机能实验学.ppt

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1、机能学实验中心教学课件,目录,动物实验基本操作技术,血液凝固与抗凝,不同给药途径对药物效应的影响,电解质及药物对离体蛙心活动的影响,感官系统实验,实验性高钾血症及其治疗,尿液生成的影响因素及药物作用,离体小肠平滑肌生理特性,急性中毒性肾功能不全,呼吸运动的调节,血药浓度半衰期的测定,香烟的毒性作用,有机磷酸酯类的中毒与解救,急性犬失血性休克及救治,动物实验基本操作技术Basic Operation in Animal Experiment,【目的与要求】,1、了解常用的实验动物的种类和特点，实验动物的选择及动物实验涉及的动物保护问题,2、掌握常用手术器械的使用方法,3、掌握常用实验动物的编号、

2、捉拿及固定方法,4、掌握家兔的麻醉、固定及基本的手术操作,5、掌握蟾蜍的基本手术操作,【实验方法与步骤】,一、机能学实验概述,生理学、病理生理学和药理学三学科的理论教学内容紧密相关且三学科实验教学使用的方法和仪器有许多相同之处，因此将生理学、病理生理学和药理学实验合并为机能学实验，实行实验教学资源的共享及合理配置 按人体系统机能设置综合性实验(在一项实验中观察实验动物的生理学变化，病理生理学变化和药物的作用)，使部分基础医学与临床医学之间的内容交叉融合,机能学实验教学的三个阶段,第一阶段：机能实验基本理论知识与基本技能训练,第二阶段：综合实验阶段,第三阶段：扩展性实验和探索性实验阶段,二、实验

3、动物,1、哺乳动物：家兔、小白鼠,家兔 Oryctolagus cuniculus,小白鼠 Mus musculus,2、两栖动物：蟾蜍,蟾蜍 Bufo bufo gargerizans,动物保护,动物因为有感觉和有趣地生活着而应当有正常的地位，人类应该尊重所有的生命,“3R”基本思想是尽可能采用其他手段代替实验动物，减少实验动物使用量，设法改进动物实验方法以减轻动物疼痛和不安,Replacement(代替)Reduction(减少)Refinement(优化),三、常用手术器械,1、手术刀,执弓式,反挑式,握持式,执笔式,执刀方法,用于切割各种软组织，也可用于切割软骨,2、手术剪,执剪法,弯

4、手术剪用于给动物剪毛,眼科剪常用于血管、输尿管剪口以便插管或剪神经、脏器包膜，不能用于剪皮肤、肌肉和骨骼,直手术用于剪皮肤、脂肪、肌肉以及血管、神经等组织,执剪的方法是以拇指和无名指分别插入剪柄环，中指紧靠无名指前的柄环外，食指轻压在剪柄和剪刀交界处,3、止血钳,直、弯止血钳,止血钳的执钳方式与手术剪相同,直止血钳和无齿止血钳主要用浅表手术部位止血或组织分离,弯止血钳主要用于较深的手术部位或内脏止血,有齿止血钳不宜夹持血管、神经和脆弱组织，以免造成组织损伤,执镊法,4、镊子,无齿镊用于夹捏皮下组织、脂肪组织、粘膜组织和血管,有齿镊适用于夹捏皮肤、筋膜、肌腱等坚韧的组织，不宜夹捏血管、神经干和内

5、脏等软组织,小巧的眼科镊适于分离血管、神经干或夹镊细小软组织,执镊方式类似于执毛笔，以拇指对食指和中指,5、动脉夹,用于夹闭动脉阻断血流，以便插动脉导管,6、玻璃分针,玻璃分针用于钝性分离的周围组织，暴露血管和神经干,四、动物实验的基本操作技术,1、实验动物的捉拿与固定,家兔,小白鼠,2、实验动物的编号,染色法,挂牌法,烙印法,3、实验动物的给药方法,摄入法、注射法、涂布法和吸入法,4、实验动物的麻醉,（1）麻醉的概念,用药物使整个实验动物或其手术部位处于无知觉状态，并使其基本生命活动不受影响,（2）麻醉方法,全身麻醉,局部麻醉,吸入麻醉,注射麻醉,静脉注射,腹腔注射,肌肉注射,淋巴囊注射,（

6、3）家兔的麻醉,药物：20氨基甲酸乙酯,药物剂量：5ml/kg体重,给药方法：耳缘静脉注射（视频）,麻醉效果的观察：呼吸 角膜反射 肌张力 皮 肤夹捏反应,麻醉的注意事项：注药速度 补药,麻醉意外的处理：肌颤与抽搐 心跳呼吸骤停,5、家兔的基本手术操作,（1）颈部手术,气管及颈部血管神经分离术（视频）,气管插管术（视频）,颈总动脉插管术（视频）,（2）腹部手术,输尿管插管术（视频）,6、蟾蜍的基本手术操作,蟾蜍双毁髓术（视频）,坐骨神经干标本的制备（视频）,蛙心插管（视频）,【注意事项】,麻醉药推注应匀速缓慢，且给药部位要从耳尖部打起，并密切观察麻醉指标颈部手术分离组织肌肉时，尽量采用钝性分离

