分子生物学课件第十四章.ppt

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1、分 子 生 物 学 实 验,分子生物学实验综合规程分子生物学实验常用仪器设备分子生物学基本技术 实验准备,分子生物学实验综合规程,上课时间提前5分钟进入实验室；不迟到、不早退，无故旷课累计3次没成绩；请假须医院病假条或班主任签字的假条；上课时需穿实验服，不许在实验室内吃东西，不背着书包做实验，不穿拖鞋进实验室；实验课期间不许打闹、闲聊等，不大声喧哗，保持课堂纪律，实验过程中，至始至终需全组同学一起完成，任何人中途不得缺席。必须做到课前认真预习，课间做好实验记录、课后详细总结实验结果并按时提交实验报告；,公用试剂不得污染！每次都必须用新枪头。公用台上公用试剂不得私自拿到自己实验台上；不得私自拿走

2、或乱放别人的实验物品、实验产品；不得擅自使用实验室中非本实验仪器、试剂。实验废液不随便倾倒，随时保持实验台的整洁；爱护实验器材，实验器材损坏必须按规定赔偿；实验前按仪器性能与要求，进行仪器预热；实验完成后检查电源插座，用完仪器后必须复位，仪器清洁干净、摆放整齐；每组实验物品齐全，需教师验收，枪量程要归位，发现问题及时报修；,每位同学负责自己实验台面和柜体的卫生，值日生负责公用实验台、地面等处卫生；每次轮到打扫卫生的小组，要认真做好值日工作，离开实验室须向教师声明；同学与老师之间、同学与同学之间、实验班与实验班之间一定要互相协作配合保持公用房间卫生，注意门窗水电的安全。遵守通用的实验室规则。违反

3、上述任何一条规则责任自负，并要扣分，造成损失要照价赔偿。,实 验 成 绩 实验技能 20分实验报告 20分实验态度 15分实验室常识 15分实验实施 30分,分子生物学实验教程 自编 分子生物学实验指导 魏群 高等教育出版社分子生物学实验指导 刘进元 清华大学出版社,参 考 书,实 验 内 容,实验一 分子生物学实验的基本知识和基本技能培训实验二 大肠杆菌感受态细胞的制备实验三 质粒DNA的转化实验四 碱裂解法提取质粒DNA实验五 琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验六 PCR基因扩增,分子生物学实验综合规程分子生物学实验常用仪器设备分子生物学基本技术4 实验准备,样品、试剂和材料等的保存,温度控制系

4、统-冰箱：4、-20、-70,纯 水 器,恒温培养箱,细菌平板的培养,恒温空气摇床,菌体的培养,灭菌器,培养基、试剂、耗材等的灭菌,PCR 仪,PCR 扩增、保温实验等,恒温水浴及微量加热器,保证实验温度的恒定,电 泳 仪,电泳时提供电压和电流,电泳槽,核酸或蛋白质的电泳定性分析时的凝胶支架,凝胶成像系统,电泳结果的定性和定量分析,紫外分析仪,电泳结果的定性分析,台式高速冷冻离心机,样品的分离,落地式高速冷冻离心机,样品的分离,分光光度计,样品的定量测定,超净工作台,提供洁净工作环境,电子天平,样品、试剂等的称量,精确的pH值测定,pH 计,液体试剂的精确取量,移 液 器,制冰机,分子生物学实

5、验综合规程分子生物学实验常用仪器设备分子生物学基本技术3.1实验规范训练仪器的操作3.2实验规范训练量程的选择3.3实验规范训练标签3.4实验规范实验操作4 实验准备,3.1 实验规范训练仪器的操作,要求：仪器在未经培训前，不得擅自使用 严格按操作规程使用仪器，有些仪器必须有教师在场时才能使用，并由教师操作 违反规定的使用者，造成的后果由使用者承担,3.2 实验规范训练量程的选择,天平烧杯、量筒、容量瓶、试剂瓶不同规格,量程的选择移液器,3.3 实验规范训练标签,所用的器皿上一定要做标记标签一定要贴到固定的位置标签上应包括具体的名称、组别、实验班、日期,3.4 实验规范实验操作,详细记录和分析

6、实验结果并按时提交实验报告实验中一定要处处用心、勤动手，多问为什么仔细操作和观察保留好每一步的实验样品，在确准的情况下才能当废液扔掉,分子生物学实验综合规程分子生物学实验常用仪器设备分子生物学基本技术 实验准备4.1 清点和熟悉常用玻璃器皿、耗材等4.2 洗涤本学期实验用玻璃器皿4.3 配制试剂4.4 高温灭菌,4 实验准备4.1 清点和熟悉常用玻璃器皿、耗材等4.1 洗涤本学期实验用玻璃器皿4.3 配制试剂1）0.1 mol/L CaCl2 100 mL2）5 mol/L NaOH 100 mL 胶塞 3）LB液体培养基 100 mL 胰蛋白胨（typtone)1g 酵母提取物（yeast

7、extract)0.5g NaCl 1g 加部分水溶解后加20L 5 mol/L NaOH，定容到100 mL,4）10%(w/v)SDS储液 50 mL，室温保存5）1 mol/L Tris 200 mL6）2 mol/L HCL 100 mL7）0.5 mol/L EDTA 100 mL 80 mL水中加18.61g EDTA-Na2H2O，用NaOH调 pH 8（约需2g NaOH），后定容至100 mL8）5xTAE 1000 mL9）70%乙醇 500 mL10）Amp：100 mg/mL 20ml，分装每管 1 mL，200C保存,4.4 高温灭菌LB液体培养基 1.5mL离心管 2瓶/组枪头/1组：1mL 1盒，200uL 1盒培养皿 12套/组 无菌水 100 mL/班 0.1 mol/L CaCl2,