医学分子生物学dna.ppt

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1、第五章 DNA及基因组,1,The Runners-Up基因编辑技术CRISPR成像技术CLARITYHuman Stem Cells from Cloning（克隆人体胚胎干细胞）Mini-Organs(迷你器官）Cosmic Particle Accelerators Identified（宇宙粒子加速器）Perovskite Solar Cells(钙钛矿型太阳能电池)Why We Sleep（我们为什么要睡觉）Our Microbes,Our Health（我们的微生物）In Vaccine Design,Looks Do Matter（疫苗设计）,2,BREAKTHROUGH OF

2、THE YEAR 2013:,Runners up恐龙向鸟类进化The birth of birds年轻血液助推返老还童Young blood fixes old机器人自主合作Robots that cooperate仿人脑芯片Chips that mimic the brain印尼洞穴艺术Europes cave art has a rival治愈糖尿病的细胞Cells that might cure diabetes操控记忆Manipulating memories立方体卫星Rise of the CubeSat扩充生命遗传密码 Giving life a bigger genetic a

3、lphabet,3,BREAKTHROUGH OF THE YEAR 2014:Landing on a Comet,Combination therapies that help harness T cells and other immune cells in the cancer fight are a key area to watch.,American Association for the Advancement of Science Science 2014;346:1450,5,BREAKTHROUGH OF THE YEAR 2015:Clustered Regularly

4、 Interspaced Short Palindromic Repeats成簇的、规律间隔的短回文重复序列,Runner Up,the year of the dwarf planetKenna wake human skeletonthe regeneration of Psychologythe discovery of new racefocused on the deep mantle flowthe successful development of the Ebola vaccine yeast production of opioid drugs the brain has l

5、ymphatic channels Baer no loopholes in the experiment to confirm the quantum strange characteristics,CRISPRs技术是一种由RNA指导Cas蛋白对靶向基因进行修饰的技术。,7,基因组编辑技术可以实现三种基因组改造，即基因敲除，特异突变的引入和定点转基因,基因组编辑技术可以实现三种基因组改造，即基因敲除，特异突变的引入和定点转基因基因组编辑是研究基因功能的重要手段之一，也可被用于人类遗传性疾病的治疗，因此这类技术成为现代分子生物学的研究热点,8,Areas to Watch in 2016,A

6、 physics satelliteDog evolutionGravitational waves,一、核酸研究简史,第一阶段：核酸的发现,第二阶段：发现核酸是遗传物质,第三阶段：为分子生物学奠定基 础的时期,第四阶段：分子生物学高速发展时期,第一节 DNA的结构与功能,9,1889年 R.Altman 从动物细胞与酵母 菌中制备了核酸,1869年 F.Miescher 从脓细胞中得到 核质“Nuclein”,第一阶段：核酸的发现,1894年 A.Kossel 和A.Neumann 从胸腺 中提取核酸,10,1930年 正式提出核酸分为两大类：核糖核酸（RNA）脱氧核糖核酸（DNA）,190

7、4年 Hammars 证明核酸中的糖是戊糖.1909年 Levene和Jacobs鉴定核酸中的糖 是D-核糖.1912年 Levene 认为核酸由4种核苷酸 组成1929年 Levene 和Jacobs 确定胸腺核苷酸 中的糖是2-脱氧-D-核糖,11,第二阶段：发现核酸是遗传物质,1944年 Avery等揭示了DNA是细菌的遗传物质,有荚膜的光滑型肺炎球菌（S型）致病无荚膜的粗糙型肺炎球菌（R型）不致病,12,R型菌 R型菌 R型菌+S型菌DNA S型菌DNA S型菌DNA（经蛋白酶水解）（经核酸酶水解）部分克隆变为 部分克隆变为 不能变为 S型菌 S型菌 S型菌,13,1952年 Hers

8、heyChase 通过噬菌体感染细菌的实验表明病毒的遗传物质是DNA。,14,1953年 J.D.Watson 和 F.Crick建立 了DNA双螺旋结构模型,第三阶段：为分子生物学奠定基础的时期,15,1958年*Kornberg等发现了DNA聚合酶(DNA polymerase)*Meselson 等提出半保留复制，阐明DNA复制的机理,*Crick提出了遗传信息传递的 中心法则,16,1965年 中国科学家人工合成牛胰岛素,1970年 Temin等发现了从RNADNA反转录现象，使中心法则更完善,1961年以后Jacob、Nirenberg和 Monod 等取得三个有意义的进展：1)证实