7、，以防止剪破血管，如有出血，必须及时止血分离神经应细致，只能使用玻璃分针，避免使用金属器械手术过程中，要注意保持自然解剖位置，防止将结构关系弄乱急性动物实验必须在药物麻醉下进行，严禁未麻醉动物而进行实验善待实验动物，不做野蛮手术，实验结束后将兔急性放血处死神经应避免牵拉，防止放电颈总动脉插管时一定要弄清楚步骤，动脉夹一定要夹闭近心端,【复习思考题】,1、麻醉效果如何观察？,2、简述颈总动脉插管术的基本操作流程,3、简述蛙心插管的基本操作流程,血液凝固与抗凝Blood Coagulation and Anticoagulation,【目的与要求】,1、学习用玻片法测定凝血时间2、观察家兔体外血凝

8、、组织因子促凝和肝素抗凝过程，并分析各个过程度产生机制,血液凝固可通过内源性凝血系统与外源性凝血系统两条途径血液凝固受诸多因素,如pH、温度、与血液接触的物体表面的光滑程度、凝血物质浓度等多种因素的影响,从而导致血液凝固的时间发生改变，因此，可以血液凝固的时间为指标，观察不同因素对血液凝固的影响,【实验原理】,凝血时间,【观察指标】,【实验方法与步骤】,1实验前准备（1）玻片准备：取干净、干燥的玻片3块，编号，放入水浴恒温箱的试管架上，加温至37。注意不要弄湿玻片（2）动物准备：兔称重，20%乌拉坦静脉注射麻醉；背位固定，行颈总动脉分离术和插管术（暂不放血）,（3）按表1要求，用5ml注射器往

9、玻片上滴加1滴相应的试剂。注意每加完一种试剂后更换注射器。,表1 肺组织浸液、肝素对玻片法凝血时间的影响,2凝血时间测定和记录时间（1）取干净干燥小试管1个，迅速放入动脉血2ml（注意：经动脉插管放血时，第一滴已激活的血液弃掉）（2）取血后，立即用5ml注射器（安装7号针头）抽取血液少许，向每块玻片的试剂上加入等量的2滴血液，用大头针混匀（注意不要混淆），立刻计时（注意首先记录1号玻片的凝血时间）（3）每隔10秒，用大头针朝一个方向挑血液，看有无血丝，见到第一个血丝的出现，立即终止计时。从开始计时到终止计时的一段时间即为玻片法的凝血时间。将该时间记录到表1中，比较三块玻片凝血时间的差异,【注意

10、事项】,1、所用玻璃器皿要求干净、干燥2、专用试剂、大头针和注射器不要混淆3、计时要耐心、细心、准确。因为第一个凝血丝的出现是瞬间的,【分析讨论】,一、血液凝固的概念血液凝固是血液由流动的液体状态变成不能流动的凝胶状态的过程。是凝血因子按一定顺序相继激活而生成的凝血酶最终使可溶性纤维蛋白原变成不可溶性纤维蛋白的过程,二、血液凝固的三个阶段和两条途径三个阶段：凝血酶原酶复合物的形成；凝血酶原的激活；纤维蛋白的生成两条途径：内源性途径（异物）、外源性途径（组织因子）,1、1号玻片 肺组织浸液 凝血时间最短：（1）肺组织浸液中含有组织因子。组织因子与FVII结合并激活FVII，TF-FVIIa复合物

11、和磷脂、钙共同作用下激活FX，启动外源性凝血（2）玻片对于血液是带负电荷的异物，当血液与玻片接触时，FXII结合到异物表面，并被激活为FXIIa，FXIIa再激活FXI，启动内源性凝血途径,三、凝血时间的比较及机制分析,2、2号玻片 生理盐水 凝血时间第2：生理盐水无促凝和抗凝作用。血液凝固是由于血液与 玻片接触，FXIIa被激活，启动内源性凝血途径3、3号玻片 肝素溶液 凝血时间最长：肝素具有抗凝作用。其机理：（1）抑制凝血因子。与抗凝血酶结合，使之与凝血酶的亲合力与过程增强，对FXa-FXa的抑制作用也增强（2）促凝血酶灭活。与肝素辅助因子结合，使凝血酶灭活加快（3）抑制血小板黏附、聚集、

12、释放凝血酶功能,【复习思考题】,在肺组织浸液促进血凝块出现后立即加入肝素溶液1滴，仔细观察兔凝血块是否能溶解？为什么？,感官系统实验,一、声音的传导途径,掌握气导和骨导的检测方法，并比较两种声音传导途径的特征,【目 的 与 要 求】,空气传导（气导）是正常人耳接受声波的主要途径，由此途径传导的声波刺激经外耳、鼓膜和听小骨传入内耳。骨传导（骨导）是声波的刺激引起颅骨的振动，经颅骨、耳蜗骨壁传人内耳。传导性耳聋时气导减弱而骨导增强，而神经性耳聋时气导和骨导均减弱。本实验通过敲响音叉后，先后将音叉置于颅骨和外耳道口处，证明和比较两种声音传导途径的存在。,【实验原理】,【观 察 指 标】,声音的空气传

13、导途径和声音的骨传导途径,【实 验 方 法 与 步 骤】,1.比较同侧耳的气导和骨导（1）保持室内肃静，受试者取坐姿。检查者敲响音叉后，立即置音叉柄于受试者被检测耳这一边的颞骨乳突部。此时，受试者可听到音叉震动的翁翁声。随时间的延续，声音渐弱，乃至消失（2）当受试者刚刚听不到声音后，立即将音叉移到外耳道口，则听力正常的受试者又可听到声音。反之，先置音叉于外耳道口，当刚刚听不到声音后立即将音叉放置在颞骨乳突部，受试者仍不能听到声音，如图所示。上述实验证明了听力正常者的气导时间比骨导时间长，即任内氏实验阳性,（3）用棉球塞住受检测者的外耳道，重复上述实验，听力正常者的气导时间缩短，等于或小于骨导时

