单克隆抗体的制备及应用.ppt

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1、单克隆抗体的制备及应用,什么是单克隆抗体单克隆抗体的发展过程单克隆抗体技术的应用单克隆抗体的制备单克隆抗体技术的研究方向和存在的问题,没有单克隆抗体前人类所遇见的问题,什么是单克隆抗体,1975年分子生物学家G.J.F.克勒和C.米尔斯坦在自然杂交技术的基础上，创建立杂交瘤技术，他们把可在体外培养和大量增殖的小鼠骨髓瘤细胞与经抗原免疫后的纯系小鼠脾细胞融合，成为杂交细胞系，既具有瘤细胞易于在体外无限增殖的特性，又具有抗体形成细胞的合成和分泌特异性抗体的特点。这种杂交瘤作单个细胞培养后，可形成单细胞系，即单克隆。利用培养或小鼠腹腔接种的方法，便能得到大量的、高浓度的、非常均一的抗体，其结构、氨基

2、酸顺序、特异性等都是一致的，而且在培养过程中，只要没有变异，不同时间所分泌的抗体都能保持同样的结构与机能。这种单克隆抗体是用其他方法所不能得到的。,单克隆抗体技术发展过程,单克隆抗体技术的研究背景单克隆抗体技术(简称单抗),又被称为肿瘤“生物导弹”,是能直接导向肿瘤的药物。1975年英国科学家 Kohler和Milstein将产生抗体的淋巴细胞同肿瘤细胞融合,成功的建立了单克隆抗体技术,因此在 1984年获得诺贝尔医学和生理学奖。1975年Kohler和Milstein首先报道，用细胞杂交技术，使经绵羊红细胞(SRBC)免疫的小鼠的脾细胞，与小鼠的骨髓瘤细胞融合，并由此创建了第一个B细胞杂交瘤

3、细胞株，获得了抗SRBC的单克隆抗体。这是免疫学，乃至医学史上的一个里程碑。,Georges J.F.Kohler,Cesar Milstein,1975年将产生抗体的淋巴细胞同肿瘤细胞融合,成功建立了单克隆抗体技术。,1984年获得诺贝尔医学和生理学奖。,单克隆抗体技术的应用,单克隆抗体的特点是：理化性状高度均一、生物活性单一、与抗原结合的特异性强、便于人为处理和质量控制，并且来源容易。这些优点使它一问世就受到高度重视，并广泛应用于生物学和医学研究领域。,早孕检测试纸条 女性在怀孕以后体内会分泌绒毛膜促性腺激素。早期检测该激素,对女性具有非常重要的指导意义。女性排卵检测试纸条 准确检测出尿液

4、中促黄体生成激素的峰值水平,使女性能预知最佳的受孕或避孕时间。,乙肝表面抗原检测试纸条 特异性地检测标本中的乙肝表面抗原,重复性好,质量稳定。吗啡类毒品检测试纸条 样品中的吗啡含量大于300ngmg，即可被检出。,癌症及其它病症的研究和治疗,全球治疗性单克隆抗体上市情况列表,单克隆抗体治疗转移性肾癌的效果,单克隆抗体的制备,单克隆抗体制备的主要仪器杂交瘤技术原理单克隆抗体制备的简易过程,单克隆抗体制备的主要仪器,超净工作台、CO2恒温培养箱、超低温冰箱（-70）、倒置显微镜、精密天平或电子天平、液氮罐、离心机（水平转子，4000r/min）、37水浴箱、纯水装置、滤器、真空泵等。其需要的主要器

5、械包括：100ml、50ml、25ml细胞培养瓶，10ml、1ml刻度吸管，试管，滴管（弯头、直头），平皿，烧杯，500ml、250ml、100ml盐水瓶，青霉素小瓶，10ml、5ml、1ml注射器等，96孔、24孔细胞培养板，融合管（50ml圆底带盖玻璃或塑料离心管），眼科剪刀，眼科镊，血细胞计数板，可调微量加样器（50ul，200ul，1000ul），弯头针头，200目筛网，小鼠固定装置等。,杂交瘤技术原理简述,动物免疫动物体内的B 淋巴细胞在特定外来抗原的刺激下,可以大量增殖变成浆细胞,以分泌针对该抗原的抗体。这种抗体具有特异性,动物免疫作用就是用特定的外来抗原对动物进行一次或多次免疫,