9、了mRNA携带着DNA到蛋白质合成机制所 需要的信息 2)发现了遗传密码 3)发现了蛋白质依靠tRNA和核糖体的帮助翻译,17,遗传信息传递的中心法则（central dogma）,18,第四阶段：分子生物学高速发展时期,1.1971年 限制性内切酶发现，DNA的 分离成为可能,19,2.直读核苷酸序列方法(1975年Sanger发明),20,3.DNA体外重组技术(1972年 Berg发明),21,1982年 中国科学家人工合成酵母 丙氨酸tRNA,1985年 Mullis建立PCR技术,1981年 T.Cech发现四膜虫rRNA前体的 自我拼接,称为ribozyme.,22,人类科学史上的

10、三大工程,人类基因组计划,曼哈顿原子计划,阿波罗登月计划,1990年 美国正式启动人类基因组计划。(human genome project,HGP),23,1999年7月 中国：3号染色体短臂30Mb区域（1%项目）。2001年8月 26日,绘制完成“中国卷”,人类基因组计划参加国家：美、英、日、法、德、中,24,2003年4月六国政府首脑联名发表六国政府首脑关于完成人类基因组序列图的联合声明。,25,1997年 英国爱丁堡罗斯林研究所首次 育成克隆羊。,26,水稻基因组（Rice Genome）,2001年10月，中科院、科技部和国家计委联合向全世界宣布，中国率先完成水稻（籼稻）基因组工作

11、“框架图”的绘制2002年4月5日，在Science 杂志上以封面文章的形式发表。,27,*后基因组计划（post-genome project）又称为功能基因组学（functional genomics）,*蛋白质组（proteome）计划 又称为蛋白质组学（proteomics）,28,*随着许多新的RNA功能陆续被发现，2000年各国科学家提出了RNA组的研究，称为RNA组学（RNomics）*生物信息学(bioinformatics)*系统生物学(systems biology),29,二、DNA研究的临床应用 1.疾病发病机理的研究 1）遗传性疾病 基因变异或基因缺陷是疾病发生的根

12、本原因如:镰刀状红细胞性贫血的致病因素是由 于珠蛋白第6位氨基酸由谷氨酸突变为 缬氨酸。,30,如：心血管疾病 型高脂蛋白血症的形成主要是由于ApoE基因中第112位和第158位的G和C发生变异，蛋白质肽链上原来 Arg 变成Cys，失去与ApoE受体结合的能力，使血脂升高,31,2）肿瘤癌基因激活和抑癌基因失活分化受阻肿瘤细胞（永生型）,32,2.疾病的基因诊断 DNA诊断：*快速DNA点杂交*限制性内切酶酶谱分析法*DNA限制性片段长度多态性 分析法（RFLP）*聚合酶链反应（PCR）,产前诊断、植床前诊断,33,34,35,3.疾病的预防与基因治疗 1）采用基因工程产生疫苗药物 2）基因

13、治疗,36,构件分子核苷酸nucleotide,三、核酸的结构,核酸（多核苷酸Polynucleotide),（一）分子组成,37,1.含氮有机碱（1）嘧啶碱：胞嘧啶Cytosine 胸腺嘧啶Thymine 尿嘧啶Uracil（2）嘌呤碱：腺嘌呤Adenine 鸟嘌呤Guanine,38,39,碱基上有修饰：核苷的大写字母前加上代表修饰基团 的小写字母右上方写明碱基的第几位,m2G 表示 2-N-甲基鸟苷,位置 m32 2 7G 表示 N2，N2，7-三甲鸟苷,数量,S4U 表示 4-硫代尿嘧啶,甲基,(3)稀有碱基,40,R,苷,41,2.戊糖,42,顺式腺苷,反式腺苷,3.核苷：C-N 糖

