生物硕士毕业答辩.ppt
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1、脂联素基因去信号肽区原核表达及酶免检测方法研究,专 业:微生物学学 生:孙强 导 师:王云龙 教授,主要内容,研究背景目的及意义实验技术路线方法与结果创新与结论,研究背景,脂肪细胞中发现的唯一与肥胖呈负相关性的特异性血浆蛋白。肥胖、冠心病、型糖尿病患者血浆中的脂联素低于正常水平。编码人脂联素的apMI基因定位于染色体3q27上,长度为16kbp,包含3个外显子和2个内含子。人脂联素由244个氨基酸组成,由分泌信号序列、特异序列、胶原重复序列、球状序列等4个结构域组成,其中球状区(gADPN)是脂联素生物活性的关键部位。,脂联素(adiponectin),目的及意义,可作为冠心病、糖尿病的辅助诊
2、断依据,并对疾病发生进行有效的预警;可作为评价药物在治疗肥胖、冠心病和糖尿病疾病方面的效果;进一步研究脂联素作用机制提供方便;利用基因工程方法制备脂联素定量检测试剂盒中的标准品,提高了稳定性和生物安全性。,本研究建立的血浆脂联素酶免定量检测方法,实验技术路线,方法与结果(一),人脂联素基因去信号肽区的克隆与鉴定,方法与结果(一),总RNA浓度=OD260稀释倍数 40g/mlOD280=0.254,OD260=0.485RNA含量=0.485140=19.4g/mL纯度=OD260/OD280=0.485/0.254=1.910,人脂肪组织总RNA的提取,方法与结果(一),2、PCR扩增目的基
3、因(678bp),M.DNA Marker DL 2000;1.PCRproduct;2.Negative control,3、重组质粒酶切鉴定,M.DNA marker DL 2 000;1.BamH+Xho digestion products,重组SADPN蛋白的诱导表达及纯化,方法与结果(二),方法与结果(二),1、重组菌BL21(DE3)/pET41a/SADPN诱导表达(54.5kD),M.Protein molecule weight Marker;1.Normal cell lysates control;2.cell lysates induced at 25 for 6 h
4、ours;3.Supernatant of cell lysates induced at 25 for 6 hours;4.Precipitation of cell lysates induced at 25 for 6 hours;,方法与结果(二),2、重组SADPN蛋白活性鉴定,3、重组SADPN蛋白诱导表达条件的优化,诱导温度的优化,M.Protein molecule weight Marker;13.Supernatant of cell lysates induced at 25 30 3746.Precipitation of cell lysates induced at
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