中药天年饮对脾衰老的延缓作用研究_0.docx

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1、中药天年饮对脾苍老的延缓作用探讨中药天年饮对脾苍老的延缓作用探讨作者：陈志宏程丽梅张宏凯谢利德高福禄【摘要】目的视察牌的苍老变更及中药天年饮延缓免疫器官苍老的作用。方法D半乳糖连续腹腔注射建立亚急性苍老的大鼠模型：待模型胜利建立后，用药组大鼠赐予天年饮灌胃。分别检测各组大鼠血脂和脾脏指数的变更，视察脾增殖细胞核抗原(PCNA)、P53和p1.6表达的变更。结果与正常组大鼠比较，模型组大鼠的血脂和脾p53.p1.6的龌表达明显上升，模型组的脾脏指数和脾PCNA的表达明显卜.降(P,BO0帜中药天年饮可明显改善模型大鼠脾的各种变更：与模型组大鼠比较，天年饮用药组襟大鼠血脂和脾P53、p1.6的表达

2、明显黑下降，而脾脏指数和脾PCNA的表达明显上升(P,PV).结论天年饮可通橙过阻挡脾脏的菱缩、促进淋巴细胞的增殖娴实力，提高苍老机体的免疫功能，可能具三有延缓苍老的作用。【关键词】苍老虑；脾；天年饮；PCNA;p53:P1.裳6AbstractObjec爸tiveToobservethes泱enescentchangesofs柴1.eenandtheantiag囚ingeffectsoftradit续ionaIChinesedrgTiannianyinonimmune瞒SOSDratswererandoin喷Oratsinorina1.,aging根mode1andTiannianyi邑ng

3、roups.ThesubacuIe1.yagingmode1.ratsWeremadebyinjectin源gDga1.1.ntoabdomina爱IcavitycontinuaHy笫.Aftcrtheagingmode囿Iwassuccessfu1.1.yestabiished,theratsi琳nTiannianyingroupw蝇CreadministratcdTi债annianyinbyintraga绫Stricadministratio钝n.Theb1.ood1.ipidand貌IheSP1.eCnindeXofra襦tsineachgroupwerem鞫easured,andthe

4、expr勇essionsofPCNA,p53a6ndp16ofsp1.eenwereobservcdrcspective1.速y.Resu1.tsComparedWithnorma1.rats,the筒Sp1.ecnindexandthee胭XpressionofPCNAins-1p1eenofagingmodeIr镶atsdecreasedobviouS1.yiwhi1.ethcb1.ood1.(IiPid,Iheexpression急sofp53andp1.6insp1.e忱enofagingmodeIrats股increasedobviousIy胞(P,P).Tiannianyi-5nc

5、ou1dimprovethese薇nescentchangesinspIecnofagingratssig吭nificantIy!compare-tdwithagingmode1rat桢s,thesp1.eenindexan觌HthecxpressionofPC氯NAinsp1.ee11increase祈dremarkabIyandtheb堤100d1.ipid,theexpressionsofp53andp16inspIeendecreasedinTiannianyingroupre疙markab1.y(P,P).Co吻.nc1.usionsTiannianyincanimprovethei

6、m解munefunctionofaged胁bypreventingatropy淡Ofsp1.eenandfaci1it剔atIngthereproducti第VeaCtiVityOf1.ymPho砧cytes,thushasbetterantiagingeffects.KeywordsAging藤;Sp1.een;Tiannianyin:PCNA;p53;p1.6198包8年MEites(1)提出，在苍老的癖过程中，免疫神经内分泌网络起着重酌要作用。淋巴器官功能降低是免疫功能紊蹉乱的主要缘由，也与免疫功能的衰退亲密相关(2)；因此，探讨免疫系统的苍老焦变更具有重要的理论和实际意义(3)贫脾是机

7、体重要的免疫器官，脾的功能在整个机体的免疫功能中占有重要地位(4)益：补肾、健脾是延缓苍老的重要方法。天晁年饮由刘河间宣明论方何首乌丸加味而成，能填精补髓、乌发延年。本探讨采Q用D半乳糖致亚急性苍老的大鼠模型，惋视察牌的苍老变更并探讨天年饮延缓机体又免疫器官苍老的作用。1材料与方法鞋试验动物与分组雄性SD大鼠30ft只，体重180250g0将大鼠随机分为3组：正常组、模型组和用药组，每组10只。其中模型组和用药组大鼠均采忽用D半乳糖连续腹腔注射（按200m凯g/kg给药，每天1次，连续40d）寐制作亚急性苍老的动物模型；模型组大鼠悖造模胜利后不再做任何处理，用药组大鼠造模胜利后每天用天年饮灌胃