14、苷键,嘌呤碱N9嘧啶碱N1,戊糖C1,43,假尿苷（C5C1）,44,45,46,47,环核苷酸 cAMP、cGMP 表示磷酸与3、5核苷 羟基相接,48,（二）游离核苷酸的功能 ATP、GTP、UTP、CTP 参于代谢 5-FU（5-氟尿嘧啶）抗癌药物 6-MP（6-巯基嘌呤）抗癌药物 AZT 抗AIDS病毒（Azido thymidine 叠氮胸苷）cAMP、cGMP 第二信使,49,5-氟尿嘧啶 FdUMP 胸苷酸合成酶（5-FU）dTMP合成氨蝶呤/甲氨蝶呤 二氢叶酸还原酶,抑制,竞争抑制,抑制,结合,胸腺嘧啶(T),5-氟尿嘧啶(5-FU),50,次黄嘌呤(H),6-巯基嘌呤(6-M

15、P),6-巯基嘌呤的结构,6,51,甲酰甘氨酰胺核苷酸（FGAR）,PRPP,谷氨酰胺（Gln）,=,PRA,甘氨酰胺核苷酸（GAR）,甲酰甘氨脒核苷酸（FGAM）,5-氨基异咪唑-4-甲酰胺核苷酸（AICAR）,5-甲酰胺基咪唑-4-甲酰胺核苷酸（FAICAR）,IMP,52,AZT,53,（三）DNA的一级结构 1.DNA的一级结构是指脱氧核苷酸（碱基）在DNA分子中的排列顺序 2.DNA分子中脱氧核苷酸的连接方式：3，5磷酸二酯键 3.直线形DNA有二个末端：5磷酸末端 3羟基末端,54,A.分子结构式 B线条式 C字母式,55,1)端粒:真核生物染色体DNA是线性的,每复制一次，子链的

16、5有缺失（50-100bp）。3端有特殊的序列,线性DNA末端的复制必须的-端粒端粒特征:3端是由数百个串联重复G丰富的6个核苷酸组成（AGGGTT）n,5-10kb,高度保守人:5-AGGGTTAGGGTT-3端粒能稳定染色体,4.端粒（telomere）DNA结构与功能,56,线性DNA复制的末端,57,荧光原位杂交显示端粒和端粒序列,58,端粒DNA的功能 a 保证线性DNA的完整复制 b 维持染色体的稳定 c 决定细胞的寿命,59,2）端粒酶（telomerase)-防止端粒缩短的酶组成 蛋白质(DNA聚合酶)+RNA(合成端粒DNA的模板)唯一携带RNA模板的逆转录酶人端粒酶:模板(

17、RNA-端粒酶):3-CAAUCCCAAUC-5 合成(DNA):5-AGGGTT-3,60,正常体细胞缺乏端粒酶活性，故染色体随细胞分裂而变短，细胞随之衰老。人的生殖细胞，部分干细胞染色体，肿瘤细胞和永生细胞系具有端粒酶活性。,端粒酶和衰老、肿瘤有关：,61,2009诺贝尔生理学或医学奖-端粒酶（telomerase）,Elizabeth Blackburn UCSF,Jack SzostakHHMI,Carol GreiderJHU,62,63,4.以延长的DNA单链为模板,3-OH为引物合成富含C的互补链,64,5.哺乳动物中端粒末端形成大的环状结构,环状DNA+蛋白质 保护染色体3端的

18、稳定,端粒的环状结构,65,1)DNA分子十分巨大，最小的DNA分子 也包含有几千bp，分子量在106以上。人类基因组含有约3.1647 109bp。,5.DNA的一级结构特点,66,67,2)每一物种DNA都具有其特有的碱基 组成,3)有些碱基常被甲基修饰，称为甲基 化(methylation)，是重要的表观遗传修饰。,68,(1)细菌DNA甲基化,各种细菌都具有一定的甲基化模式，在DNA分子中平均 1%的碱基被甲 基化。,甲基化最多的是腺嘌呤和胞嘧啶,69,细菌DNA甲基化作用的生物学意义 a.影响DNA的构象,影响蛋白质与DNA的 相互作用,以调节DNA 复制、转录、修 复、重组和包装的

19、过程。如：发生在-GATC-的腺嘌呤，于DNA 复制产生的错误碱基修复中起作用 b.多发生于内切酶酶切位点，防止噬菌体 入侵，是一种细菌自身保护机制。,70,(2)真核细胞的DNA甲基化 胞嘧啶甲基化最多 约5%,生成为5-甲基胞嘧啶，大多发生在 CpG重复序列中。可逆反应过程 甲基化酶与去甲基化酶成对存在，都对 CpG序列有特异性,71,CpG岛 多种基因的启动子区和第一外显子（60）富 含CpG，称为CpG岛。长约1-2kb，通常为非甲基化状态。在人类基因组内，存在有近3万个CpG岛；散在的CpG则多为甲基化的。DNA甲基化通常抑制基因表达，与人类 发育和肿瘤疾病关系密切。,72,6.DN