14、间，即任内氏实验阴性,2比较两耳骨传导（1）将敲响的音叉柄置于受试者前额正中发际处，令其比较两耳感受到的声音强度。正常人两耳感受机能相同，且测试声波向两耳传达的距离相同，途径近似，因此两耳所感受到的声波响度基本相同。如某侧音响强度增加，则该侧骨导增强（2）用棉球塞住受试者一侧外耳道，重复上述操作，两耳感受到的声音有什么变化或受试者感到声音偏向哪一侧,【注 意 事 项】,敲打音叉时，避免用力过猛损坏音叉。音叉放在外耳道时，要使振动的方向正对外耳道并防止音叉触及耳廓、皮肤和头发,如何使用该实验鉴别传导性耳聋和神经性耳聋？,【复习思考题】,二、视觉调节反射、瞳孔对光反射,观察视觉调节反射和瞳孔对光反

15、射,【目 的 与 要 求】,当人眼由远视近物时，引起晶状体凸度增加，同时发生瞳孔缩小和两眼视轴会聚，而当人眼由近视远物时则发生相反的变化。人眼在感受光刺激时，瞳孔缩小，此为瞳孔对光的反射。本实验应用球面镜成像规律，证明在视近物时眼折光系统的调节主要是晶状体前表面凸度的增加，并观察视近物时和光刺激时瞳孔缩小的现象,【实验原理】,【观 察 指 标】,眼的调节反射、辐辏反射、瞳孔对光反射,【实 验 方 法 与 步 骤】,1.眼的调节反射（1）暗室内点燃蜡烛放于受试者眼的前外方，让受试者注视远处物体。实验者从旁边可以观测到蜡烛在受试者眼内的三个蜡烛像。最亮的中等大小的正立像是由角膜前表面反射而成。一个

16、较暗而大的正立像是由晶状体前表面反射而成。一个较亮而小的倒立像是由晶状体后表面反射而成。由于晶状体和角膜前表面均为向前的凸面，因此形成正立像，晶状体前表面曲率小于角膜前表面曲率因此像较大而暗。晶状体后表面为凹面向前，因此其像倒立，且小而亮，如图A所示（2）让受试者注视近处物体，此时可见最大的正立像向最亮的正立像靠近而且变小。这说明视近物时晶状体前表面凸度增加且靠近角膜，曲率变大，而角膜前表面和晶状体后表面的曲率位置均没有改变，如图B所示。这就是眼的调节反射,2.辐辏反射 让受试者注视视标，视标由远及近时，可以观察到瞳孔缩小，同时双眼向鼻侧会聚，前者称缩瞳反射，后者称辐辏反射,3.瞳孔对光反射

17、受试者注视远方，观察瞳孔大小。再用手电筒从一侧照射受试者一眼，可见受照射眼的瞳孔立刻缩小（直接瞳孔对光反射）。用手在鼻侧挡住光线以防止光线照射另一只眼，重复上述实验，可见双眼瞳孔同时缩小（间接瞳孔对光反射）,【注 意 事 项】,观察者要在受试者的旁边观察，不能在其正前方观察,如用手电筒照射受试者的一眼，观察到被光照射眼无瞳孔对光反射，而另一眼存在间接瞳孔对光反射。则病变存在于哪个部位？,【复习思考题】,三、视力、视野和生理盲点的测量,1、掌握视力的概念和测定视力的原理和方法2、掌握视野的概念和检查方法3、检测自身生理盲点的位置和范围,【目 的 与 要 求】,视力又称视敏度，是指眼分辨物体细微结

18、构的能力，目前多以在一定距离能分辨空间两点的最小距离为衡量标准。视力即检测视网膜中央凹（黄斑区）精细视觉的分辨能力。实际上，正常人眼在光照很好的情况下，如果视网膜上的物像小于5m，一般不能产生清晰的视觉。目前常用的是国际标准视力表，令受试者辨认视力表上E字的开口方向，并按下列公式计算：受试者视力=受试者辨认某字的最远距离/正常视力辨认该字的最远距离,【实验原理】,视野是单眼固定注视正前方时所能看到的空间范围，此范围又称为周边视力，也就是黄斑中央凹以外的视力。借助此种视力检查可以了解整个视网膜的感光功能，并有助于判断视力传导通路及视觉中枢的机能。正常人的视力范围在鼻侧和额侧较窄，在颞侧和下侧较宽

19、。在相同的亮度下，白光的视野最大，红光次之，绿光最小。不同颜色视野的大小，不仅与面部结构有关，更主要的是取决于不同感光细胞在视网膜上的分布情况,【实验原理】,视网膜在视神经离开视网膜的部位（即视神经乳头所在的部位）没有视觉感受细胞，外来光线成像于此不能引起视觉，故称该部位为生理性盲点。由于生理性盲点的存在，所以视野中也存在生理性盲点的投射区。此区为绝对性暗点，在客观检查时是完全看不到视标的部位。根据物体成像规律，通过测定生理性盲点投射区域的位置和范围，可以根据相似三角形各对应边成正比的定理，计算出生理盲点所在的位置和范围,【实验原理】,【观 察 指 标】,视力、视野、生理盲点,【实 验 方 法