8、，共30do药品与试剂天年饮由灸何首乌、沅怀牛膝、肉从蓉、淫羊董、丹参、茯苓六味中药组成，煎制后每m1.含生药g,按恐g/kg灌胃给药。检测血清中总胆固醇驶（Te）、甘油三酯（TG）和高密度脂隼蛋白（HD1.C）含量的试剂盒购自北撒京中法生物公司；增殖细胞核抗原（pr牢O1.iferatingce1.1.neuc1.earantigen,PCN）泰、P53、p1.6免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物工程公司。血脂大鼠昭经内眦取血，离心后取上清，应用口本口绪立公司BochringerMannh懒einHitachi717全自动生狼化分析仪分别采纳酶法和干脆法检测TC聪、TG和HD1.Ce脾脏指数大

9、梳鼠称重，断头处死，快速取出脾脏后去除锥脂肪、筋膜后称重，计算脾脏指数，脾脏埴指数=脾脏重量/体重。HE及免疫懋组化染色称重后的脾脏入Bouin液固定，常规石蜡包埋，连续切片（片厚67互m）,贴于涂有APES的载玻片上。跨HE染色苏木精伊红染色视察脾翘的组织结构。免疫组化染色及定量分冈析采纳SABC免疫组化染色视察大鼠镣脾PCNA、P53、p1.6的表达状况享（PCN一抗为小鼠抗体,P53、PU16一抗均为兔抗体，一抗稀释比例均为本1：100),以细胞核出现棕黄色为阳莒性反应，以PBS代替一抗作为阴性比照。每只大鼠于显微镜下(1020)任影选5张切片，每张切片选取3个阳性细胞泽分布匀称的视野，

10、采纳MiVnt图像分簟析系统,计算阳性细胞面积占视野面积的针比值，取平均值作为这只大鼠的阳性率。统计学处理采纳统计软件，以方差分溥析进行统计处理，组间比较采纳q检验。淌2结果大鼠血脂的变更与蜗正常组大鼠比较，模型组大鼠血清TC,鹄TG含量明显上升，HD1.C含量明显垣下降(PV,PV)：中药天年饮可明显珈降低苍老大鼠血清TC和TG含量，提高痰HD1.C含量，用药组与模型组比较差姿异显著(P,PV)(见表1.)o表1大鼠血脂及脾脏指数与正常组比较：1桔)pv,2)PV：与模型组比较：3)澎P,4)P大鼠脾脏指数的变更还与正常组比较,模型组大鼠脾脏指数显著下降(PV)：中药天年饮可明显提高诳苍老大

11、鼠的睥脏指数，用药组与模型组比较差异显著(PV)。牌组织结构的替变更光镜下视察可见，正常组大鼠脾白岑髓、红愉清楚，脾小体内含大量B淋巴细淡胞，动脉四周淋巴鞘含大量T淋巴细胞，苗红筋内牌.血窦清楚可辨(图1)。模型组旦大鼠脾白髓体积缩小，脾小体少见，脾小曾梁内结缔组织增生，脾血窦明显淤血（图2）o用药组大鼠牌白髓体积与正常组大鼠相比无明显变更，脾小体可见，肿小梁能内结缔组织无明显增生，脾血窦淤血明显逐减轻（图3）。大鼠脚PCA表达迅的变更PCNA阳性产物为棕黄色，位于细胞核。正常组大鼠脾小体生发中心可花见大量PCNA阳性的B淋巴细胞，但阳稚性程度较弱；动脉四周淋巴鞘可见PCN闭A阳性的T淋巴细胞

