实验2氨基酸薄层层析.ppt
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1、如何分离鉴定氨基酸混合液?陈 健,生物化学与分子生物学实验教学中心,氨基酸的薄层层析(Thin layer chromatography of amino acids),实验目的,掌握薄层层析法的一般原理。掌握氨基酸薄层层析法的基本操作技术。掌握如何根据移动速率(Rf值)来鉴定 被分离的物质(即氨基酸混合液)。,层析基本概念,层析技术是利用化合物中各组分的物理性质(如溶解度、吸附能力、分子形状和大小、分子极性、分子亲和力、分配系数等)的不同,使各组分不同程度地分布在两相中,随着流动相从固定相上流过,不同组分以不同速度而最终被分离。特点:分离效率高,能分离各种性质相类似的物质。不仅可用于少量物质
2、的分离纯化,也可用于大量物质的分离纯化和制备。,层析基本概念,固定相:固定相是层析的一个基质。包括固体物质(如吸附剂,凝胶,离子交换剂等)和液体物质(如固定在硅胶或纤维素上的溶液),这些物质能与相关的化合物进行可逆性的吸附、溶解和交换作用。流动相:在层析过程中,推动固定相上待分离的物质移动的液体、气体等,都称为流动相。柱层析中一般称为洗脱剂,薄层层析时称为展层剂。,层析技术的分类,(1)按两相所处状态,可分为液相层析和气相层析,前者以液体为流动相,后者以气体为流动相。(2)按操作形式不同,可分为柱层析、薄层层析和纸层析。(3)按层析的原理不同,可分为吸附层析、分配层析、凝胶层析、离子交换层析和
3、亲和层析等。,今天要做的试验,根据原理属于吸附层析,根据操作形式又属于薄层层析,合到一起叫:吸附薄层层析。,试验过程,2cm,1cm,1、位置:用铅笔距底边2cm水平线上均匀确定4个点。每个样品间相距约1cm。2、取样:用毛细管分别吸取氨基酸溶液,取样量为毛细管柱高5cm。3、点样:点样毛细管轻轻接触薄层表面点样。加样后原点扩散直径不超过2mm。,Ala Arg Gly Mix,轻触疾起,操作步骤点样,操作步骤 展层、显色,Ala Arg Gly Mix,将薄层板点样端浸入展层-显色剂,展层-显色剂液面应低于点样线。盖好层析缸盖,上行展层。当展层剂前沿离薄板顶端2cm时,停止展层,取出薄板,用
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