七金氏法测定血清谷丙转氨酶活性.ppt

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1、实验七 金氏法测定血清谷丙转氨酶活性,3.了解测定血清谷丙转氨酶活性的临床意义,1.掌握金氏法测定血清谷丙转氨酶活性的原理,2.熟悉血清谷丙转氨酶活性测定具体操作方法,将-氨基酸的氨基通过酶促作用转移到-酮基上，生成相应的酮酸与氨基酸的反应。催化这一反应的酶称为转氨酶。,转氨作用：,也称氨基转移酶，是一组催化氨基在-氨基酸与-酮酸之间转移的酶。是一种细胞内酶，当细胞膜通透性增加或细胞死亡时释放到血液中。,转氨酶,转氨酶广泛存在于机体的各种组织中。在肝、心、肾等组织中，谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）的活性均较高。在正常的新陈代谢过程中，血清内两种酶维持一定水平的转氨酶活性（即正常值）

2、。,转氨作用的机制：,体内主要两种转氨酶？,谷丙转氨酶（GPT）又称丙氨酸转氨酶（ALT）,谷草转氨酶（GOT）又称天冬氨酸转氨酶（AST）,肝脏,心脏,谷丙转氨酶：催化谷氨酸和丙氨酸之间的转化的转氨酶，其结构式反应如下：,血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义,谷丙转氨酶广泛存在于机体各组织中。正常人血清中此酶浓度活性很低，肝细胞中该酶浓度活性极高，当肝细胞受损时此酶从细胞中释放血。因此测定血清ALT活性对于某些疾病的诊断和预后判断具有重要的参考价值。（1）血清ALT活性增高：肝胆疾病、药物和毒物（2）ALT活性降低：磷酸吡哆醛缺乏症。,ALT在临床上主要用于肝脏疾病的诊断,酶活性：是指在规定条件

3、下，单位时间内底物的减少量或产物的生成量。即酶反应速度。,酶活性的影响因素,样品处理,测定条件,溶血,抗凝剂,存放时间,温度,pH,时间,底物浓度,酶浓度,常用的谷丙转氨酶酶活性测定方法有：,1 金氏法（King法）2 赖氏法（Mohun 法）3 改良穆氏法（Reitman-Frankel法）,共同点：原理、试剂、操作步骤和作用时间相似。不同点：在于单位定义和标准曲线绘制方法不同，因此测定结果的单位数值不同。,在37,1ml血清与底物作用60min，生成1mol丙酮酸为1个活性单位,第一步反应：,第二步反应：,520nm,CH3,-丙酮酸,2 标准曲线的制备,1 测定酶活性,1 测定酶活性,取

4、试管2支，按下表3-13操作,表3-13,2 标准曲线的制备,取6支试管，编号，按下表3-12步骤操作：,表3-12,表2 丙酮酸标准曲线的绘制,表1 金氏法测定血清谷丙转氨酶活性,原始数据记录,1 标准曲线图绘制,1）用坐标纸绘制标准曲线,2）标明操作人、时间、仪器型号和图表名称,1.标准曲线图绘制,1.标准曲线要过原点2.注明标准曲线名称:金氏法测定血清谷丙转氨酶活性3.注明横纵坐标的名称及单位4.注明分光光度计型号,2 血清谷丙转氨酶（ALT）活性的计算,1）将测定管吸光度值代入求出相应的丙酮酸含量（mol）,2）根据丙酮酸含量计算每毫升血清中ALT活性单位数 ALT活性单位数=生成丙酮酸的量10,在37,1ml血清与底物作用60min，生成1mol丙酮酸为1个活性单位,1、加样的时候平行加样，减少操作误差，使得结果更加精确。2、标准丙酮酸溶液的加样一定要准确、减小实验结果误差。3、酶的活力测定与温度、时间影响很大，因此反应要严格控制温度和掌握时间。4、试剂盘中试剂与移液管的摆放一定要准确、防止交叉污染。,谢谢！,