜色呈褐色,应适当增加的B-ME量)。参加2倍体积经预冷的无水乙醇,轻柔转动离心管,直到形成絮状核酸沉淀,并在一20C保存20min4以12000转/分(冷冻离心机)转速离心约15min,快速倒出乙醇再参加浓度为70%的乙醇,轻柔晃动管子数次洗涤,以去除残留的尿素和盐离子。参加20U1.的TE缓冲液溶解DNA。1.3.2 三次试验步骤的不同1、第二次试验设置了两组对照一组是用原来的研磨方法,另一种用的是直接在离心管中研磨,省去转移步骤;离心速度由4400改成了12000转/分;在混匀时的动作更为轻柔。2、第三次试验多设置了高盐组,研磨方法均为直接在离心管中研磨,省
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