20、A的一级结构的测定 1)双脱氧末端 终止法Sanger法 2)化学法Maxan-Gilbert法,73,Sanger双脱氧末端 终止法测序的基本原理,74,Maxan-Gilbert化学法测序基本原理,75,76,第一步：加入复制终止剂,荧光检测探头,电泳，看谁跑得快,77,第二步：荧光检测,78,DNA全自动分析仪：,ABI Prism 3700型全自动遗传分析仪,安玛西亚DNA序列分析系统型号：MegaBACE 500/1000/4000,79,（四）DNA的二级结构,Dr.Crick Dr.Watson,80,1.DNA双螺旋结构的提出 Watson和Crick在1953年提出了著 名的

21、DNA双螺旋结构模型。这个模 型不仅解释了DNA的理化性质，而 且将结构与功能联系起来，大大推 动了分子生物学的发展。,81,*双螺旋提出的根据 1)DNA纤维晶体的x-衍射研究 1952年 Wilkins等 2)Chargaff的碱基分析 AT GC ATGC的比值 不同来源DNA是不同的 3)碱基和核苷酸的结晶学资料,82,清晰的DNA X衍射图,83,DNA 的X衍射图,Maurice Wilkins1916-2004,Rosalind Elsie Franklin19201958,Chargaff 原则（1）不同种生物DNA分子中的核苷酸排列顺序不同（有种族特异性）（2）同种生物不同组

22、织器官细胞中DNA分子的核苷酸 排列顺序相同(无组织器官特异性)（3）某一特定生物，其DNA碱基组成恒定（4）任何生物DNA碱基组成都符合 A=T，G=C，A+G=T+C,84,85,a.DNA双链反向平行b.碱基配对*AT GC*碱基是一个平面环分子。碱基平面垂直 于螺旋轴*相邻碱基相距0.34nm，每10个碱基旋 转1圈，双螺旋螺距为3.4nm，相邻两个 碱基正好相差360,2.DNA的双螺旋结构的特点：1)B型DNA结构,86,87,碱基配对结构基,88,c在DNA双螺旋分子上交替存在着 大沟和小沟 蛋白质通过大沟和小沟识别碱基序 列的特异性，其中大沟对于的识别、结合尤为重要。,89,d

23、维持双螺旋的力量 氢键 碱基堆积力（base stacking force）碱基平面叠在一起，存在Van der Waals力 碱基 疏水性，在双螺旋内部形成疏水的力量-离子键,90,3.DNA的右手螺旋和左手螺旋*DNA构象与核苷酸顺序碱基组成有关 并取决于环境条件（盐类、相对湿度）*主要构象类型：右手螺旋：A、B、C、D、E、T 型DNA左手螺旋：Z 型DNA,91,湿度和盐类对DNA构象的影响,多核苷酸,盐类,相对湿度,构象类型,Na,+,75,A,Na,+,92,B,Li,+,44,C,Li,+,66,B,T2,噬菌体,DNA,Na,+,60,T,DNA,RNA,杂合链,Na,+,33

24、,92,A,天然,RNA,（逆转录病毒）,Na,+,高达,92,A,Na,+,43,Z,Na,+,高达,92,A,Li,+,81,B,天然,DNA,Poly(dG-dC),92,93,右手螺旋 1）B型 生理条件下最普遍的形式 2）A型 RNA双螺旋及DNARNA 杂交链（空间位阻小，有利于转录）3）C型 线粒体DNA及一些病毒 4）D型、E型 存在于噬菌体等生物中,94,3.左手螺旋Z型DNA 1)发现:1979年 A.Rich等人工合成六聚体 d（CGCGCG）单晶进行X射线 衍射分析，数据表明是Z型骨架,左手双螺旋DNA 2)ZDNA的结构特点:a.每个螺旋由12个碱基对构成，螺距 4.

