常用电泳技术和电泳方法简介.ppt

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1、常用电泳技术和电泳方法简介,济宁市中医院设备科科室业务学习,一、常用电泳技术和电泳方法,（一）根据工作原理的不同：可分为移界电泳、区带电泳、等速电泳、等电聚焦电泳、免疫电泳等。（二）根据有无固体支持物可分为：自由电泳和支持物电泳,一、常用电泳技术分类,（三）根据支持载体的位置或形状可分成：水平电泳、垂直电泳、板状电泳、柱状电泳、U型管电泳、倒V字形电泳、毛细管电泳等。（一）根据支持物的特点又可分为：无阻滞支持物电泳。高密度的凝胶电泳。,一、常用电泳技术分类,（二）根据电源控制的不同，一般可分为以下3类：1.恒压电泳;2.恒流电泳;3.恒功率电泳。（一）根据自动化程度的不同，可分为半自动和全自动

2、型。,一、常用电泳技术分类,（七）根据其功能的不同，可分为制备型、分析型、转移型、浓缩型等。（八）根据用法的类型可分为：双向电泳、交叉电泳、连续纸电泳、电泳层析相结合技术等。（九）根据不同的使用目的可分为：核酸电泳、血清蛋白电泳、制备电泳、DNA测序电泳等。,二、电泳方法简介,（一）纸电泳 指用滤纸作为支持载体的电泳方法。是最早使用的区带电泳。将滤纸条水平地架设在两个装有缓冲溶液的容器之间，样品点于滤纸中央。当滤纸条被缓冲液润湿后，再盖上绝缘密封罩，即可由电泳电源输入直流电压（100V1000V）进行电泳。,二、电泳方法简介,（二）醋酸纤维素薄膜电泳 电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、染色、脱

3、色与透明即可得到满意的分离效果。此电泳的特点是分离速度快、电泳时间短、样品 用量少。因此特别 适合于病理情况下 微量异常蛋白的检测。,二、电泳方法简介,（三）凝胶电泳 由区带电泳中派生出一种用凝胶物质作支持物进行电泳的方式，被称为凝胶电泳。普通的凝胶电泳在板上进行，以凝胶作为介质（多孔性，类似分子筛的作用）。电泳中常用的凝胶为葡聚糖、交联聚丙烯酰胺和琼脂糖。它具有机械强度好、弹性大、透明、化学稳定性高、无电渗 作用、设备简单、样品量小(1100g）、分辨率高等优点。,二、电泳方法简介,（一）等电聚焦电泳 1 等电聚焦电泳过程 一种利用有pH值梯度的介质，分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。将等电

4、点不同的蛋白质混合物加入有pH值梯度的凝胶介质中，在电场内经过一段时间后，各组分将分别聚焦在各自等电点相应的pH值位置上，最后，样品的各组分在各自的等电点聚焦成一条清晰而稳定的窄带。,二、电泳方法简介,2等电聚焦电泳的特点 使用两性载体电解质，在电极之间形成稳定、连续、线性的pH梯度；由于“聚焦效应”，即使很小的样品也能获得清晰、鲜明的区带界面；电泳速度快;分辨率高;加入样品的位置可任意选择；可用于测定蛋白质类物质的等电点;适用于中、大分子量（如蛋白质、肽类、同工酶等）生物组分的分离分析。,二、电泳方法简介,（二）等速电泳 采用两种不同浓度的电解质组成，一种为前导电解质，充满整个毛细管柱；另一

5、种为尾随电解质，置于一端的电泳槽中。前导电解质的迁移率高于任何样品组分，后者则低于任何样品组分，被分离的组分按其不同的迁移率夹在中间，在强电场的作用下，各被分离组分在前导电解质与尾随电解 质之间的空隙中移动，实现分离。,二、电泳方法简介,（一）双向凝胶电泳（二维电泳）第一向采用等电聚焦 根据复杂的蛋白质成分中各个蛋白质的PI的不同，将蛋白质进行分离。第二向采用了十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）就是按蛋白质分子量的大小使其在垂直方向进行分离。其结果不再是条带状，而是呈现为斑点状。,二、电泳方法简介,胶性 PH9中电加解入质了溶双液 PH3,加上电场后建立稳定PH梯度,蛋白质

6、溶液加入，建立电场,染色后，蛋白质因PI值不同，沿PH梯度分离开,第一向等电聚焦,PI逐渐降低,等电聚焦胶放在SDS聚丙烯酰胺凝胶上,第二向SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,分子量逐渐降低,06-07 双向凝胶电泳示意图,PI 逐渐降低,二、电泳方法简介,（七）免疫电泳 免疫电泳是琼脂平板电泳和双相免疫扩散两种方法的结合。将抗原样品在琼脂平板上先进行电泳，使其中的各种成分因电泳迁移率的不同而彼此分开，然后加入抗体做双相免疫扩散，把已分离的各抗原成分与抗体在琼脂中扩散而相遇，在二者比例适当的地方，形成肉眼可见的沉淀弧。,三、常用电泳设备的基本结构,（一）电泳电源（二）电泳槽（三）附加装置,四、电泳仪的主要技术指标,1 输出电压 8 连续工作时间 2 输出电流 9 保护措施 3 输出功率 10 显示方式 4 电压稳定度 11 定时方式 5 电流稳定度 12 电源电压 6 功率稳定度 13 电源频率 7 输出组数 14 功耗,