蚕豆病鉴定的实验设计.ppt
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1、年级、专业、班级:2010级临床三、四大班实验课时间:2012年4月18日实验室:第二实验室组别:第四组组员:梁婧、和珍、李艳、张玲艺、解汐卓、成春梅、吴皎、杨紫燕、王骁、张庆昆报告人:吴皎,患儿,男性,3岁,因面色苍白伴血尿1天入院。1天前食用新鲜蚕豆后,今日出现恶心、呕吐、排尿呈酱油样色,面色苍白。据家长反映,患者的姐姐也曾发生过类似情况。体格检查:体温38,脉搏150次/分,呼吸40次/分,血压80/60mmHg,呼吸急促,神清,萎靡,面色苍白,皮肤及巩膜黄染,体型较同龄人瘦小。心、肺未及异常,肝、脾未触及,双肾区无叩击痛,神经系统检查未及异常。实验室检查:红细胞 1.981012/L,
2、血红蛋白53g/L,血清总胆红素85.5mol/L,结合胆红素13.7mol/L,未结合胆红素71.8mol/L,尿蛋白(+),潜血(+),尿胆红素(),尿胆素原(+),尿液镜下未见红细胞。,案例,1、根据上述患儿的临床表现和实验室检查,初 步判断患儿是何种疾病?2、请设计实验进一步明确诊断。3、从生化代谢解释患儿的临床表现和实验室检查结果。4、要想探讨该病发生的分子基础,可以用哪些技术检测什么目的基因?5、患者体型瘦小与该病症是否有关,为什么?,初步判断患儿是何种疾病?,红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症(蚕豆病),性别:男性年龄:3岁主要症状:体温38、面色苍白、血尿1天、皮
3、肤及巩膜黄染、恶心、呕吐 诱因:1天前食用新鲜蚕豆既往史:患者的姐姐也曾发生过类似情况,概念:G6PD缺乏症是一种遗传性溶血性疾病。发病率 具有地方、民族差异性。,发病机制:,G6PD,NADPH+H+,GSH,红细胞的抗 氧化能力,发生溶血,红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症,正常红细胞,溶血性贫血 红细胞,左:健康新生儿右:溶血性贫血患儿(黄疸),左:健康新生儿右:溶血性贫血患儿(黄疸),正常红细胞,溶血性贫血 红细胞,左:健康新生儿右:溶血性贫血患儿(黄疸),正常红细胞,溶血性贫血 红细胞,左:健康新生儿右:溶血性贫血患儿(黄疸),分类:伯氨喹啉型药物性溶血性贫血 新生儿黄疸
4、 蚕豆病 感染性溶血 先天性非球形细胞溶血性贫血(CNSHA),红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症,蚕豆病 是一种6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G-6-PD)缺乏所导致的疾病,表现为在遗传性葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)缺陷的情况下,食用新鲜蚕豆后突然发生的急性血管内溶血。,红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症,主要临床表现:早期有恶寒、微热、头昏、倦怠无力、食欲缺乏、腹痛,继之出现黄疸、贫血、血红蛋白尿,尿呈酱油色,此后体温升高,倦怠乏力加重,可持续3日左右。与溶血性贫血出现的同时,出现呕吐、腹泻和腹痛加剧,肝脏肿大,肝功能异常,约50%患者脾肿大。严重病例可见昏迷、惊
5、厥和急性肾衰竭,若急救不及时常于12日内死亡。,遗传方式:G6PD缺乏症是一种X连锁不完全显性遗传,母:XX 父:XY,子代:XX XX XY XY,儿子一定患病,女儿则50%,母:XX 父:XY,子代:XX XX XY XY,儿子一定正常,女儿则50%,母:XX 父:XY,子代:XX XX XY XY,女儿50%机会患病,儿子50%机会携带该基因,X-致病基因,患该病的男女比例约为=7:1,从生化代谢解释患儿的临床表现和实验室检查结果,主要临床表现:1.血尿、排酱油色尿、面色苍白 2.皮肤及巩膜黄染 3.体温升高 4.呼吸急促,1.血尿、排酱油色尿、面色苍白,G6PD,GSSG(氧化型谷胱甘
6、肽),NADPH+H+,NADP+,A,AH2,2GSH(还原型谷胱甘肽),GSH的主要作用:保护红细胞内的含硫氢基(-SH)血红蛋白、酶蛋白和膜蛋白的完整性,免遭氧化 与谷胱甘肽过氧化酶共同使H2O2还原成H2O,NADPH+H+,红细胞的抗氧化能力,GSH,红细胞 膜破裂,溶血性贫血(面色苍白),游离Hb肾 吸收阈值,血红蛋白尿/含铁血黄素尿,2.皮肤及巩膜黄染,机理:溶血性黄疸,3.体温升高,机理:红细胞破裂,血红蛋白暴露,免疫系统攻击(单核-吞噬细胞系统),体温升高,4.呼吸急促,溶血性贫血 具有载O2能力的Hb含量下降机体缺O2呼吸急促,红细胞 1.981012/L()1012 血红
7、蛋白53g/L(170-200)g/L 血清总胆红素85.5mol/L()mol/L 结合胆红素13.7mol/L 未结合胆红素71.8mol/L 尿蛋白(+)、潜血(+)尿胆红素()、尿胆素原(+),从生化代谢解释患儿的临床表现和实验室检查结果,实验室检查结果 正常值,2、设计实验进一步明确诊断。,贫血、黄疸,有和无遗传史,无或有诱因(食用蚕豆、服用药物、感染),体征:脾肿大、黄疸,血常规检查,血清学检查,检查HA的病因,G6PD筛选试验,G6PD确诊试验,Hb、网织红细胞,间接胆红素尿胆原游离Hb结合珠蛋白,怀疑其他HA,相应病因检测结果正常,G6PD荧光斑点试验,红细胞G6PD活性测定,
8、G6PD基因分析,其他筛选试验,高铁血红蛋白还原试验,初诊或确诊G6PD缺陷症,确诊溶贫(血管内溶血),确诊G6PD,做1项或2项,做1项,高铁血红蛋白还原试验 G6PD荧光斑点试验 红细胞G6PD活性测定,筛选试验,确诊试验,一、高铁血红蛋白还原试验,实验原理:在全血中加入亚硝酸钠,使红细胞中的亚铁血红蛋白氧化为高铁血红蛋白(MHb),高铁血红蛋白在高铁血红蛋白还原酶的作用下又被还原为亚铁血红蛋白。在这过程中,高铁血红蛋白还原酶不仅需要亚甲蓝作为递氢体,还需要由G6PD参与磷酸戊糖途径形成NADPH作为辅酶才完成上述反应。所以,G6PD缺陷症的患者其MHb还原率下降(分光光度技术)。,亚铁血
9、红蛋白 高铁血红蛋白,亚硝酸钠,高铁血红蛋白还原酶 NADPH(辅酶)亚甲蓝(递氢体),实验反应方向,实验原理,主要试剂:0.18mol/L亚硝酸钠-葡萄糖溶液、0.4mmol/L亚甲蓝溶液、0.28 mol/L 葡萄糖溶液、混合液(等量+)、生理盐水、抗凝剂,仪器:紫外分光光度计水浴箱、离心机、试管3支,高铁血红单白还原实验,实验流程,取静脉血1.8mL 于抗凝管,混匀抗凝管(含0.2 mL109 mmol/L抗凝剂+葡萄糖20 mg),离心沉淀 1000 r/min 15 min,调整 血细胞血浆=11,混匀 调整后全血(备用),1ml 0.18 mol/L 亚硝酸钠1ml 0.28 mo
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