食品微生物学基础实验之一培养基的制备与无.ppt

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1、微生物学实验的目的及实验室的要求,食品微生物学基础实验,主讲：郑海涛,一、微生物学实验的目的,1、微生物学实验是微生物学的重要组成 部分，也是学习微生物学的一个重要环节2、通过实验操作，可以加深和巩固对课堂讲授内容的理解。3、训练学生掌握最基本的操作技能；了解微生物学的基本知识；培养学生观察、思考、分析解决实际问题的能力；实事求是、严肃认真的科学态度和勤俭节约、爱护公物的良好作风。,二、微生物实验室的要求,为了上好微生物学实验课，并保证安全，实验时要注意如下事项：1、为了保证实验室的整洁和实验的顺利进行，非必要的物品和书包，不得带入室内，实验时不得高声谈话和随意走动2、每次实验前要对实验内容进

2、行充分预习，了解实验的目的、原理和方法，做到心中有数，并作合理安排。3、实验中要认真观察，及时做好实验记录。对于当时不能得到结果而需要连续观察的实验，则需记下每次观察的现象和结果，以便分析。4、实验操作应严格按操作规程进行，万一遇有带菌物品洒漏、皮肤破伤或菌液吸入口中等意外情况发生时，应立即报告指导教师，及时处理，切勿隐瞒。,二、微生物实验室的要求,5、实验过程中，切勿使乙醚、丙酮、酒精等易燃药品接近火源，如遇火险，应先关掉火源，再用湿布或沙土掩盖灭火。必要时用灭火器。6、凡实验用过的菌种以及带有活菌的各种器皿，应先经高压灭菌后才能洗涤。制片上的活菌标本应先浸泡于3来苏儿溶液或5石炭酸溶液中，

3、半小时以后再行洗刷。如系芽孢杆菌或有孢子的菌，则应适当延长浸泡时间。7、实验中需进行培养的材料，应注明组别、名称及处理方法，实验完毕，应将仪器、用具等洗净，放好，做好桌面及地面的清洁工作。,实验一常用培养基的制备、灭菌与无菌检测技术,一、实验目的,1、通过本次实验证明实验室内有各种微生物的存在。2、了解配制培养基的一般程序，掌握配制、分装培养基的方法3、掌握高压蒸汽灭菌的原理及操作技术,（一）环境中微生物的检测,一、目的和要求 1、微生物在自然界广泛存在，在实验室内亦不例外。由于其个体小，人们用肉眼看不到。只有通过微生物的大量繁殖形成微生物群体，即菌落，肉眼才能看到它们。2、通过本次实验证明实

4、验室内有各种微生物的存在，对微生物有初步的认识，并在今后的微生物学实验中注意无菌操作，防止杂菌污染，保证实验结果的可靠性。二、实验材料 1、牛肉膏蛋白胨（营养琼脂）培养皿、75%酒精棉球 2、37恒温箱、酒精灯、剪刀、火柴、镊子、灭菌棉球、灭菌牙签、记号笔等,三、操作步骤,以4人为一组，取5块灭菌的营养琼脂培养皿，一皿对照不要打开盖，其余每人1皿，每组成员分别选择下列任何一种方法加以处理并在皿上写明班级、姓名、日期及处理方法。(1)打开培养皿盖，在空气中暴露约10分钟，然后盖上皿盖。(2)打开培养皿盖，用手指触摸培养基表面23个点，注意不要将培养基弄破，然后盖上皿盖。(3)取自己的头发约5cm

5、长35根打开皿盖用镊子放于培养基表面。然后盖上皿盖。(4)用灭菌棉球在实验台(或凳子)上擦两下，打开皿盖，在培养基表面轻轻涂抹，然后盖上皿盖。注意不要将培养基弄破。(5)将接种的培养皿放入培养箱适温培养24-48小时。,四、结果观察,1、同组成员共同观察并记录结果，并与对照皿进行比较。2、描述你处理的培养皿中长出的菌落，如形状、颜色、大小、边缘等特征,五、思考题,1、本组内不同处理的培养皿上的菌落是否相同，从本实验中得到了什么启示？2、在今后的实验操作中要注意的问题是什么？,（二）培养基的制备与灭菌,1、培养基：人工配制、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的混合基质。2、营养要素：碳源、氮源、能

