急性毒性第二军医大学新药评价中心新药评价.ppt

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1、新药临床前毒理学评价,临床前毒理学评价目的意义急性毒性试验长期毒性试验特殊毒性试验其它毒性试验药品非临床研究质量管理规范（GLP）,临床前毒理学评价目的意义,新药评价的核心内容之一 目的:确保临床用药安全超过限量、改变应用范围或用药途径变成毒物 1985-1994,收审新药近四千种,已批准上市 约占50%,而另外50%未被批准上市新药中,有相当一部分就是因毒理学评价没有通过,毒无处不在,1274宋慈指出万物皆毒 美国“化学文摘”登记化学品约有一千万种,美国每年投放市场新化学品约一千五百种左右 1992年联合国环境与发展大会将有毒化学品列为二十一世纪全球七大环境问题之一,药害事件,临床前毒理学评

2、价成功例子,化学物质致癌、致畸、己烯雌酚防流产而使子代女性出现阴道癌致癌、致畸、生殖及三代生殖试验青霉素严重过敏反应动物模型豚鼠,临床前毒理学评价的局限性,新药本身新药不断地改变着化学结构和药理毒理学特征,不同于已有的老药,因而也往往超出人们原有的知识、经验和评价手段所达到的预测能力,临床前毒理学评价的局限性,现有评价手段不能完全适应“新药”评价需要 动物实验缺点 种属差异 数量有限 品种单一 健康模型剂量太大,临床前毒理学评价总的要求,找出毒性剂量 Toxic dosage确定安全剂量范围 Safety margin 毒性反应 Toxic reaction:性质、程度、量毒关系、产生时间，达

3、峰时间,持续时间及反复产生毒性反应时间、迟发性、蓄积性、耐受性 寻找毒性反应靶器官 Target organ 毒性反应是否可逆 Reversibility确保临床用药安全,急性毒性试验,目的意义基本内容和要求急性毒性LD50常用计算方法有关问题,急性毒性试验,目的意义 了解新药急性毒性强度 计算新药相对毒性参数 为临床毒副反应监护提供参考依据 为长期毒性、蓄积性毒性和特殊毒性试验选择剂量提供依据 其它方面,新药急性毒性的强度,表.化学物质的急性毒性分级标准(WHO,1977)毒性分级 ig大、小鼠LD50 吸入大、小鼠LC50 涂皮兔LD50 人口服可能的(mg/kg)(ppm)(mg/kg)

4、致死量(g)极 毒 5000 10000 2180 1200*吸入毒性LC50指中毒栏中的浓度,一次中毒2-4小时,观察24天,新药急性毒性的强度,表.欧共体对化学物的毒性分级 动物及给药途径 剧 毒 毒 有 害大鼠 LD50 ig(mg/kg)25 25-200 200-2000大鼠或兔经皮LD50(mg/kg)50 50-400 400-2000大鼠 LC50(mg/L/4hr)0.5 0.2-2 2-20,相对毒性参数,治疗指数TI=LD50/ED50安全系数SF=LD5/ED95可靠或确实安全系数CSF=LD1/ED99安全范围SM=(LD1/ED99-1)X 100%SED50/ED

5、50,越大越安全LD5基本无害量 ED95基本有效量LD1肯定无害量 ED99肯定有效量,为临床毒副反应监护提供参考,中毒症状起始时间持续时间恢复时间对抗试验为临床急救提供依据,急性毒性试验观察动物反应指标,中 毒 部 位 毒 性 症 状 表 现中枢神经系统 呆滞:对刺激反应迟缓、减弱、消失；不安：对刺激反应 过敏、兴奋；强直：行动姿势改变、叫声异常、震颤、共济失调 植物神经系统瞳孔缩小、放大;分泌增多，如流涎、流泪 呼 吸 系 统 鼻孔流鼻涕、呼吸缓慢、困难、潮式呼吸、速率加快等心血管 系统 心动过速、缓慢、心律不齐、心跳过强、微弱胃 肠 系 统 气胀、腹泻、便秘、粪便不成形、粪便黑色生 殖

6、 系 统乳腺膨胀、会阴部污浊、阴囊下垂等皮肤、毛皮肤发红、松弛、皮疹、毛竖起粘 膜口腔流粘液、充血、溃疡、出血性紫绀眼 睛上睑下垂、眼球突出混浊其 他直肠温度升高、降低；消瘦；拒食等,为长毒、蓄毒试验选择剂量提供依据,长期毒性剂量设计LD50法(1/10,1/50,1/100)MTD法(1,1/3,1/10)蓄积性毒性剂量设计1/10LD50,然后按等比级数1.5倍逐渐递增,为特殊毒性试验选择剂量提供依据,生殖毒性试验高剂量为母鼠MTD致突变试验啮齿类动物微核试验高剂量为1/2 LD50果蝇伴性隐性致死试验的高、低剂量分别为1/2 LD50和1/4 LD50精原细胞染色体畸变试验高剂量应为1/

