未知肠道杆菌的分离鉴定程序.ppt

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1、标本中未知肠道感染细菌的分离鉴定程序,标本,脓血便、肛拭子,选择/鉴别培基,生化反应,血清学鉴定,克氏双糖铁培养基,动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基,SS平板,中国兰,EMB平板,标本中未知病原性球菌的分离鉴定程序,直接涂片染色镜检：观察细菌形态、排列、染色性 观察菌落性状、溶血性、色素 血琼脂平板 涂片、染色、镜检 挑取可疑菌落 生化反应测定 纯培养 致病性测定（凝固酶、耐热核酸酶）,标本,血液脑脊液,肉汤增菌培养,涂片染色镜检,设计性实验,临床标本中病原菌的分离与鉴定,设计性实验,1.脓汁 标本：脓拭子 培养基：血琼脂平板 其他：3%H2O2、兔血浆、生理盐水、革兰染液、玻片等2.痰 标

2、本：咽拭子 培养基：血琼脂平板 其他：生理盐水、10%胆盐、革兰染液、玻片等,3.尿 标本：尿液 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基 其他：革兰染液、靛基质试剂、玻片等4.粪便 标本：肛门拭子 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基 其他：生理盐水、靛基质试剂、沙门菌多价血清、志贺 菌多价血清、玻片等,脓拭子,分离培养（血平板）,革兰染色,革兰染色,触酶实验,血浆凝固酶实验,咽拭子,革兰染色,革兰染色,胆汁溶菌试验奥普托辛试验,荚膜染色（石炭酸复红单染）,分离培养（血平板）,尿液,离心沉淀1500转，1

3、0分钟,分离培养（EMB平板）,革兰染色,革兰染色,克氏双糖铁斜面培养基,动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基,观察结果,观察结果,观察结果,完成靛基质试验,肛门拭子1/2,EMB平板,克氏双糖铁斜面培养基,动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基,观察结果,观察结果,完成靛基质试验,玻片凝集试验,1.EMB平板（伊红美蓝琼脂培养基）组成：无糖培养基乳糖伊红美蓝 底物 指示剂、抑菌剂 原理：细菌 乳糖 产酸：伊红美蓝 紫黑/紫红 结果：分解乳糖细菌 菌落变黑，有金属光泽 不分解乳糖细菌 菌落无色、半透明（粉色）,分解,培养基原理,EMB agar,2.靛基质试验（吲哚试验）组成：蛋白胨水色氨酸原理：分

4、解 某些细菌有色氨酸酶 色氨酸 吲哚（无色）柯氏试剂 玫瑰吲哚（红色）结果：液面形成玫瑰红色,吲哚试验,3.克氏双糖铁斜面培养基反应试验组成：无糖培基1份葡萄糖10份乳糖铁盐酚红 营养 底物 底物 底物 指示剂原理：只分解葡萄糖 产酸（葡萄糖少，产酸量少）分解葡萄糖乳糖 产酸（乳糖多，产酸多）上下层均为黄色产生H2S铁盐 FeS 培养基成黑色,上层氧化 呈红色下层缺氧 不氧化 呈黄色,Double suger iron slant,4.尿素培养基 组成：基础培基尿素酚红 底物 指示剂 原理：有些细菌产生尿素酶 分解尿素 产氨 结果：分解尿素 培基变红 不分解尿素 培基不变色,Urea slan

5、t,肥达试验(4人/组),材料：病人未知血清：1#，2#，3#菌液：O、H、PAH、PBH（已知Ag）每组1块多孔板，标记 每人2支吸管,1 2 3 4 5 6 NS（ml）0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5未知血清 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5(1:10)1:20 1:40 1:80 1:160 1:320菌液(摇匀)0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5(4种，1种/人)1:40 1:80 1:160 1:320 1:640(阴性对照)37水浴过夜,方法,弃0.5ml于消毒缸,肥达试验,H凝集：絮状，以疏松大团沉于管底O凝集：颗粒状，以坚实凝片沉于管底凝集程度

6、的判定以“”、“”号表示 上清完全透明，细菌全部形成凝集块 细菌绝大多数凝集，液体有轻度混浊 50细菌形成凝集，液体半澄清 仅少数细菌凝集，液体比较混浊 液体均匀混浊，无凝集（沉于管底，形成圆 形沉淀，边缘整齐）,以呈现凝集的血清最高稀释度作为该血清的凝集效价 1 2 3 4 5 6 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 对照 O+-H+-PAH+-PBH+-,肥达试验,肥达反应,1 2 3 4 5 O 1:160 1:320 1:160 1:40 1:40H 1:320 1:80 1:80 1:80 1:320PAH 1:40-1:320 1:80 1:320PBH-1:80 1:80 1:40 1:320PCH-1:40-伤寒 伤寒早期 副甲 阴性 回忆反应疫苗接种,肠道杆菌的血清学试验（玻片凝集试验）,材料1.菌种：伤寒杆菌培养物、痢疾杆菌培养物2.伤寒杆菌的诊断血清，志贺菌诊断血清、载玻片、生理盐水方法,血清,生理盐水,