临检血检类仪器.ppt

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1、临检血检类 仪器,教学重点：,传统仪器 生物显微镜 现代仪器 血液分析仪 现代仪器 尿液分析仪,教学重点：,传统仪器 生物显微镜 现代仪器 血液分析仪 现代仪器 尿液分析仪,Hans Janssen,1665年，罗伯特虎克观察到的细胞,Robert Hook(1635-1703),Leeuwenhoek(1632-1723),Malpighi（1628-1694）,显微镜成像理论的提出大大促进了显微镜制造和显微观察技术的迅速发展,偏光显微镜,荧光显微镜,相差显微镜,扫描式电子显微镜SEM,透射式电子显微镜TEM,重点1：显微镜原理,显微镜的成像原理显微镜的主要光学技术参数,光学显微镜是由两组透

2、镜组成的光学折射成像系统其成像原理见图：,光学原理,物体,像2,像1,F1与F2之间的距离称为光学筒长,重点1：显微镜原理,显微镜的成像原理显微镜的主要光学技术参数,数值孔径NA,分辨率d,放大率M,焦点深度Depth of field,视 场Field of view,工作距离WD,数值孔径,定义：数值孔径(numerical aperture,NA)又称镜口率，指物镜前介质的折射率(n)和物镜孔径角()半数正 弦的乘积，与显微镜的分辨率成正比,N：物镜与样本之间介质（空气、水、香柏油等）的折射率,：物镜的孔径角，即从物镜光轴上的物点 发出的光线与物镜前透镜有效直径所形成的张角,分辨率,定义

3、：分辨率是指显微镜分辨两个物点的最小间距，显微镜的分辨间距越小，显微镜的分辨率就越 高，因此分辨率一般以分辨距离(d)来表示,表示公式：,d=0.61/N.A,：为光线的波长,放大率,定义：放大率(magnification)是指物镜放大率和目镜放大 率的乘积。,表示公式：,M总=M目 M物,注意：当显微镜的分辨率不高时，如果只增大放大倍数，那么得到的图象即便轮廓很大，细节也会不清 因此使用显微镜时，应该注意显微镜的有效放大率,表示公式：,M有效=d 肉眼/d,其他技术参数,焦深：又称景深。即用显微镜观察某一平面时，不仅位于平面上的各点可以看清楚，而且平面的上下一定厚度内的各点也能看清楚，这个

4、厚度就是焦深。焦深与总放大倍数及物镜的分辨率成反比关系,视场：又称为视野。即显微镜观察时所看到样本的圆形范围。其大小由视场光栅直径和放大率的大小来决定。视野直径大小与视场光栅直径成正比，与放大率成反比,工作距离：指物镜前透镜表面到被观察样本表面的距离NA大的高倍物镜，其工作距离越小,重点2：显微镜构造,显微镜的光学系统：,目 镜,物 镜,目镜,目镜由两组透镜组成：上端的“接目镜”下端的“场镜”,目镜的分类：惠更斯目镜(Huygens eyepiece)冉斯登目镜(Ramsden eyepiece)补偿目镜（K）平场目镜（P）,物镜,物镜筒上的标识：放大倍数、数值孔径(NA)机械筒长、盖玻片的厚

5、度,物镜的分类：消色差物镜(Ach)复消色差物镜(Apo)平场消色差物镜（Plan）平场复消色差物镜（Plan Apo）,重点2：显微镜构造,显微镜的机械系统：,目 镜 筒,物镜转换器,载 物 台,调焦系统,重点3：显微镜的操作,瞳距调节,屈光度调节,调节,粗调松紧调节旋钮,聚光镜中心调节,孔径光栏调节,N.A聚=(0.6-0.8)N.A物,孔径光栏开度与图象,显微镜的维护,经常性的维护,1持镜时必须是右手握臂、左手托座的姿势，不 可单手提取，以免零件脱落或遭受碰撞。2轻拿轻放，不可把显微镜放置在实验台的边 缘，以免碰翻落地。3保持显微镜的清洁，光学和照明部分只能用擦 镜纸擦拭，切忌口吹手抹或