20、 与 步 骤】,1.视力测量（1）将视力表挂在光线充足而均匀的地方，让受试者在距离5m远处测试。视力表第11行字应与受试者的眼同高（2）受试者用遮眼板遮住一眼，另一眼看视力表，按实验者的指点从上而下进行识别，直到能辨认最小的字行为止，以确定该眼视力。同法确定另一眼视力（3）若受试者对最上一行字也不能辨认，则须受试者向前移动，直至能辨认最上一行字为止，并按公式推算视力,2视野测定（1）将受试者的下颌置于视野计的托颌架上。托颌架上方附有眼眶托，测定时附着在受试者眼窝下方。此外，视野计配有各色视标，在测定各种颜色的视野时使用（2）在明亮的光线下，受试者下颌放在托颌架上，眼眶下缘靠在眼眶托上，调整托架

21、高度，使眼与弧架的中心点在同一条水平线上。遮住一眼，另一眼凝视弧架中心点，接受测试（3）实验者从周边向中央缓慢移动紧贴弧架的白色视标，直至受试者能看到为止。记下此时视标所在部位的弧架上所标之刻度。将视标退回，重复测试几次，待得出一致的结果以后，将结果标在视野图的相应经纬度上。同法测出对侧相应的度数（4）将弧架一次转动45度角，重复上述测定，共操作4次得8个度数，将视野图上8个点依次相连，便得出白色视野的范围，如图所示（5）按上述方法分别测出该侧的红色、绿色视野（6）同法测出另一眼的白色、红色、绿色视野,3.生理盲点的测定（1）将白纸贴在墙上，受试者站于纸前50cm处，用遮眼板遮住一眼，在白纸上

22、与另一只眼相平的地方用铅笔划一”+”字记号。令受试者注视”+”字。实验者将视标由”+”字中心向被测眼颞侧缓缓移动。此时，受试者被测眼直视前方，不能随视标的移动而移动。当受试者恰好看不见视标时，在白纸上标记视标位置。然后将视标继续向颞侧缓缓移动，直至又看不见视标记下其位置。由所记两点连线之中心点起，沿着各个方向向外移动视标，找出并记录各方向视标刚能被看见的各点，将其依次相连，即得到一个椭圆形的盲点投射区（2）根据相似三角形的原理，按公式（盲点投射区直径:盲点直径=500：15），计算出盲点直径，如图所示,【注 意 事 项】,1、视野测量时一定要求受试者被测眼一直注视视野计弧形架中心点，不能随视标

23、的移动而移动 2、视野和生理盲点测量时，以被测试者确实看到或者看不到视标为准，测试结果必须客观,1、某人左眼颞侧视野和右侧鼻侧视野发生缺损，请问病变的可能部位在哪？2、我们日常生活中看物体时，为什么感觉不到生理盲点的存在？,【复习思考题】,呼吸运动的调节,【目 的 与 要 求】,观察无效腔、pH、CO2等理化因素对呼吸运动的影响 分析各因素的作用途径，了解呼吸运动的调节机制,【实验原理】,呼吸运动调节的反射弧：1、CO2(+)中枢化学感受器、(+)外周化学感受器(+)呼吸中枢呼吸加深加快2、H+(+)外周化学感受器、(+)中枢化学感受器(+)呼吸中枢呼吸加深加快3、O2(+)外周化学感受器(+

24、)呼吸中枢呼吸加深加快,【观察指标】,呼吸频率、幅度 血气指标：动脉血氧分压(PaO2)、动脉二氧化碳分压(PaCO2)、动脉血pH,【实验方法与步骤】,家兔称重、麻醉、固定,气管插管、颈总动脉插管,联接呼吸换能器,记录呼吸波、取血作血气分析（对照）,增大无效腔,记录呼吸波、取血作血气分析,吸入CO2气,吸入N2气,记录呼吸波、取血作血气分析,耳缘静脉注入3%乳酸溶液2ml,记录呼吸波、取血作血气分析,记录呼吸波、取血作血气分析,【注 意 事 项】,1、麻醉动物时，应缓慢推注麻药，当动物自然倒下，牵拉后肢无抵抗感及肌肉松驰，表明麻药注入量已足够。有的家兔吃食过多，如给足按体重计算的麻药会导致麻

25、醉过深，抑制呼吸或死亡2、每完成一项观察步骤后，必须等呼吸恢复到正常水平，才可进行下一项目的实验3、为测定出准确的血气指标变化，应严格按要求取血,1.外周化学感受器 适宜刺激：对PO2、PCO2、H+高度敏感(对PO2敏感，对O2含量不敏感)，且三者对化学感受器的刺激有相互增强的现象,【分析讨论】,颈动脉体和主动脉体化学感受性反射,PO2 H+PCO2 等,颈动脉体和主动脉体外周化学感受器（+）,窦、迷走神经,孤 束 核,心血管中枢兴奋性改变,呼吸中枢（+）,心率、冠脉舒 心输出量,皮肤、内脏 骨骼肌血管缩,心率、心输出量、外周阻力,外周阻力心输出量,血 压,呼吸加深加快,间接,2.中枢化学感