25、46nm，直径 1.8nm,95,96,b.脱氧胞苷的碱基取反式构象，脱氧 鸟苷的碱基是顺式。在ZDNA中 GC交替而出现顺式和反式构象 交替。使糖-磷酸的主链的走向呈“之”字型，这 样Z-DNA主链呈锯 齿状（Zig-Zag）走向。,c.大沟消失，小沟变深,97,d.体内存在的Z-DNA序列特点:(1)DNA序列必须是嘌呤嘧啶交替排列 如：CGCGCG GCGCGC(2)序列中必须有5-甲基胞嘧啶的存在,98,E.与Z-DNA结合的特殊蛋白质FZ-DNA有利于DNA 的负超螺旋 打开G抗Z-DNA抗体,99,3）Z-DNA的功能：基因表达有关 Z-DNA抗体常常紧密地结合在染色 体的疏松部位

26、,增强转录活性的位点。,100,基因调控 Z-DNA可能参与识别调控蛋白质。,基因重组 Willia等做的黑粉菌实验指出,Z-DNA 在基因重组中起非常重要的过渡作用.在黑粉菌中有一种rec1酶能使染色体 第一次配对后互相交换片段,在配对时 由rec1酶使Z-DNA的双链产生,并且这 种酶与Z-DNA亲和力比B-DNA高75 倍,Z-DNA与rec1酶紧密结合是这一 时期的主要特征.,101,疾病治疗与新药开发 Kim等研究表明,一种关键的天花病毒蛋 白 E3L蛋白(已知该蛋白是病毒摧毁动 物细胞的防御系统所必需的)是通过 Z-DNA结合、干扰防御系统的运行来 行使功能的。,102,表2 右手

27、螺旋与左手螺旋DNA分子的比较_项 目 A-DNA B-DNA Z-DNA_螺旋方向 右旋 右旋 左旋每转1圈碱基数 11 104 12螺旋直径 2.55nm 2.37nm 1.84nm螺距 2.46nm 3.32nm 4.56nm碱基平面的倾角 19o l o 9 o大沟 窄，很深 宽，较深 平小沟 很宽，浅 窄，较深 很窄,深_,103,4.三螺旋DNA（H DNA；triple-helical DNA）三链DNA（triple strands of DNA)是一条DNA链在DNA的大沟与DNA双螺旋中的一条DNA链以氢键相结合形成的三股螺旋结构。,104,105,1）三螺旋DNA结构：（

28、1）三螺旋DNA是在DNA双螺旋结构的 基础上形成的，三链区的三链均为 同型嘌呤（homo purine HPU）或 同型嘧啶(homo pyrimidine HPY）,106,（2）根据三条链组成及相对位置可分为 Pu-Pu-Py（偏碱性介质中稳定）Py-Pu-Py（偏酸性介质中稳定）,（3）链中的碱基配对方式 两个碱基符合Watson-Crick碱基配对 另个碱基按Hoogsteen模型 如：T A-T C G-C(第三位上的“C”必须质子化)A A-T,107,108,嘧啶核苷酸,嘌呤核苷酸,(a)嘧啶-嘌呤-嘧啶三螺旋DNA序列(b)三螺旋DNA结构示意图,a,b,109,2）生物学意

29、义及应用：(1)三螺旋DNA结构常位于DNA一些重要 的部位。如：复制的起始点或终点，转录的调 控区或调节蛋白结合位点以及DNA重 组位点，提示与这些功能相关。(2)丰富了DNA结构学说,110,b.用寡聚DNA片段封闭转录因子结合 点关闭有害基因活病毒基因。（抗肿瘤，病毒，寄生虫等）,(3)基因治疗中的应用a.单链DNA片段可携带切割剂（核酸 内切酶，EDTA-Fe等）携带至DNA 的特定位点，选择性切断DNA。,111,5.四螺旋DNA 1)发现在真核染色体末端含有一个 富含G的单链 DNA 尾巴，它在体内 的超螺旋 应力作用下，可自身回折 形成 Hoogsteen G-G 碱基对。两个

30、DNA 分子或染色体分子可彼此连接 起来形成一个局部的四螺旋结构。,112,113,2)四螺旋DNA的结构*四螺旋结构由多个G-四碱基体形 成右手螺旋，每圈含13个四碱基 体DNA。,*在四碱基体中，四条链以对称和反 对称构象交替存在。,114,115,3)可能的生物学意义 两个DNA分子或染色体分子可彼此连接起来形成一个局部的四螺旋结构,这种结构可能起着稳定染色体的作用,116,（五）DNA超螺旋结构（三级结构）1.DNA三级结构就是指双螺旋DNA链 进一步扭曲、盘旋形成超螺旋结构。*超螺旋：负超螺旋（negative supercoil）正超螺旋(positive supercoil),1

