大肠菌群检验重点.ppt

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1、大肠菌群检测,检验程序,检 样25g(mL)样品+225mL稀释液，均质,10倍系列稀释,选择适宜3个连续稀释度的样品匀液，接种至月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤管,不产气,产气,煌绿乳糖胆盐（BGLB)肉汤,不产气,产气,大肠菌群阴性,大肠菌群阳性,查MPN表,报告结果,检样,初发酵,复发酵,报告,检 样,固体样品：在电子天平上称取25g+225mL0.85%灭菌生理 盐水液体样品：直接取用,固体样品存放罐,固体样品称量,用镊子取酒精棉擦手，点燃酒精灯；打开稀释瓶盖，放在天平上，等显示屏上的数字稳定后，按“去皮”键，当显示屏上的数字显示为“0”时，可开始称量。,去皮键,初 发 酵,取（带上

2、试管架）：单料管9支装有0.85%灭菌生理盐水的生理盐水灌1个装有9mL 0.85%灭菌生理盐水的试管3支,操 作 步 骤,1.用酒精棉消毒操作台,操 作 步 骤,2.用酒精棉消毒双手,操 作 步 骤,3.点燃酒精灯,操 作 步 骤,4.为装有培养基的试管编号,为试管编号,编号原则：固体样品：1、0.1、0.01（表示加入的固体样品为1g、0.1g、0.01g）液体样品：10、1、0.1（表示加入的液体样品为10mL、1mL、0.1mL）,双 料,单 料,1,1,1,0.1,0.1,0.1,0.01,0.01,0.01,用量筒量取225mL0.85%灭菌生理盐水至稀释瓶中。（注意：稀释瓶、带塞

3、锥形瓶开盖前要过火，量筒、装有0.85%灭菌生理盐水的锥形瓶及其塞子应放在酒精灯周围15cm的范围内）,固体样品称量后处理,液 体样 品,液体样品：直接吸取1mL样液至单料管中,1mL,1mL,1mL,注意：加样液后不能振摇试管。,液体样品：吸取25mL液体样品至稀释瓶中，加入225mL0.85%灭菌生理盐水，盖上盖子，混匀；从稀释瓶中分别吸取1mL被稀释10倍的饮用水至最后三支单料管中。,液 体样 品,25mL,1mL,1mL,1mL,注意：加样液后不能振摇试管。,固体样品：从稀释瓶中吸取1mL样液至装有9mL0.85%灭菌生理盐水的试管中，盖上盖子，混匀；从该试管中分别吸取1mL样液至最后

4、三支单料管中。,1mL,1mL,1mL,1mL,注意：将样液加入装有稀释液的试管后，振摇试管，混匀。样液加入培养基后不能振摇试管。,观察初发酵结果,取回初发酵结果，观察。确定有几支初发酵管内的小倒管中有气泡产生。,根据对初发酵结果的观察，有几支小倒管中有气泡，则取几支煌绿乳糖胆盐复发酵管。,内有小倒管,复 发 酵,在有气泡的初发酵管后的相应位置放上复发酵管,用接种环移取有气泡初发酵管中液体一环至相对应的复发酵管中。（注意接种环的灼烧、冷却）,将接种好的初发酵管和复发酵管放入恒温培养箱。注意选择设置为361的培养箱。,361 48h 2h,观察复发酵结果，小倒管内有气泡为阳性（+），无气泡为阴性（-）。,+,-,-,+,-,-,-,+,-,注：初发酵管产气，复发酵结果可能产气，也可能不产气。,查MPN表,1 1 1 11,检验人：检验日期：,固体样品,检验人：检验日期：,液体样品,小 结,本次检验操作共取：双料管3支，单料管6支，装有灭菌生理盐水的锥形瓶1个，装有9mL灭菌生理盐水的试管1支（固体样品），复发酵管若干支（根据初发酵结果）本次检验操作共用：固体样品：10mL吸量管1支，1mL吸量管2支，接种环 液体样品：25mL移液管1支，10mL吸量管1支，1mL吸量管2支，接种环,