26、受器 适宜刺激：对H+高度敏感，不感受缺O2的刺激。因血液中H+不易透过血-脑屏障，乃通过CO2易透过血-脑屏障进入脑脊液:CO2H2OH2CO3H+HCO3-发挥刺激作用,(1)CO2：CO2 1时呼吸开始加深；4时呼吸加深加快,肺通气量1倍以上;6时肺通气量可增大6-7倍;7以上呼吸减弱=CO2麻醉。CO2呼吸减慢（过度通气后可发生呼吸暂停）。,3.CO2、H+和低O2对呼吸运动的调节,特点：CO2兴奋呼吸的作用,以中枢途径为主；但因脑脊液中碳酸酐酶含量很少，故潜伏期较长；CO2兴奋呼吸的中枢途径是通过H+的间接作用(血液中的H+不易透过血-脑屏障)；CO2兴奋呼吸的外周途径虽然为次，但当

27、动脉血PCO2突然增高或中枢化学感受器对CO2的敏感性降低（CO2 麻醉）时，起着重要作用。,(2)H+:H+呼吸加强 H+呼吸抑制 H+呼吸抑制,机制:类似CO2 特点:主要通过刺激外周化学感受器而引起的 H+对呼吸的调节作用PCO2 H+呼吸CO2排出过多PCO2限制了对呼吸的加强作用呼吸抑制甚至停止。,(3)低O2,导致外周化学感受器兴奋，从而引起呼吸中枢兴奋,（4）增大无效腔：不参与肺泡和血液间的气体增多，无效腔气量增多，肺泡通气量减少，PaCO2、PaO2,从而刺激外周化学感受器和中枢化学感受器，反射性引起呼吸加深加快。PH正常（5）吸入CO2：肺泡中CO2，使血液中CO2，从而使P

28、a CO2，刺激外周化学感受器，血浆中H2CO3，使PH值，使脑脊液中H+，刺激中枢化学感受器，两者共同反射性引起呼吸加深加快，肺通气量,（6）吸入N2：肺泡中N2，O2，使PaO2,从而刺激外周化学感受器反射性引起呼吸加深加快（7）注入乳酸：血液中乳酸，H+浓度，使PH值，刺激外周和中枢化学感受器，反射性引起呼吸加深加快,1、请解释缺氧、二氧化碳增多和pH值下降时呼吸运动变化的机制 2、临床对于低氧血症伴有CO 2 潴留的病人，一般给予持续低流量氧而避免长时间吸入100%的纯氧。为什么？,【复习思考题】,尿液生成的影响因素及药物作用,1、学习膀胱插管术和尿液的收集方法2、观察血容量增加、血糖

29、增加、速尿等因素对尿液生成的影响，并分析其作用机制,【目 的 与 要 求】,【实验原理】,机体对尿生成的调节是通过影响尿生成的三个基本过程实现的,一、肾小球的滤过作用,1、肾小球有效滤压=肾小球毛细血管 血压（血浆胶体渗透压+囊内压）,2、肾血浆流量,1、肾内自身调节,（1）球-管平衡：正常情况下重吸收率65-70%,（2）小管液溶质浓度：渗透性利尿,二、肾小管、集合管的重吸收和排泌功能,2、神经体液调节,（1）肾交感神经（2）ADH（3）肾素-血管紧张素-醛固酮系统（4）心房钠尿肽,【观察指标】,尿量 血压,1、家兔常规操作：称重、麻醉、固定2、建立输液通道：耳缘静脉穿刺，滴注生理盐水，10

30、滴/分钟3、颈部手术：气管插管，颈总动脉插管，连接BL-420生物信号采集处理系统，监测血压4、膀胱插管术,记录尿量5、按顺序依次添加各处理因素,【实验方法与步骤】,实 验 装 置 示意图,某些因素对兔尿生成的影响,【注意事项】,(1)膀胱插管过程中，动作应轻柔，以免 膀胱充血、出血(2)经静脉给药前，针管内的空气务必排净(3)每个观察项目均应有对照,【分析讨论】,一、生理盐水20ml：尿量生成增加1、血容量GFR原尿生成2、血容量ADH肾小管对水重吸收 3、血容量肾素ADS 4、血容量肾素 AngIIGFR,二、20%葡萄糖溶液：尿量生成增加 渗透性利尿：近端小管液中某些物质未被重吸收导致小

31、管液渗透浓度升高可保留一部分水在小管内，使小管液中的Na+被稀释而浓度降低。因此小管液和上皮细胞内的Na+的浓度梯度减小，从而使Na+的重吸收减少或停止，Na+的重吸收减少小管液中较多的Na+又通过渗透作用保留相应的水结果使尿量增加、Nacl排出量增多，这种情况称为渗透性利尿。,三、去甲肾上腺素：尿量生成减少 1、肾血管收缩GFR原尿生成 2、交感N兴奋肾素ADS保Na增强,五、垂体后叶素：尿量生成减少垂体后叶素主要包含ADH及催产素ADH肾小管对水重吸收，尿量减少,四、速尿：尿量生成增加特异性抑制髓袢升支粗段髓质和皮质部的K+-Na+-2Cl共同转运系统，减少NaCl的再吸收，降低肾对尿液的

32、稀释和浓缩功能,六、快速放血：尿量生成减少1、GFR原尿生成2、ADH肾小管对水重吸收 3、交感N兴奋肾素ADS保Na增强4、交感N兴奋肾素 AngIIGFR,七、快速补液：尿量生成增加 与六快速放血的机制刚好相反,【复习思考题】,速尿与高浓度葡萄糖的利尿作用有何区别？,实验性家兔高钾血症及其治疗,认识血钾进行性升高的不同阶段，钾对心肌细胞的毒性作用观察高钾血症时家兔心电图变化的特征了解高血钾症的基本治疗方法和抢救,【目的与要求】,【观 察 指 标】,血钾浓度心电图变化,【实验原理】,血清钾高于5.5mmol/L为高钾血症高钾血症对机体的危害主要表现在心脏。高钾血症时的心电图表现为:（1）P波