7、2 LD50 动物短期致癌试验高剂量应是MTD主要药效学剂量限度、一般药理学和药动学剂量设计也要参考急性毒性的LD50,其它方面,系列化合物的合格率分析(除理化性质为主外)也参考LD50复方中药物的相互作用,有时也通过拆方及合用的LD50来判别相互作用的性质,基本内容和要求-动物,啮齿类-小鼠或大鼠 非啮齿类-犬或其它一类药至少必须用二种动物(啮齿类及非啮齿类各一种,其中非啮齿类宜用Beagle犬);其它类酌 情用二种动物小鼠18-22g,同次体重相差不超过4g;大鼠120-150g,同次体重不超过20g;犬用成年犬各半,基本内容和要求-给药途径,一类药及可溶于水的至少用两种给药途径,其中一种

8、必须是临床给药途径其它类至少有一种临床给药途径实验动物上无法进行时,则作特殊说明,可用别的给药途径,基本内容和要求-剂量和分组,小动物一般分4-6 个剂量组,组距0.65-0.85,求出LD50大动物可用50%等量递升法,一般用6条犬,求出ALD和MTD,基本内容和要求-给药容积,不等浓度等容量给药常规给药容量为:小鼠ig 0.2-0.4 ml/10g,ip、sc和iv 0.1-0.2 ml/10g大鼠ig 1-1.5 ml/100g,ip、sc和iv为0.5-1 ml/100g,基本内容和要求-观察记录,给药当天,尤其是药后4h内应严密观察并记录,然后每天上下午各一次,连续观察7-14天详细

9、记录动物毒性反应情况和死亡情况,中毒症状,中毒发生时间、持续时间、恢复期及动物最短死亡时间、最长死亡时间和平均死亡时间 死亡动物应及时进行尸检,记录病变情况;若肉眼可见变化时则需进行病理检查,基本内容和要求-结果处理,实验资料按下表列出,用Bliss法计算LD50。必要时求出不同性别LD50 表.XXX急性毒性结果及LD50计算剂 量 对数剂量 动物数 死亡动物数 死亡率 机率单位 LD50及可信限(mg/kg)(X)(只)(只)%(Y)(mg/kg),基本内容和要求-MTD测定,最大允许浓度和最大允许容积仍未测出LD50,可只求MTD值。方法：一次给20只动物,连续观察7-14天,未见任何动

10、物死亡,则MTDXX g/kg。若仅有个别死亡,则宜写成LD50XX g/kg。iv要求 pH 5-8，速度：大、小鼠 10-20s。ig时空腹,即禁食12-16h左右,表.急性毒性试验常用容量和最大容量(ml),给药途径 小 鼠 大 鼠 豚 鼠 家 兔 狗 ig 0.2-1.0 1-4 1-5 5-10 50-100 ip 0.2-1.0 1-3 2-5 5-10 5-15 im 0.1-0.2 0.2-0.5 0.2-0.5 0.5-1 2-5 iv 0.2-0.5 1-2 1-5 3-10 35-50 sc 0.1-0.5 0.5-1 0.5-2 1-3 3-10*小鼠指20g,大鼠20

11、0g,豚鼠200g,兔2.5kg,狗10kg,前者为 常用量,后者为最大容量,急性毒性LD50常用的统计方法,白仑氏法(Behrens method)(累计法)密勒和滕特尔二氏法(Miller and Taninters method),也叫目测法、概率法(对数机率单位绘图法,1944年)寇氏法(Karbers method),也叫克贝尔法点斜法(孙瑞元孜良寇氏法)改良寇氏法(顾汉颐改进寇氏法)维尔氏法(Weils method),机率单位法Bliss 法(Bliss method)Finney法(改进Bliss法),概率单位加权回归法,有关问题-毒理学界对LD50的看法,LD50只是急毒试验结果（信息）的一部分从安全性评价角度来讲，主要是毒性信息，而非精确的LD50LD50测定的不足：动物消耗量大获得信息有限测得数值不准,急性毒性研究中应注意的问题（一）,动物品系写清楚、各半、体重和鼠龄要符合要求 分组应随机 药物浓度、给药容量、给药途径应交待清楚 详细记录中毒情况注意溶媒对照,急性毒性研究中应注意的问题（二）,严格控制实验环境条件剂量设计合理 试验周期：给药后至少观察一周,有的要观察2周或更长 关于限度试验(美国):10只大鼠口服5 g/kg不发生与药物有关的死亡，可视为无毒 光化学治疗药和辐射增敏剂的急性毒性试验:在照光及不照光条件下分别测定LD50,