临床免疫检验仪器.ppt
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1、第十一章 临床免疫检验仪器,学习要求,掌握临床免疫检验常用仪器的特点;熟悉临床免疫检验常用仪器的分析原理;了解临床免疫检验常用仪器的使用与维护。,主 要 内 容,酶免疫分析仪,发光免疫分析仪,放射免疫分仪析仪,免疫浊度分析仪,时间分辨荧光免疫分析仪,第 一 节 酶免疫分析仪,一、酶免疫技术的分类二、酶免疫分析仪的类型、工作原理及结构三、酶免疫分析仪的性能评价及维护保养四、酶免疫分析仪的临床应用,根据是否需要分离结合与游离的酶标记物,可分为:酶扩大免疫测定 非均相酶免疫测定 克隆酶供体免疫测定 液相酶免疫法 均相酶免疫测定 固相酶免疫法(ELISA),一、酶免疫技术的分类,基本概念,二、酶免疫分
2、析仪的类型、工作原理及基本结构,酶标仪 一般简单的酶标仪只有读数、数据处理的功能,还需要配置孵育箱,洗板机,人工操作步骤繁琐。全自动酶联免疫系统集加样品、加试剂、孵育、震荡、洗板和酶标仪功能于一体。,(一)酶免疫分析仪的类型-1,微孔板固相酶免疫测定仪器(酶标仪)半自动微孔板ELISA分析仪全自动微孔板ELISA分析仪管式固相酶免疫测定仪器小珠固相酶免疫测定仪器磁微粒固相酶免疫测定仪器等,(一)酶免疫分析仪的类型-2,1.微孔板固相酶免疫测定仪器(酶标仪)有单通道和多通道两种类型 工作原理与主要结构和光电比色计相同和不同之处在于:比色液的容器是塑料微孔板 以垂直光束通过待测液,酶标仪的工作原理
3、图,2.自动化酶免疫分析系统,在酶标仪的基础上再加上配置:加样系统 温育系统 洗板系统 判读系统 机械臂系统 液路动力系统 软件控制系统,系统优势-1,自动化程度高:前后处理一体化设计,减少人与样品的接触机会,降低污染。能进行各种自动安全检测。稳 定:只要避免人为操作错误,可连续数 年良好工作。准 确:不存在交叉污染,确保结果准确。,系统优势-2,高 速:加注、读板速度快扩展性:软件可升级,样本量增加,可联 机使用用户做主更多:开放式试剂;WINDOW操作系统;中/英/日自选操作界面;自定义编程;自动/自定义时间表;无限存档。,三、酶免疫分析仪的性能评价及维护保养,(一)性能评价,1滤光片波长
4、精度检查及其峰值测定;2灵敏度和准确度;3通道差与孔间差检测;4零点漂移;5精密度评价;6线性测定;7双波长评价;,三、酶免疫分析仪的性能评价及维护保养,(二)维护保养,重点:光学部分 1滤光片波长精度检查 2通道差与孔间差检测,四、酶免疫分析仪的临床应用,.病原体及其抗体的检测 2.各种免疫球蛋白和细胞因子、补体 3.肿瘤标志物 4.多种激素 5.药物和毒品等。,第二节 发光免疫分析仪,将发光反应与免疫反应相结合的免疫分析方法采用微量倍增技术,敏感性度,特异性好,所用试剂安全、稳定;检测范围广泛,从传统的蛋白、激素、酶乃至药物均可检测发展迅速,各种仪器不断出现,自动化程度越来越高。,一、发光
5、免疫的分类-1,酶促化学发光:辣根过氧化物酶系统 碱性磷酸酶系统 黄嘌呤氧化酶系统非酶促化学发光:吖啶酯系统 草酸酯系统 三价铁-鲁米诺系统,闪光(Flash)发光时间在数秒内,如吖啶酯 以原位进样(In Situ Injector)和时间积分法测量辉光(Glow)发光时间在数十分钟以上,如:-HRP-Luminol系统-AP-AMPPD系统-黄嘌呤氧化酶系统 无须原位进样、以速率法测量。,按发光持续时间,一.发光免疫的分类-2,时间,发光信号,辉光坪区,速率法测量,原位进样,积分法测量,闪光尖峰,闪光-辉光测量方式差别,消除放射性危害无半衰期限制,试剂稳定性、有效期延长实现连续、动态、重复测