33、和QRS波波幅降低,间期增宽,S波加深（2）T波高尖：高钾血症早期即可出现（3）多种类型的心律失常,高钾血症的抢救可采用:（1）注射Na+,Ca 2+溶液对抗高血钾的心肌毒性（2）注射胰岛素、葡萄糖,以促进K+移入细胞,家兔全麻固定，颈部手术,心电描记：左前肢(黄)，右前肢(红)，左后肢(绿)，右后肢(黑),耳缘静脉推注肝素生理盐水溶液2 ml,测定实验前的血钾浓度，记录正常对照心电图,【实验方法与步骤】,滴注2氯化钾(2030滴min)，观察心电图波形变化，当出现P波低压增宽、QRS 波群低压变宽和高尖T波时测定血钾浓度，记录心电图,停止滴注氯化钾，耳缘静脉10氯化钙2m1/kg实施抢救，心

34、电图基本恢复正常时记录心电图并测定血钾浓度,注入致死剂量的l0氯化钾(8mlkg)，开胸观察心肌纤颤及心脏停跳时的状态,【注意事项】,1、保持动静脉导管的通畅：每次由颈总动脉取血后，均用肝素生理盐水溶液2m1冲洗管道内的余血，防止导管内血液凝固2、正确记录心电图波型：有时家免T波高出正常值0.5mV或融合在S一T段中而不呈现正向波，这与动物个体差异有关，此时要变换导联。若在头胸导联、肢体标导联及avF导联上描记出正向T波就可进行实验，否则需更换动物,一、高钾血症的概念,血清钾浓度大于5.5mmol/L,高钾血症时，体内总钾量一定增多吗？,【分析讨论】,二、原因和机制,钾的跨细胞分布异常钾的摄入

35、过多肾脏排钾障碍,1、钾的跨细胞分布异常,酸中毒胰岛素不足 见于糖尿病某些药物 受体阻滞剂、洋地黄类药物大面积烧伤、肌肉组织大量损伤、挤压综合症、血型不合的输血、严重缺氧,2、钾的摄入过多,治疗低钾血症时，静脉补钾 浓度过高、速度过快静脉输入大量青霉素钾盐大量输入库存血,3、肾脏排钾障碍,肾小球滤过率显著下降，主要见于急性肾功能衰竭的少尿期远曲小管、集合小管的泌钾功能受阻，如肾上腺皮质功能不全、长期单独使用保钾利尿剂等,三、对机体的影响,对神经肌肉的影响对心脏的影响对酸碱平衡的影响,Et,Em,1、对神经肌肉的影响,随着血钾浓度的逐步升高，神经肌肉的兴奋性先升高后降低,最初表现为肌肉刺痛、感觉

36、异常，逐渐发展为全身软弱无力、软瘫，重者可导致呼吸肌麻痹甚至呼吸骤停。,兴奋性 先后传导性收缩性自律性,2、对心脏的影响,+30,0,-30,-60,-90,QRS波 增宽 幅小ST段 抬高 延长T波 高尖,心电图的改变及机制,10,9,8,7,5,3.5,3.0,2.5,血钾浓度(mmol/L),normal,高钾血症,3、对酸碱平衡的影响,代谢性酸中毒反常性碱性尿,四、防治的病理生理基础,消除和控制病因降低血钾浓度 限制钾的摄入；加速钾的排出，如口服阳离子交换树脂加速肠道排出K+，腹膜透析、人工肾血液透析等 用离子拮抗剂对抗高钾的心肌毒性 Ca2+有助于恢复兴奋性和收缩性 Na+有助于恢复

37、传导性,【复习思考题】,1.家兔输入高浓度氯化钾溶液后，心电图变化的机理2.氯化钙、碳酸氢钠和葡萄糖-胰岛素溶液救治高钾血症的机理,离体小肠平滑肌生理特性,学习哺乳动物离体灌流法观察消化道平滑肌的一般生理特性及某些因素对它的影响,【目 的 与 要 求】,哺乳类动物消化道平滑肌具有肌肉组织共有的特性，如兴奋性、传导性和收缩性等，但也有其特殊性，即兴奋性较低，收缩缓慢，伸展性强，具有自动节律性、紧张性，且对化学、温度和机械牵张刺激较敏感等。上述特性可维持消化道内一定压力，适合于消化道内食物的理化变化,【实验原理】,消化道平滑肌受中枢神经系统和体液因素的调节，接受胆碱能神经和去甲肾上腺素能神经双重支

38、配,胃肠平滑肌以胆碱能神经支配占优势,分布有高密度的M胆碱受体,同时也有一定密度的和受体分布 乙酰胆碱等拟胆碱药可兴奋M受体,引起回肠平滑肌收缩,张力增强,收缩幅度加大。M受体阻断药则可拮抗M受体激动药收缩回肠平滑肌的作用,拟肾上腺素药则可激动和受体,引起回肠平滑肌舒张,张力下降,【观 察 指 标】,小肠平滑肌收缩频率和幅度,【实 验 方 法 与 步 骤】,一、恒温浴槽的准备 恒温工作点定在37 C左右，实验前将台氏液加入浴槽内（灌流浴槽高度的2/3处），开电源开关，使其加热，将充满混合气体的气囊与L型通气管相连以备供气。打开B夹可使灌流浴槽中的液体流出，打开A夹则使浴锅中的台氏液体流入灌流浴