12、：脾索可见PCNA迓阳性的浆细胞和网状细胞，阳性程度较强：脾血窦壁内皮细胞和平滑肌细胞未见阳噩性产物（图4）模型组大鼠牌小体、动锁脉四周淋巴鞘中PCNA阳性淋巴细胞均铠明显削减；脾索中可见PCNA阳性的浆晶细胞和网状细胞（IS5）。用药组大鼠脾竦PCNA的表达状况与模型组比较明显改善（图6）。模型组大鼠脾PCNA的阳渍性表达率明显低于正常组大鼠（P）;感中药天年饮可明显改善模型大鼠脾PCN：的表达状况，与模型组比较，用药组大渊鼠脾PCNA的阳性表达率明显上升（P得V）（表2）o大鼠牌P53表达的变更p53蛋白阳性产物为棕黄色,位搠于细胞核。正常组大鼠脾动脉四周淋巴鞘V及红髓中均可见p53阳性的

13、网状细胞，模型大鼠脾中p53阳性细胞明显增多，用药组大鼠脾P53阳性细胞较模型组明显削减(图7-9)各组大鼠脾p53觅蛋白的阳性率见表2,模型组大鼠脾p5禅3的阳性表达率明显高于正常组(PV):中药天年饮可明显降低模型大鼠脾p5g3的表达，与模型组比较，用药组大鼠脾济p53的阳性表达率明显降低(PV).左大鼠脾P16表达的变更p1.6蛋擢白阳性产物为棕黄色，位于细胞核。正常劾组大鼠脾红髓中可见pi6阳性的网状细胞，模型大鼠脾中P16阳性细胞明显增戛多，用药组大鼠脾P16阳性细胞较模型顼组明显削减(图10-12),各组大鼠牌P16蛋白的阳性率见表2,模型组大箕鼠脾P16的阳性表达率明显高于正常组

14、搏大鼠(PV)；中药天年饮可明显降低模讹型大鼠脾P16的表达，与模型组比较，黑用药组大鼠脾P16的阳性表达率明显降宴低(P)。表2各组大鼠睥PCMA、p53和p1.6的表达变更3讨：论早在上世纪六十年头就有学者提出了苍老的免疫学说，认为免疫功能的衰退朵与机体的老化亲密相关，在全部器官系统战的苍老过程中，以免疫系统最早出现苍老，且对机体的影响最大，探讨免疫系统的苍老变更具有重要的理论和实际意义(3巳Jo免疫系统是机体苍老过程中的主要调胺节系统之一，参加了苍老的全过程。苍老搔可使机体的免疫功能下降，免疫器官如骨江髓、脾、胸腺和淋巴结等出现萎缩等不同程度的变更（5）：并有观点认为,苍老抬与免疫功能的

15、状况亲密相关（6）。脾是蚤机体内重要的免疫器官，在异种抗原的刺M激下脾小体分化增殖，产生B淋巴细胞及浆细胞，动脉四周淋巴鞘显著增厚，产生（IT）T淋巴细胞，这些变更均与体液免疫和细粱胞免疫亲密相关：另外，脾还能产生与免将疫调整有关的活性物质，脾的功能在整个世机体的免疫功能中占有重要地位（4）oPCNA是存在于细胞核中的酸性蛋白质，其表达的强弱可干脆反应细胞增殖/凋房亡的程度和是否存在细胞的恶性累积增殖OP53和p1.6都是抑癌基因,p53嫌基因可参加细胞周期的调控，具有阻滞细1胞周期、促进细胞凋亡、维持基因组的稳烧定及抑制肿瘤血管生成等多方面的功能；P16基因编码的p1.6蛋白为细胞周期矫的一

16、种负性调整因子，可与细胞周期素D莺竞争结合细胞周期依靠性激酶（CDK4推），阻挡细胞从G1.期进入S期,从而抑3制细胞增殖。木探讨发觉，模型组大鼠脾脏指数、脾PCWV的表达明显降低，脾p53和p16的表达明显上升，模型大遥鼠与正常大鼠比较差异显著（PV,PV兹）。表明模型大鼠脾萎缩，脾内淋巴细胞纵及浆细胞等的增殖实力下降、凋亡增多，因而合成免疫球蛋白的数量削减,对外界病原的反抗实力下降，从而导致机体其他钏器官、系统的一系列病理变更。传统中N医学认为脾主运化是脾的主要生理功能之赅一，且是脂质代谢的关键(包括脂质的吸廉收、合成、水解、转移与排泄等)(7)r0李中梓的医宗必读有记载：脾土粉虚弱，清者

