生药112106贡静的超氧化物歧化酶SOD的生产.ppt

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1、超氧化物歧化酶（SOD）的生产,生物制药1121第5组贡静杨恪鉴顾海彬余靖申文娟,超氧化歧物酶的概念,超氧化物歧化酶，别名肝蛋白、奥谷蛋白，简称：SOD。SOD是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。对人体不断地补充SOD具有抗衰老的特殊效果。,超氧化歧物酶的概念,超氧物歧化酶是一种新型酶制剂。它在生物界的分布极广，几乎从动物到植物，甚至从人到单细胞生物，都有它的存在。SOD被视为生命科技中最具神奇魔力的酶、人体内的垃圾清道夫。SOD是氧自由基的自然天敌，是机体内氧自由基的头号杀手，是生命健康之本。,超氧化歧物酶的来源,超氧化物歧化酶是1938年Marn等人首次

2、从牛红血球中分离得到超氧化物歧化酶开始算起，人们对SOD的研究己有七十多年的历史。1969年McCord等重新发现这种蛋白，并且发现了它们的生物活性，弄清了它催化过氧阴离子发生歧化反应的性质，所以正式将其命名为超氧化物歧化酶。,超氧化歧物酶的分类,一、含铜锌金属辅基的称（Cu.ZnSOD），最为常见的一种酶，呈绿色，主要存在于机体细胞浆中；二、是含锰金属辅基的称（MnSOD），呈紫色，存在于真核细胞的线粒体和原核细胞内；三、含铁金属辅基的称（FeSOD），呈黄褐色，存在于原核细胞中。,超氧化歧物酶的化学反应,2O2-+2H+H2O2+O2 O2-称为超氧阴离子自由基，是生物体多种生理反应中自然

3、生成的中间产物。它是活性氧的一种，具有极强的氧化能力，是生物氧毒害的重要因素之一。O2-具有细胞毒性，可使脂质过氧化，损伤细胞膜，引起炎症，肿瘤和自身免疫性疾病，并可能促使机体衰老。,超氧化歧物酶对人体的作用,抑制心脑血管疾病 抗衰老 防治自身免疫性疾病 肺气肿 辐射病及辐射防护 抗疲劳老年性白内障,抗氧化 预防慢性病 抗疲劳化解女性的危机 有效降低血脂、胆固醇、血压,SOD应用领域,1、药物类 主要集中在炎症病患者，尤其治疗类风湿关节炎、慢性多发性关节炎、心肌梗塞、心血管病、肿瘤患者以及放射性治疗炎症病患者；2、生化制药 作为一种生化酶制剂，广泛应用于临床和科研上，可抗衰老，抗肿瘤、调节人体

4、内分泌系统；,SOD应用领域,3、化妆品 可添加在化妆品中，具有抗氧化抗腐蚀的优良性能。以SOD为主要成份的化妆品风靡世界，引发了化妆品历史上的一场革命，使人类永葆青春美丽梦想成真；4、保健食品、饮料 SOD糖、SOD口服液、SOD干啤等都非常畅销。在饮料、糖果、糕点等食品中加入SOD既可利用其抗腐蚀性延长保质期，又可调节人体内分泌系统。,SOD的生产一、材料，试剂及仪器,10新鲜蒜瓣，0.05mol/L磷酸缓冲溶液（pH7.8），氯仿-乙醇混合液（氯仿-无水乙醇3：5），丙酮（用前预冷至-10）。研钵，石英砂，烧杯（50mL），玻璃棒，pH计，冷冻离心机，离心管,二、操作步骤,整个操作过程在

5、0到5条件下进行SOD酶的提取 称取5g大蒜蒜瓣，加入石英研磨破碎细胞后，加入0.05mol/L的磷酸缓冲液（Ph7.8）15ml，继续研磨20min，使SOD酶充分溶解到缓冲液中，然后6000r/min冷冻离心15min，弃沉淀，取上清液。,去除杂蛋白 上清液中加入0.25倍体积的氯仿-乙醇混合液搅拌15min，6000r/min离心15min，弃去沉淀，得到的上清液即为粗酶液。SOD酶的沉淀分离 粗酶液中加入等体积的冷丙酮，搅拌15min，6000/min离心15min，得到SOD酶沉淀。冷冻干燥后即得成品。对成品进行称量并测定酶活力。,三、SOD酶的检验,原理 连苯三酚在碱性条件下，能迅

6、速自氧化，释放出氧气，生成带色的中间产物。在自氧化过程的初始阶段，黄色中间产物的积累在滞后3045s后就与时间成线性关系。中间产物在420nm处有强烈的光吸收，在有SOD存在时由于它能催化生成氧气与过氧化氢，从而阻止了中间物的积累，通过计算就可以求出SOD的活力。,酶活性的测定（1）邻苯三酚自氧化速率的测定 在10ml试管中加入pH值为8.30的50mol/LK2HPO4-KH2PO4缓冲溶液4.50ml，在250.5的恒温水浴中保温10min，然后加入在250.5的恒温水浴中事先预热好的连苯三酚溶液（空白管用10mmol/L HCL代替），迅速摇匀倒入1cm比色皿中，以空白管为参比，在325

7、nm下，每隔30s测1次吸光值，连续记录3min，调节连苯三酚溶液用量，将其自氧化速率控制在0.070（0.002）D/min。经实验测得连苯三酚溶液的用量为61,（2）样品活性测定 在10ml试管中加入pH为8.30的4.5ml50mmol/L K2HPO4-KH2PO4缓冲溶液和一定体积的样液，在250.5的恒温水浴中保温10min，然后加入在250.5的恒温水浴中事先预热好的连苯三酚61，（空白管用 10mmol/L HCL代替），迅速摇匀倒入1cm比色皿中，以空白管为参比，在325nm下，每隔30s测1次吸光值，连续记录3min，调节样液体积，使样液中连苯三酚的氧化速度控制在0.035（0.002）D/min，记录此时样液体积。,谢谢观看！,