39、槽,二、离体小肠平滑肌标本制备 用木棒猛击兔头部，使其昏迷，立即剖开腹腔，找出胃幽门与十二指肠交界处，由此取长20cm左右肠管。先将与该肠管相连的肠系膜沿肠缘剪去，再将肠管两端分别用线结扎，于结扎两端内侧剪断，取出肠段，置于台氏液中轻轻漂洗将肠内容物洗净，将肠管分成数段，每段长23cm，两端各系一条线，保存于供氧的37C的台氏液中,三、标本安装 取一段肠管，一端系于通气管挂钩，另一端系于张力换能器上，调节张力传感器的高度，使标本连线刚好垂直而又不绷紧为宜，并不与浴槽管壁、通气管接触，以免摩擦影响记录，调节供气管上的螺旋夹，控制通气量，使O2+CO2混合气从通气管前端呈单个而不是成串逸出，约20

40、40个/min气泡,四、施加各种影响因素 按下表施加各影响因素，BL-420E生物机能实验系统记录实验结果,各影响因素对小肠平滑肌收缩曲线的影响,【注 意 事 项】,1、实验过程中，必须保证标本供氧（通气）及浴槽内台氏液的恒温（38C）2、灌流浴槽内的液面高度应保持恒定3、放大器零点调好后不要再移动旋钮，以免影响基线4、药物如效果不明显，可适当加大药物剂量5、每一实验项目完成后，立即放掉含药液的台氏液，并冲洗多次，以免平滑肌出现不可逆反应,【分析讨论】,一、25台氏液温度代谢 1、兴奋性收缩频率2、收缩频率3、收缩幅度,二、乙酰胆碱激动平滑肌上的M受体 1、(+)生理性钠泵静息电位兴奋性收缩频

41、率2、钙内流：(a)兴奋性收缩频率；(b)收缩频率；(c)收缩幅度,三、阿托品阻断平滑肌上的M受体，其机制与乙酰胆碱相反,四、肾上腺素激动平滑肌上的 受体 1、(-)生理性钠泵静息电位兴奋性收缩频率2、(+)钾外流静息电位兴奋性收缩频率3、(+)：(a)钾外流静息电位兴奋性收缩频率(b)钙外流静息电位兴奋性收缩频率(c)钙外流胞浆钙收缩幅度(d)(+)钙泵胞浆钙收缩幅度,五、氯化钙1、钙内流：(a)兴奋性收缩频率；(b)收缩频率；(c)收缩幅度2、钙与肌钙蛋白结合收缩幅度,六、盐酸1、钙内流：(a)兴奋性收缩频率；(b)收缩频率；(c)收缩幅度2、钙释放收缩幅度3、钙与肌钙蛋白结合收缩幅度,七

42、、氢氧化钠与盐酸的作用相反,试从受体学说分析乙酰胆碱、阿托品、肾上腺素对肠道平滑肌的药理作用,【复习思考题】,有机磷酸酯类的中毒与解救,观察实验动物在有机磷酸酯类中毒时的症状，以及中毒时血液胆碱酯酶活力的抑制情况 根据阿托品、解磷定对有机磷酸酯类中毒的解救效果及对血液胆碱酯酶活力的影响，分析两药的解毒原理,【目的与要求】,有机磷酸酯类通过多种途径吸收后，与胆碱酯酶呈难逆性结合，抑制胆碱酯酶活性，使其丧失水解乙酰胆碱的能力，造成胆碱能神经末梢释放的乙酰胆碱大量堆积，产生一系列急性拟胆碱中毒症状,【实验原理】,阿托品为选择性的M胆碱受体阻断剂，很大剂量时还可阻断Nl受体，可与乙酰胆碱竞争结合M、N

43、l 受体，阻断乙酰胆碱对这些受体的激动作用，因而可以有效地解除有机磷酸酯类中毒的M样症状和N样症状，是解救有机磷酸酯类中毒的对症治疗药物,碘解磷定(PAM)是有机磷酸酯类中毒的特效解救药，因其可使胆碱酯酶复活，恢复胆碱酯酶水解乙酷胆碱的能力，因而能彻底解除有机磷酸酯类农药急性中毒的症状和体征，但其对循环和呼吸的解救作用起效较慢，临床上常需配合阿托品类药物一起使用。是解救有机磷酸酯类中毒的对因治疗药物,【观察指标】,瞳孔唾液 呼吸 大小便 肌张力 震颤 胆碱酯酶活力,（1）家兔2只,称重,记录用药前的观察指标.耳缘静脉取血,测定 AChE活力（2）分别腹腔注射3敌百虫3ml/Kg,出现明显中毒症

44、状,记录观察 指标。耳缘静脉取血,测定AChE活力（3）解救：甲兔 耳缘静脉注射0.2硫酸阿托品溶液1.0 mlkg;乙兔 耳缘静脉注射2.5解磷定2.0 mlkg 记录观察指标.耳缘静脉取血,测定AChE活力,【实 验 方 法 与 步 骤】,有机磷酸酯类中毒与解救的实验结果,编号 体重kg 用药用量ml 瞳孔mm 唾液 呼吸 大小便 肌张力 震颤,甲 用药前 敌百虫 阿托品,乙 用药前 敌百虫 解磷定,步骤 操 作 标准管(m1)测定管(m1)空白管(m1),12345678910,pH7.2磷酸盐缓冲液全血37水浴预热3min乙酰胆碱底物应用液37水浴预热20min碱性羟胺溶液乙酰胆碱底物