6、定,优越性-1,闪光-辉光测量方式差别,适合于复合标记系统多指标测定操作简单,反应快,易实现自动化灵敏度和线性范围超过以往技术,优越性-2,闪光-辉光测量方式差别,三.发光免疫技术分类,根据示踪物检测的不同而分为:荧光免疫测定 电化学发光免疫测定 化学发光免疫-再根据标记物的不同又分:-化学发光免疫分析-微粒子化学发光免疫分析-电化学发光免疫分析-化学发光酶免疫分析-生物发光免疫分析 临床以前三者较为常用。,三.发光免疫分析的基本测定方法,根据发光反应检测方式的不同可分为 1液相法 反应在液相中进行,经离心或分离措施后,再进行测定发光强度 2固相法 将抗原抗体复合物结合在固相载体(如聚苯乙烯管
7、)或分离介质上(如磁性微粒球等),再进行测定发光强度 3均相法 同均相酶免疫法,不需要经过离心或分离步骤,即可直接进行发光强度检测,夹心法特点,分析灵敏度(最低检测限)(95%可信度):S0+2SD在该曲线上所对应的浓度值。功能灵敏度:测定误差(变异)20%的最低可检测浓度。线性范围:功能灵敏度-变异20%的最高检测浓度。相关系数:0.99的曲线范围。,四、发光免疫分析仪的种类、工作原理和基本结构,(一)全自动化学发光免疫分析系统 采用化学发光技术和磁性微粒子分离技术相结合的免疫分析系统,(一)全自动化学发光免疫分析系统,1仪器测定原理,该类分析技术有两种方法:-竞争法 测定小分子抗原物质-夹
8、心法 测定大分子抗原物质,竞争法特点,分析灵敏度(最低检测限)(95%可信度):S0-2SD在该曲线上所对应的浓度值。功能灵敏度:(变异)20%的最低可检测浓度。线性范围:功能灵敏度-变异20%的最高检测浓度。相关系数:0.99的曲线范围。,(一)全自动化学发光免疫分析系统,一般由主机和微机两部分组成:(1)主机部分:包括 原材料配备部分:反应杯、样品盘、试剂盘、纯净水、清洗液、废水在机器上的贮存和处理装置。液路部分:过滤器、密封圈、真空泵、管道、样 品及试剂探针。机械传动部分:传感器、运输轨道。光路检测部分:光电倍增管和线路控制板。,2仪器组成,全自动化学发光免疫分析系统,66,IMMUNO
9、LOGY,(一)全自动化学发光免疫分析系统,2仪器组成,(2)微机系统 程控操作 指示判定 数据处理 故障诊断 自动监视,(二)全自动微粒子化学发光免疫分析系统,采用微粒子化学发光技术对人体内的微量物质以及药物浓度进行定量测定 具有高度的特异性、高度的敏感性和高度的稳定性等特点,(二)全自动微粒子化学发光免疫分析系统,1.分析方法 采用磁性微粒作为固相载体,以碱性磷酸酶作为发光剂,扩大测定的范围。以免疫测定方法为基础:-竞争法-夹心法-抗体检测等,(二)全自动微粒子化学发光免疫分析系统,2.分析过程 抗原抗体结合;加入碱性磷酸酶标记的抗体;形成固相包被复合物;在电磁场中进行23次洗涤分离;加入
10、底物;通过光量子阅读系统记录发光强度;在标准曲线上计算出待测抗原的浓度。,(二)全自动微粒子化学发光免疫分析系统,3.仪器组成 微电脑控制 样品处理系统 实验运行系统 中心供给和控制系统,(三)全自动电化学发光免疫分析仪,电化学发光免疫分析技术在新一代实验室免疫检测技术中很有特点,它在20世纪如年代一问世就引起广泛的关注德国公司在链酶亲和素生物素包被技术基础上,引用电化学发光免疫分析技术并开发出相应的全自动电化学发光免疫检测系统,1.测定原理及过程,待测标本与包被了抗体的顺磁性微粒和发光剂标记的抗体共同温育(形成磁性微珠包被抗体抗原发光剂标记抗体复合物)吸人流动室,缓冲液冲洗 磁性微粒流经电极
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