HPVDNA检测现状及最新国际宫颈癌筛查指南.ppt

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1、page 0 2010 Roche,HPV-DNA检测现状及2012最新国际宫颈癌筛查指南,内容：1.HPV介绍2.HPV-DNA检测产品及各自特点3.2012最新国际宫颈癌筛查指南,HPV介绍,根据感染组织类型分为：皮肤组织 粘膜组织,HPV介绍,E：早期基因区编码早期6个蛋白L：晚期基因区编码晚期2个蛋白,感染后的存在状态：状态一：非整合状态状态二：整合到宿主细胞,http:/,HPV介绍,HPV-DNA检测（进口并取得FDA注册证）,HPVDNA检测（国产）,HPV-DNA检测（按不同原理分类）,HPVDNA检测,QIAGEN HC2,原理：基于信号放大的酶标板技术的化学发光检测的核酸杂

2、交检测方法（杂交捕获）流程：裂解杂交捕获反应冲洗信号收集判读时间：手工操作3.5小时，仪器操作4.5小时结果：检测13种HPV高危型，不分型主要问题：与个别HPV亚型会发生交叉反应，无内对照，约5%假阳性率,DML2000,HPVDNA检测,Hologic Cervista HRHPV,原理：基于专利Invader 酶切信号放大技术流程：磁珠分离核酸提取酶切信号放大荧光检测时间：4小时自动化孵育+2小时人工操作（半自动）结果：14种高危型16、31、33、52、58、18、39、45、66、68、51、56、66，不分型主要问题：可能与其它HPV如HPV67和70发生交叉反应，从而产生假阳性结

3、果,HPVDNA检测,Hologic Cervista(r)HPV 16/18,原理：基于专利Invader 酶切信号放大技术流程：磁珠分离核酸提取酶切信号放大荧光检测时间：4小时自动化孵育+2小时人工操作（半自动）结果：仅对16、18分型主要问题：可与高水平的高危型HPV31发生交叉反应。非常低的HPV感染或样本可能导致假阴性,HPVDNA检测,ROCHE PCR多色荧光探针法,原理：基于PCR反应结合不同荧光染料的探针检测高危型HPV并对16、18分型流程：核酸提取PCR扩增检测时间：5小时（手工操作时间15分钟）结果：Cutoff值，14种高危型，并对16、18分型最新产品，文献见美国A

4、THENA实验（Lancet Oncol）,cobas 4800 HPV检测系统,GT 16,高危型混合(12 GT),GT 18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,66,68,HPVDNA检测,凯普21种人乳头状瘤病毒（HPV）分型检测试剂盒,原理：PCR+基因芯片导流杂交技术流程：核酸提取PCR扩增导流杂交显色时间：3.5-4个小时（手动）结果：21格某格显色即为某HPV亚型阳性（13+5+3），对21种HPV分型（含其它HPV亚型）主要问题：手工操作，易交叉污染，没有经过临床实验,HPVDNA检测方法,亚能人乳头瘤病毒基因分型(23型)检测试剂盒,原理：使用自行

5、设计的HPV基因组中的特异性引物，对待测样品中可能存在的HPV 基因型进行PCR扩增并进行生物素标记，再将PCR扩增产物与固定在芯片上的23个特异性探针进行特异性的分子杂交，并通过化学显色方式判读结果(PCR-反向点杂交法)流程：核酸提取PCR扩增导流杂交显色结果：膜条显色直接提示感染的HPV亚型，23种亚型（18+5）（含其它HPV亚型）主要问题：手工操作，易交叉污染，没有经过临床实验,HPVDNA检测,透景luminex,原理：流式荧光技术，PCR产物和微球上交联的探针根据碱基互补配对的原理杂交，加入荧光标记反应，最后在流式荧光检测仪上检测荧光信号。流程：核酸提取PCR扩增微球杂交荧光标记

6、反应荧光分析结果：26种亚型（19+7），含其它HPV亚型主要问题：没有经过临床实验,HPV-DNA检测主要产品对比表,2012最新国际宫颈癌筛查指南,2012年刊登在美国癌症学会杂志(ACS)和美国阴道镜及宫颈病理学会杂志（ASCCP）-宫颈癌预防及早期诊断指南,2012年，ACS/ASCCP/ASCP 最新指南HPV联合细胞学筛查：30-65岁的妇女,Pap&HPV,ASC-US&HPV+or LSIL,NILM&HPV+,Repeat co-test,HPV16 or HPV16/18 genotyping,Colposcopy,1 year,1 year,NILM&HPV-ASC-US

7、&HPV-,Colposcopy,5 years,+,-,+,5 years,-,Saslow D,et al.Am J Clin Pathol 2012;137:516-42,Cytology alone is noted as an acceptable(but not preferred)option for women 30-65 yrs old every 3 years,immediately,旧指南与新指南的区别,19,1.ASC-US triage(21 years),2.Adjunct screening(30 years),ASC-US,HPVDNA,Colposcopy,

8、Re-screen(LBC;1 year),Negative Cytology(NILM),+,HPVDNA,+,+,HPV16/18,Colposcopy,Re-screen(LBC 1 year),+,Screen(3 year),Re-screen(LBC 1 year),Re-screen(LBC;3 years*acceptable OR LBC and HPV;5 years*preferred),Re-screen(5 years),co-testing(30-65 years),For women(30 65 yrs),cytology alone every 3 years is noted as an acceptable(but not preferred)option only,联合检测将是未来的筛查方向！,21,2012年起，国际ACS，ASCCP，ASCP指南一同建议 细胞学阴性、HPV16/18(+)的女性应立即进行阴道镜检查,2012 ACS,ASCCP，ASCP Guidelines（美国癌症学会、美国阴道镜和宫颈病理学会，美国临床病理学会指南）,谢 谢！,