6、用布擦，机械部分 用布擦拭。,显微镜的维护,使用中的维护,4水滴、酒精或其它药品切勿接触显微镜镜头和 镜台，如果沾污应立即擦净。5放置玻片标本时要对准通光孔中央，且不能反 放玻片，防止压坏玻片或碰坏物镜。6不要随意取下显微镜目镜，以防止尘土落入物 镜，也不要任意拆卸各种零件，以防损坏。,显微镜的维护,其他的注意事项,7显微镜使用完毕后，必须复原才能放回镜箱内，其步骤是：取下标本片，转动旋转器使显微镜镜头离开通光孔，下降镜台，下降聚光器、光亮度调制最小，关闭光源，推片器回位，盖上绸布和外罩，放回实验台柜内。最后填写使用登记表。,清洁工具,擦拭方法,教学重点：,传统仪器 生物显微镜 现代仪器 血液

7、分析仪 现代仪器 尿液分析仪,1855年发明了血细胞的计数板,1、传统的血液学检查：显微镜手工检验法。检验人员费时费力，且可靠性和结果准确性受到人为的一定影响。,2、50年代初，库尔特兄弟利用电阻抗原理设计了第一台血细胞计数仪Coulter Model A型。能计数血液中的红细胞和白细胞，突破了手工模式，开创血液分析仪的新时代,Coulter（1913-1998）,1962年日本Sysmex公司开始生产第一台血球计数仪。型号为：CC1001,3、60年代，血液分析仪在血细胞检测的参数数量上有了很大的提高，70年代计算机技术的发展，使血细胞计数仪增加了血小板计数，至此，仪器已能够进行全血细胞计数

8、（CBC）。,Sysmex F820 半自动,4、80年代，开发了白细胞的分类计数、红细胞分布宽度等新参数。1980年Coulter公司推出第一台二分类血液分析仪Coulter S-plus，之后S-plus IV等三分类血液分析仪问世,5、90年代，将激光，射频，化学染色等技术纷纷应用于对细胞特性的分析，出现了自动五分类的血液分析仪，推动了血液一般检验的自动化的进一步发展,检测参数缩写,WBC 白细胞总数 PDW 血小板体积分布宽度RBC 红细胞总数 PCT 血小板比积HGB 血红蛋白浓度 PLT 血小板总数 HCT 红细胞比积 MPV 平均血小板体积 MCV 平均红细胞体积 RET 网织红

9、细胞MCH 平均红细胞血红蛋白含量 HFR 高荧光强度RETMCHC 平均红细胞血红蛋白浓度 MFR 中荧光强度RETRDW 红细胞体积分布宽度 LFR 低荧光强度RETHDW 血红蛋白分布宽度,重点1：基本原理,光学检测原理,电学检测原理,光散色检测,比色测定,电阻抗原理,电导原理,Coulter原理,白细胞计数和分类计数,1、血液先经稀释和溶血剂处理溶血剂的作用:使红细胞迅速溶解;使白细胞的胞浆通过膜渗出,胞膜紧贴于胞核或颗粒周围;经处理后的白细胞与自然体积无关,含有颗粒的粒细胞体积大于无颗粒的单核及淋巴细胞.,2、仪器将35-450fl的血细胞分为256个通道，每个通道为 1.64fl，

10、根据细胞的大小分置于不同的通道中从而显示白 细胞的体积分布直方图。白细胞按照体积可分为三群：35-90fl：小细胞群,淋巴细胞为主;90-160fl：中间细胞群,包括单核细胞,嗜酸性粒细胞,嗜碱性粒细胞,幼稚细胞或白血病细胞;135-450fl：大细胞群,主要为中性粒细胞.,红细胞计数,经稀释后的红细胞通过计数小孔时产生相应的脉冲，脉冲高低代表红细胞体积，脉冲数量为红细胞数，脉冲高度叠加换算为红细胞比积，(有的仪器先计算MCV再乘以红细胞数)稀释血液中含有白细胞，因其比例较小，可忽略。但在白血病及严重感染患者并伴有严重贫血时，需去掉白细胞计数结果。36360fl，256个通道，范围在50200

