实验六植物DNA提取和分析.ppt
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1、实验六 植物组织中DNA的提取和分析,(P162),一、目的,掌握植物组织中DNA提取的原理和方法。掌握DNA的琼脂糖凝胶电泳检测方法。,二、原理,DNA是遗传的物质基础,分离纯化DNA是研究基因结构与功能的首要前提。细胞内DNA是与蛋白质结合存在的。在提取DNA的过程中必须将其中的蛋白质降解除去同时需要尽可能保证其DNA分子的完整性因此提取时应注意:在温和的条件下进行提取;注意避免核酸内切酶引起DNA的降解;酸、碱和离子强度等化学因素,以及温度、机械张力、剪切等物理因素可引起DNA的降解。,二、原理,植物组织中制备基因组DNA一般有下列几个策略:细胞壁的破碎通常将植物组织放在研钵中与液氯或干
2、冰一起研磨,形成粉末。保持在冰冻状态研磨以避免DNA的降解细胞膜的破坏常用去污剂(如SDS或CTAB)。保护DNA免受内源核酸酶的破坏去污剂的加入及EDTA的存在都能破坏或抑制酶的活性,EDTA是种螫合剂,它能结合大多数核酸酶的辅因子Mg2+。用氯仿和苯酚乳化DNA提取液,使蛋白质变性,分离蛋白质和DNA。,尽量减少DNA的断裂即使溶液的振荡也会使DNA断裂除去多糖高等植物材料往往含有多糖,而多糖常常是某些限制酶或连接酶的抑制剂氯化铯密度梯度离心法CTAB的核酸提取法也可得到纯的高相对分子质量的DNA,它利用核酸和多糖在CTAB存在时溶解度不同而分离。,二、原理,二、原理,提纯的DNA为白色纤
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