6、以刺激其能分泌对于该抗原的B 淋巴细胞大量增殖,从而得到大量产生专一反应的B 淋巴细胞。,细胞融合B 淋巴细胞受外来抗原刺激后可以分泌抗体,但在体外存活时间很短（最多两周）后即死亡。而骨髓瘤细胞不分泌任何免疫球蛋白,却能在体外长期存活。如果将这两种细胞的特性结合起来,就能得到既能分泌抗体又能在体外长期存活的细胞。然而在杂交过程中必然将产生混合物,因此就需要进一步筛选出其中唯一有用的杂交瘤细胞。,杂交瘤细胞的筛选杂交瘤细胞由于继承了B 淋巴细胞和骨髓瘤细胞的双重特性。能够合成HGPRT（次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶）和TK（胸腺嘧啶激酶）,故在HAT(H-次黄嘌呤、A-氨基喋呤、T-胸腺嘧啶)培

7、养基中可长期存活。在历经2 周左右的时间后即可得到该杂交瘤细胞,成为制造单克隆抗体的细胞源。,单克隆抗体制备的简易过程,过程,B淋巴细胞骨髓瘤细胞,诱导融合,B-B细胞,B-瘤细胞,瘤-瘤细胞,选择培养,杂交瘤细胞（B-瘤细胞）,克隆化培养,抗体检测,杂交瘤细胞,体外培养,单克隆抗体,B淋巴细胞,注射特定抗原蛋白,骨髓瘤细胞,培养骨髓瘤细胞,融合,多种杂交细胞,专一抗体检验阳性,克隆上述杂交细胞,分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞,单克隆抗体,注射到小鼠体内,体外培养,单克隆抗体技术的研究方向和存在的问题,单克隆抗体技术的研究意义单克隆抗体技术的研究方向单克隆抗体技术存在的问题,单克

8、隆抗体技术的研究意义,如果将单克隆抗体作为一些肿瘤药物的包裹物,那么药物将精确地到达肿瘤所在的部位。单克隆抗体可以提高杀伤肿瘤的效果及减少副作用,把一些抗癌药物或放射性同位素附在单克隆抗体上,便能命中肿瘤细胞,并且不损伤自身细胞,有的医学家称这种治疗为“导弹”疗法或“靶性药物”疗法。在人类肺癌、肝癌、胃癌的治疗中也取得一定效果,对于手术后或化疗后残存癌细胞,单克隆抗体可以说是所向无敌。,单克隆抗体技术的研究方向,新一代单克隆抗体、疫苗类药物最新进展与前景与展望新一代单克隆抗体、疫苗类药物的国际市场研究状况新一代单克隆抗体、疫苗类药物生产的新工艺和新技术:包括上游表达技术、细胞培养技术、抗体嵌合

9、技术、抗体人源化技术、下游纯化技术、单抗及疫苗类药物新的制剂方法等新一代单克隆抗体、疫苗类药物的产业化配套技术,检测手段,病毒、朊病毒灭活,工艺认证等与单克隆抗体检测试剂有关的新技术:如抗体的筛选、试纸的制造等疫苗研究的最新进展。“单克隆抗体技术与基因克隆技术相结合更将为分离和鉴定新的蛋白质和基因开辟一条宽阔途径”,单克隆抗体技术存在的问题,肿瘤细胞产生一些封闭性抗体,把自己保护住,使单克隆抗体所携的药物不能很好地发挥作用。银屑病单克隆抗体治疗试验的失败,也表明人类对单克隆抗体技术的应用还并不是那么得心应手,仅仅是刚刚起步。单克隆抗体产物是从具有肿瘤细胞表型特征细胞而来的,来自这种细胞的产物是否有潜在的生物毒害作用,特别是可能释放致癌病毒。单克隆抗体可能诱发抗个体型反应,而从抗体对其靶抗原角度看,这可能造成单克隆抗体失活。反复注射单克隆抗体,可能造成对单克隆抗体的个体型免疫,并使单克隆抗体失去生物活力,这在理论上是可能的。,谢谢 老师们身体健康 同学们学习进步,