11、fl。,各项红细胞参数MCV，MCH，MCHC，根据仪器检测的红细胞数，红细胞比积和血红蛋白含量计算而来；RDW：红细胞体积分布宽度，反映红细胞大小不等的程度，通过统计近万个红细胞的数据求得，以RDW-CV和RDW-SD报告。,血小板测定,与红细胞在一个系统进行检测；当各种细胞所产生的脉冲数字化后，根据不同的阈值，分别计算血小板和红细胞数目分别储存于64个通道，范围在230fl根据血小板体积大小计算出血小板平均体积（MPV）,血红蛋白测定,加溶血剂后，血红蛋白释放，与转化剂结合形成血红蛋白衍生物,在特定波长下比色，用光电比色法求出血红蛋白含量。ICSH推荐使用氰化高铁法。校正仪器须以HiCN值

12、为标准，HiCN最大吸收峰在540nm。由于氰化物的毒性，非氰化溶血剂（SDS）应用日益广泛。,光散射原理,全血标本稀释后，在鞘液的作用下，形成细胞流，细胞被排成单列快速通过光学检测区，细胞与测定光速相交时，由于血细胞透光度与鞘液不同，引起光散射变化，引发脉冲信号，信号大小与细胞体积有关，脉冲数量代表细胞的数量。,激光器,激光器,激光探测器,大颗粒,小颗粒,前散射光示意图,激光器,激光器,侧向散射光探测器,复杂颗粒,简单颗粒,侧向散射光示意图,容量,电导,光散射(VCS技术)血细胞保持自然形态 V:电阻抗原理测细胞体积大小 C:高频电磁探针测量细胞内部结构,核质 比,细胞内的化学成分.S:细胞

13、表面光散射的特点,鉴别细胞内部 颗粒的构型和颗粒质量的区别 这种技术是Coulter公司推出的专有办法，应用VCS技术的血液细胞分析仪主要有MAXM、STKS、HMX等型号,采用阻抗、激光散色和荧光染色技术：主要应用在Sysmex研制和开发的SF-3000、SE-9000、SE-9500、XE-2100、XT-1800等系列血液分析仪中,激光散色和细胞化学染色技术：该类型仪器的最新型号为Bayer公司的Advia120型和Advia2120型,多角度偏振光散色法：该类型仪器的型号为ABBOTT公司的CD-3200，CD-3500型和CD3700，CD4000等型采用图象分析的单纯细胞分类仪：该

14、类型仪器的以日本日立公司生产的8200为代表。此类仪器要求大型计算机系统支持,检测流程,质控标本测定,仪器准备：启动;自检及清洗;空白计数,血液标本测定,结果分析与判定,采抗凝血、稀释、制血涂片,仪器的使用和维护,标本的采集与储存,良好的使用环境,试剂的使用,注意仪器检测的局限性,工作人员的素质和责任心,抗凝剂的使用,仪器的自身保养,小孔堵塞问题燃烧电路及高压反冲技术,故障自检功能开机 循环,管道和进样针的自动清洗,1.运行样本间自动清洗 2.测试完毕后停机自动 进行全系统漂洗 3.每次计数循环结束,自 动进行循环清洗计数孔 4.长时间不用机，自动 进入静止状态 5.关机冲洗程序,教学重点：,

15、传统仪器 生物显微镜 现代仪器 血液分析仪 现代仪器 尿液分析仪,仪器发展史,1、1827年，Bright最早把尿液检验用于患者的诊断和护理成为尿液常规分析最早期的开拓者和支持者,2、20世纪40年代，逐渐出现了尿液干化学试剂带法，成为筛检健康人或患者尿液的首选方法。1956年,美Ames公司生产第一条尿糖试带-Clinistrix；1957年,尿蛋白试带-Albustix；1958年,葡萄糖尿蛋白二联试带-Uristix；1959年,Glu-Pro-pH三联试带-Combistix;十联试带-Multistix；11项参数试剂带,3、70年代，第一台尿液试纸带检测的自动化学分析仪问世，从此在