6、源、生长因子、无机盐和水3、要 求：应具备6大营养要素；物质比例合适；必须灭菌。,一、实验原理,一、实验原理,4、培养基的凝固剂：琼脂：融化温度96,凝固温度40-45.常用浓度：1.5-2.0%无营养价值，不易分解，耐压灭菌 明胶：融化温度25，凝固温度20。常用浓度：5-12%作氮源，易分解，不耐压。5、灭菌：用高压蒸气对培养基进行灭菌时必须根据培养基的种类、容器的大小及数量采用不同的温度及时间。一般少量分装的基础培养基通常为12115min灭菌。如盛装培养基的容器较大，则应适当增加其灭菌的温度和时间。含糖培养基，一般采用1152030min灭菌，以免糖类因高热而分解。由于高压蒸气灭菌是通

7、过提高蒸气压力而使其升高温度以杀死微生物，所以加压前应尽量排净锅内的空气。,消毒与灭菌,消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和 孢子。方法：一、物理的方法：加热、过滤、辐射二、化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要破坏细菌代谢机能。如重金属离子，磺胺类药物及抗生素等。,培养基的分类,1、物理状态分（1）固体培养基（2）半固体培养基（3）液体培养基(4）脱水培养基（干燥培养基）2、营养成分分（1）天然培养基（2）合成培养基（3）半合成培养基3、不同功能分（1）选择性培养基（2）鉴别培养基,1%-2%琼脂,0.5%琼脂,不加琼脂,营养琼脂,高氏一号,PDA,

8、乳酸菌培养基MRS,EMB,二、实验材料及仪器,(一)药品 牛肉膏，蛋白胨，葡萄糖，可溶性淀粉，NaCl，KNO3，K2HPO4，MgSO4，FeSO4，琼脂等。(二)试剂 40KOH，l0HCl。(三)其它 电子天平，电炉，硫酸纸，牛皮纸，线绳，棉花，纱布，石棉网、精密pH试纸，标签，烧杯，量简，玻棒，三角瓶，滴管，灭菌锅等。,三、方法步骤,1、培养基的种类很多，配制方法也不完全相同，但其基本程序和要求是大体相同的。一般培养基的配制程序如下,一般培养基的配制程序如下,计算 称量 溶解定溶调节PH值 加琼脂并溶解 过滤 分装 灭菌 包扎 加塞 摆斜面 无菌检查。,四、实验内容,1、每4人一组分

9、别制备一种培养基200ml。灌装7支试管后，装入三角瓶。（1）牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。（1-6组）（2）马铃薯葡萄糖琼脂培养基。（7-12组）（3）高氏1号培养基。（13-16组）2、分装试管和三角瓶，灭菌后摆斜面。,试管高度的1/3左右,不高于三角瓶高度的1/2,分 装,漏 斗,乳胶管,玻璃管,弹簧夹,铁架台,分装试管,灭菌后，固体培养基如需制成斜面，应趁热将试管上部垫于一根玻棒或木条上，使培养基斜面长度为试管长度的12,摆斜面,五、实验报告 简述你所制备培养基的制备程序。六、思考题(1)在你制备的培养基中，何为碳源?何为氮源?(2)配制合成培养基加入微量元素时，最好用什么方法加入?天然培养基为什么不需另加微量元素？(3)做过本次实验后，你有什么体会?你认为在配制培养基的各步操作中应注意些什么问题?,微生物实验室常用仪器设备,显微镜,电子天平,超净工作台,立式灭菌锅,霉菌和生化培养箱,恒温培养箱,谢 谢,2010年03月,