31、17,2.生物体的闭环DNA都以超螺旋形式 存在,如质粒、病毒、线粒体的DNA,118,（六）真核生物染色体DNA,真核生物DNA分子呈线状，其超螺旋结构不同于上述环状DNA。它们主要存在于染色体，以核小体的形式再进一步盘绕折叠。,119,*核小体Nucleosome 1）核小体核心：组蛋白Histone八聚体（H2A,H2B,H3,H4各两分子）1.75圈DNA超螺旋（146bp）2）连接区：组蛋白H1 和 20-80 bp DNA双螺旋,120,121,DNA（2nm）,核小体链（11nm，每个核小体200bp）,纤丝（30nm，每圈6个核小体）,突环（150nm，每个突环大约75000b

32、p）,玫瑰花结（300nm，6个突环）,螺旋圈（700nm，每圈30个玫瑰花）,染色体（1400nm，每个染色体含10个玫瑰花200bp）,真核生物染色体DNA组装,122,DNA的质量、长度和浓度计算方法 1.长度 0.34 bp=（nm)2.分子质量 660 bp=（dal)3.浓度 50 OD260nm=g/ml(光径为1cm),123,(七)DNA的变性、复性和杂交 1.变性（denaturation)1）概念：当DNA的二级结构和三级结构受到物理化学等因素的破坏而解体，其一级结构核苷酸间共价键并不断裂，使配对碱基间氢键断裂，有序的螺旋解离成无序单链的过程称为变性。,124,*引起变性

33、的因素：常见的有加热、酸、碱、乙醇、丙酮、尿素、甲酰胺等作用，,125,2)变性过程中DNA物化性质发生改变 增色效应(hyperchromic effect)浮力密度 黏度 旋光度变小 沉淀速度,126,3）DNA的熔解曲线(melting curve)熔解温度（melting temperature,Tm）通常将 50%DNA 分子变性时的温度 称为熔解温度。*一般DNA在生理条件下 Tm 在 85-95oC之间,127,DNA的熔解曲线,128,(2)影响Tm的因素.DNA的碱基组成（GC）Tm（GC）每增加1,Tm线性增加0.41（GC）为40，Tm为87（GC）为60，Tm为95,1

34、29,.介质中的离子强度 盐浓度Tm,变性过程跨越的温 度范围更狭窄,如单价离子浓度增 加10倍,Tm增加约16.6,.变性剂 50甲酰胺可使Tm降低30,.DNA的均一性,130,离子强度对Tm的影响,131,2.复性(renaturation)(1)概念：变性的两条DNA单链在合适条件下，可按原来的碱基配对再结合在一起，形成双螺旋结构。,*退火（annealing）:加热变性的DNA分子在温度缓慢 降低时可恢复到原来正常DNA的结 构,这个复性过程又称“退火”,132,133,图3-26 DNA热变性过程的两种冷却过程示意图,134,(2)影响DNA复性因素 1）DNA序列 简单序列 复性

35、快 2）DNA浓度 浓度高 复性快 3）DNA片段大小 小片段DNA易于复性,135,4）温度 复性最佳温度为Tm-25（一般为 60，50甲酰胺存在最佳温度42）5）溶液中离子浓度 盐浓度需在0.4molL 以上,136,3.杂交（hybridization）1)概念:不同来源但具有同源性的 两条DNA或RNA单链，按碱基配 对的原则结合，这一过程为杂交，可以是 DNA-DNA、RNA-DNA、RNA-RNA之间进行。,137,138,2)核酸分子杂交常用的技术 Southern印迹分析法 1975年英国科学家 Southern 首先 提出并利用此方法检查基因组DNA 的特异序列。,Northern印迹分析法 根据Southern法的基本原理，分 析检测RNA。,139,斑点杂交 细胞原位杂交 菌落或噬菌斑原位杂交,3).分子杂交的探针概念:探针是分子杂交的必要工具，它是带有某种标记的一段碱基序列，与待测基因序列的DNA或RNA或寡 聚核苷酸互补。,140,探针的标记）放射性同位素标记 如用32P、35S、3H）非放射性标记 主要有生物素标记、地高辛标记,141,142,