16、相当程度上改变了传统尿液检验繁琐费时的操作方式，成为现代尿液分析的标志；,仪器发展史,4、80年代，随着色谱和免疫技术发展，生产出具有检测敏感性和特异性极高的单克隆抗体的试剂带；80年代中后期，韩国采用比较尖端的光电转换元件CCD(电荷耦合器件)生产出技术先进的Uriscan-S300型自动11项尿液分析仪。,5、90年代，尿液分析仪的自动化程度和性能都得到突飞猛进的发展。Bayer公司推出Clinitek-atlas型全自动尿液干化学分析仪，具有条码识别系统，双探头读数装置，能储存500个结果和200个质控数据,自动打印检验时间、日期等功能。,仪器分类,按工作方式,湿式尿液分析仪,干式尿液分

17、析仪,按测试项目,按自动化程度,半自动尿液分析仪:8/9/10/11,全自动尿液分析仪:10/11项,8项:蛋白/糖/pH/酮体/胆红质/胆原/隐血/亚硝酸盐,9项:8项/尿白细胞,10项:9项/尿比重,11项:10项/维生素C,重点1：试剂带,第一层尼龙膜起保护作用，防止大分子物质的污染；第二层绒制层，包括碘酸盐层和试剂层，碘酸盐层可破坏维生素C等干扰物质，试剂层含有机试剂成分，主要与尿液中所测定物质发生化学反应，产生颜色变化；第三层是固定有试剂的吸水层，可使尿液均匀快速地浸入，并能抑制尿液流到相邻反应区；最后一层选取尿液不浸润的塑料片作为支持体。,基本结构,机械系统:将待测的试剂带传 送到

18、预定的检测位置，检测后将试剂带传送到废物盒中,光学系统:光学系统通常包括光源、单色处理、光电转换三部分。光线照射到反应表面产生反射光，反射光的强度与各个项目的反应颜色成反比。,电路系统:将转换后的电信号放大,经模/数转换后送CPU处理，结果计算输出,重点2：基本原理,本质：光的吸收和反射光源灯发出的光照射在试剂带膜块上，膜块颜色的深浅对光的吸收反射是不一样的。颜色越深，吸收光量值越大，反射光量值越小，则反射率越小；反之，颜色越浅，吸收光量值越小，反射光量值越大，则反射率也越大。换言之，即是：颜色的深浅与尿样中各种化学成分的浓度呈正比。,原理双波长测定,双波长测定法：一种波长为测定波长，它是被测

19、试剂块的敏感特征波长；另一种为参比波长，是被测试剂块不敏感的波长，用于消除背景光和其它杂散光的影响。测定波长：亚硝酸盐/酮体/胆红素/尿胆素原 550nm pH/葡萄糖/蛋白质/维生素C/隐血 620nm参考波长：720nm,仪器对光的判读形式,韩国盈东药株式会社的URISCAN-S300型尿液分析仪，由尖端的光学元件电荷耦合器件(CCD)来对测试膜块的颜色进行判读。,美国Ames公司的CLINITEK 200型尿液分析仪，采用光导纤维将光源传导到两个检测头，来检测试剂带的颜色变化。,日本的MA-4210型和国产桂林医疗电子仪器厂的UritestR-100200型尿液分析仪，采用球面积分仪和双波长测定试剂带的颜色变化。,仪器使用的注意事项,清洗：每天上下班前蒸馏水冲比色槽，用注射器冲洗试纸托架的引孔，保证流畅，用干棉球擦干比色槽，防止尿碱形成,试纸条：为干化学制品，勿取出干燥剂，取用后盖紧瓶盖，避免用手接触，操作前检查纸条的颜色,上尿液：直接浸入或反复涂抹，保证结果稳定,Thank You!,