45、应用液室温静置2min33.3盐酸溶液10三氯化铁溶液,1.00.11.04.02.02.0,1.00.11.04.02.02.0,l.00.14.01.02.02.0,全血胆碱酯酶活力的比色测定,注：以1m1血液在规定条件下能分解lmo1乙酰 胆碱为1个胆碱酯酶活力单位。,读取各管吸光度计算:,(1)敌百虫属于剧毒类杀虫剂，且可从皮肤吸收，如与手等接触后，应立即用水清洗(2)给家兔实施腹腔注射敌百虫后，15min时仍未出 现中毒症状，可再追加13剂量的敌百虫溶液(3)本实验为分析阿托品和解磷定的作用机制而设。应切记，在临床实际中，须将阿托品与解磷定配 合使用，才能获得最好的解毒效果（4）用苦

46、味酸标记实验家兔,【注意事项】,一、有机磷酸酯类 中毒机制,有机磷酸酯类+AChE,磷酰化AChE,水解 ACh,ACh,【分析讨论】,瞳孔缩小、口吐白沫、呼吸困难、大汗淋漓、失禁、心率减慢、血压下降,M样症状,N样症状,肌束颤动，严重肌无力,结合M胆碱受体，竞争的拮抗ACh或胆碱受体激动药对M胆碱受体的激动作用,阿托品,二、救治原则,1、解除病因，减少吸收：撤离现场，洗眼，洗皮肤，洗胃导泻,2、药物解救：早期、足量、多次、联合,解磷定,磷酰化AChE+解磷定,磷酰化解磷定+AChE,水解ACh,ACh,【复习思考题】,1、论述有机磷酸酯类中毒的治疗原则与治疗原理,2、有机磷酸酯类沾染皮肤后可

47、否用肥皂洗手？,香烟的毒性作用,1、熟练掌握小鼠正确捉拿2、观察烟对小鼠的毒性作用,并分析其机制,【目的与要求】,【实验原理】,烟碱（尼古丁）兴奋自主神经节和神经肌肉接头的N胆碱受体，呈双向作用，开始短暂兴奋持续抑制,【观察指标】,肌肉活动呼吸末梢循环情况是否死亡,1、烟碱制备,【实验方法与步骤】,2、取小鼠2只：甲鼠 腹腔注射生理盐水0.5m1 乙鼠 腹腔注射烟过滤液0.5m1,香烟滤液对小鼠的毒性作用,编号 肌肉活动 呼吸 末梢循环 死亡,甲鼠,乙鼠,小鼠正确捉拿方法,【注意事项】,烟碱（nicotine，尼古丁）是烟叶（tobacco）的重要成分，具有N胆碱能受体激动作用，可兴奋自主神经

48、节和神经肌接头的N胆碱受体，其对神经节N受体和神经肌接头N受体的作用呈双相性，即小剂量激动N受体，大剂量阻断N受体 本实验中给实验动物腹腔注射烟碱溶液，烟碱作用于自主神经节、神经肌肉接头，先短暂性兴奋，使小鼠精神紧张，肌肉活动增强，呼吸加快；随后随着烟碱浓度的增大，出现持续性抑制现象，小鼠活动减少、呼吸困难、末梢循环衰竭最终死亡,【分析讨论】,【复习思考题】,通过这次实验，对“吸烟有害健康”这句话你是怎么理解的,急性中毒性肾功能不全,复制中毒性肾功能不全的动物模型观察汞中毒家兔的一般状况，肾功能的变化以及肾脏的形态改变。,【目 的 与 要 求】,血液循环中的重金属氯化汞（HgCl2）可被肾小球

49、滤过进入肾小管，经肾小管上皮细胞重吸收并富集于上皮细胞内，造成急性肾小管坏死，形成急性中毒性肾功能不全。主要表现为进行性的氮质血症、高钾血症、酸中毒、少尿或无尿。本实验采用给家兔注射氯化汞溶液造成急性肾小管坏死,复制急性肾功能不全的动物模型,通过观察动物的血气、酸碱、血尿素氮、尿量的变化,学习急性肾衰时机体内环境的变化,【实验原理】,【观 察 指 标】,动物一般状况 尿量 尿蛋白 血清尿素氮 肾脏形态,【实 验 方 法 与 步 骤】,复制急性中毒性肾功能不全模型,麻醉，背位固定,颈部手术,气管插管颈总动脉插管,取血5毫升,血清尿素氮测定,膀胱插管,收集尿液,尿蛋白定性测定,尿沉渣检测,耳缘静脉

50、快速注射37生理盐水(10ml/kg)静脉注射速尿(5mg/kg),分别记录注射后5min、10min、20min、30min尿量,打开腹腔，取出肾脏，观察肾脏外观及切面形态学改变,【注 意 事 项】,1、加血清、标准液等试剂量应准确2、加入试剂之后，不超过12分钟，即应放入沸中水浴3、煮沸及冷却时间应准确，否则颜色反应消退,【分析讨论】,肾 性 急 性 肾 衰 竭,由于肾脏器质性损害所致肾衰竭。约占40%左右原因：1.急性肾小管坏死（最重要、最常见）2.广泛肾小球疾病 3.肾间质与肾血管疾病,急 性 肾 小 管 坏 死,约占肾性急性肾衰竭的80%原因：1.肾脏缺血与再灌注损伤（由肾前性急性肾