17、难升，浊者难降；现代探讨也表明，脾功能失调可导致脂质代谢障碍度(8,9)本探讨结果与其他学者的研先结果一样，模型大鼠脾功能下降、血脂埋代谢异样。由于TC.TG的含量上升，毂大量的TC.TG进入线粒体经氧化分趾解，导致大量活性氧(RoS)的生成：艘微量ROS能参加细胞内的信号转导，对基因表达、个体发育起到生理性调控作用美(10):但过量的ROS反过来可以攻做击位于线粒体内膜上的脂类、蛋臼质和m乃IDNA,影响线粒体的功能，导致细胞獭受损、苍老和疾病的发生(I1.)e还有探讨认为血脂上升(TC、TG含量上升案，HD1.C含量下降)可使动脉管壁增昆厚，导致患心血管疾病的危急性增加(11.2),这些变

18、更均加速了机体的苍老进程戢O延缓苍老的主要目的是提高生活质量练、改善体质并有效延长机体寿命。中药天能年饮是我院中医系主任贾春华教授在刘河工间宣明论方何首乌丸的基础上加味而篓成的，何首乌丸本由何首乌、肉欢蓉、怀c牛膝组成，能填精补髓、乌发延年：于此3基础上加淫羊莱补肾壮阳以强筋骨，丹参棘活血化瘀以通心脉，茯苓健脾利湿以宁心虐神。诸药相配通调心脾肝肾四脏。本探讨圣发觉中药天年饮可以改善模型大鼠的血脂辑代谢、提高模型大鼠的脾脏指数和脾PC禊NA的表达、降低模型大鼠脾P53和P术16的表达、并对模型大鼠脚的组织结构嚏具有明显的爱护作用，说明天年饮可通过涎推迟或阻挡脾脏的萎缩、促进淋巴细胞的巫增殖实力来

19、提高苍老机体的免疫功能，而机体免疫功能的提高乂有助于防治老年病粮和延缓机体的苍老过程，从而证明中药天襄年饮具有良好的延缓苍老作用。【参考文献】IMEitesbiomar掰Rersofaginginthera涓t(J).ExpGeronto1.,1扯988：23(45)：349. 2赞1.arbiA,FranceschiC,MazzattiD,etofthc滓iInmunesystemasapro债gnosticfactorforhuman1.ongevity(J).Ph姆ysio1.ogy(Bcthesda)犀，XX；23:6474.3Kum处arR,Burnsre1.atedd倨ec1.in

20、einimmunity：1 mp1.icationsforvaccineresponsiveness(偏J).ExpertRevVaccin蜗es,XX；7(4):46779.4Cestastructure,fu艰nctionandhisto1Ogy圜Ofthesp1.een(J).Toxico1.Patho1.,XX；34(5临):45565.5Gruver蟆1.,Hudson1.1.,Sempows拍kifagEIng(J).JPat梵hoi,XX；211(2):144慌56.GPawe1.ecandage缥inginman(J).ExpGer蹉onto1.,XX：41(12):12393

21、42.7IshidaT,I藤chiharaMWangX,etpIaysanimportantro1.捶eintheinductionofa槟Cce1.eratcdh1.oodc1.e旬aranceofPEGyIated1.骆iposomes(J).JContr酯O1.Re1.ease,XX；115(3模):24350.8Petroia东nuA,Ve1.osoDF,Costa愈GR1Cicsurg钓eriesonIipidogramo渝frats(J).RevAssocMedBras,XX；52(1):56(8)9.9PetroianuA,VeIosoDF,A1.berti1.R,e3t1.Ip

22、ida1.terationsa掳Ctertota1.sp1.enecto,弄my,Subtota1.sp1.enec哌Iomyandsp1enicauto硒Imp1.antsinrats(J)趁.JGastroentero1.Hep倜ato1.,XX：23(7Pt2):e2214.IODrogeradi刹CaISinthCPhySiOIog根ica1.contro1.ofce1.1.f镭unction(J).Physio1.间Rev,2002：82(1):4795.1IStPierreJ,B也UckinghanJA,Roebuc搔kSJ,etofsuperoxide坠productionfromdiff能erentsitesinthemit是Ochondria1.e1.ectron(transportchain(J).镀JBio1.Chem,2002；27715.(47):4478490.12V啃anDamMJ,deGrootEC湫IeeSM,Ctbetweeninc养reasedarteria1.wa1.Ithicknessandimpai湃rmentinABC1.drive靠ncho1.estero1.eff1.ux晖：anobservationa1.study(J).1.ancet,2002春：359(9300):3742.