生物化学经典实验-糖的定量测定.ppt

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1、,实验一 糖类的定量测定3，5-二硝基水杨酸比色定糖法,一、实验目的 1、掌握3,5-二硝基水杨酸法定糖的原理及方 法。2、用3,5-二硝基水杨酸比色法测定山芋粉中总糖。3、熟悉分光光度计的原理及使用方法。,还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。,二、实验原理,3,5-二硝基水

2、杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物：在一定范围内，棕红色物质颜色的深浅程度与还原糖的量成正比。因此，我们可以利用比色法测定样品中还原糖以及总糖的含量。该法是半微量定糖法，操作简便、快速，杂质干扰较少。,三、实验操作 1、样品总糖的水解及提取 准确称取山芋粉1克，放入大试管中，加入10ml 6N HCl和15ml蒸馏水，混匀。在沸水浴加热30min后，用KI-I2溶液检查水解程度。完全水解后,冷却并加入酚酞试剂一滴,以10%NaOH中和至溶液呈微红色,先用双层纱布过滤,再用滤纸过滤并定容至100ml。精确吸取上述溶液10ml放入100ml容量瓶、稀释至刻度,备用。,2、制作葡萄糖标准曲

3、线,将以上各管溶液混匀后，用分光光度计(520nm)进行比色测定，用空白管溶液调零点，记录光密度值，以葡萄糖浓度为横坐标，光密度为纵坐标，绘制出标准曲线。3、样品中含糖量的测定 取4支大试管，分别按下表加入各种试剂。,2、制作葡萄糖标准曲线,测定样品中含糖量时各试剂的用量,将各管混匀后,按制作标准曲线时同样的操作测定各管的光密度,在标准曲线上查出相应的糖含量,按下述公式计算出山芋粉总糖百分含量。,3、样品中含糖量的测定,1.实验过程中所有的试管要干净,加入各种试剂量要准确。2.试剂不可倒出试剂瓶，用干净的移液管吸取，用后盖好瓶塞，防回原处。3.分光光度计使用：溶液不要倒太多;毛边不要对着透光处;用后用自来水冲洗干净,防回原处。4.移液管使用：有色看外边缘,无色看中间凹处。5.实验室中所有的仪器上面不能放置烧杯、试管、试剂瓶等，以防试剂污染仪器。,四、实验要求,