蛋白质化学1氨基酸.ppt

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1、主讲教师：季祥,第一章 蛋白质化学,第一章 蛋白质化学,【目的与要求】,1.1 蛋白质通论,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,1.了解蛋白质对生物体的重要意义。2.了解蛋白质的分类，掌握蛋白质元素组成的 特点。3.掌握蛋白质的基本构成单体：氨基酸的结构 特点，从各氨基酸的结构特点上理解氨基酸 的分类。4.掌握氨基酸的理化性质，重点掌握两性电离 与等电点含义、茚三酮反应及其应用。,目的与要求,第一章 蛋白质化学,5.掌握蛋白质一级结构的概念；了解蛋白质一 级结构的测定方法与思路，学会分析简单多 肽的氨基酸顺序。6.理解并掌握蛋白质二级结构的概念；二级结 构的基本类型：-螺旋及-折叠的结构 特点；了

2、解几种常见纤维状蛋白质的结构特 性；了解超二级结构及结构域的概念。7.了解蛋白质三级结构、四级结构的概念及稳 定因素。,第一章 蛋白质化学,8.充分理解蛋白质结构与功能的关系；从核糖 核酸酶的变性与复性实验理解一级结构与空 间结构的关系；以细胞色素C等为例充分理解 一级结构与蛋白质生物学功能的关系；从血 红蛋白与肌红蛋白的结构特性理解蛋白质空 间结构与生物学功能的关系。9.掌握蛋白质的理化性质：胶体性质、两性电 离与等电点、沉淀作用、变性作用以及这些 性质的生理意义及实践意义。10.了解蛋白质分离提纯的常用方法及基本原理。,第一章 蛋白质化学,1.1 蛋白质通论,一.蛋白质的生物学意义,(一)

3、蛋白质是生命活动的物质基础,生物体内的蛋白质是除水以外，机体组织中最多的组分，占人体干重的45%，占细菌干重的5070%。,1.1 蛋白质通论,(二)蛋白质的生物学功能,1.作为生物催化剂：在体内催化各种物质代谢反应的酶几乎都是蛋白质。,2.调节代谢反应：一些激素是蛋白质或肽，如胰岛素、生长素。,3.运输载体：如红细胞中运输O2、CO2要靠Hb(Hemoglobin血红蛋白)、运输脂类物质的是载脂蛋白、运铁蛋白等转运蛋白或叫载体蛋白。,4.参与机体的运动：如心跳、胃肠蠕动等，依靠与肌肉收缩有关的蛋白质来实现，如肌球蛋白、肌动蛋白。,1.1 蛋白质通论,5.参与机体的防御：机体抵抗外来侵害的防御

4、机能，靠抗体，抗体也称免疫球蛋白，是蛋白质。,6.接受传递信息：如口腔中的味觉蛋白、视网膜中的视觉蛋白。,7.调节或控制细胞的生长、分化、遗传信息的表达。,8.其它：如鸡蛋清蛋白、牛奶中的酪蛋白是营养和储存蛋白；胶原蛋白、纤维蛋白等属于结构蛋白。还有甜味蛋白、毒素蛋白等都具有特异的生物学功能。,所以，我们不难理解，为什么说没有蛋白质就没有生命。,1.1 蛋白质通论,二、蛋白质的分类,1.根据分子形状分：球状蛋白质、纤维状蛋白质,2.根据功能分：活性蛋白质、结构蛋白质。,3.根据组成分：,（1）简单蛋白质：清蛋白、球蛋白、谷蛋白、醇溶谷蛋白、组蛋白、精蛋白、硬蛋白。,（2）结合蛋白质：色素蛋白、

5、金属蛋白、磷蛋白、核蛋白、脂蛋白、糖蛋白。,4.根据营养价值分：完全蛋白质、不完全蛋白质。,1.1 蛋白质通论,三.蛋白质的元素组成,蛋白质是有机化合物，离不开C、H、O三种元素，还含有N、P、S、金属元素等。,含量%：5055 67 2023 1517 0.33 微量或无,元素组成：C H O N S 其它,蛋白质中N是特征元素，且含量恒定，为16%左右，即16克氮/100克蛋白质，故可以用定氮法测量蛋白质含量，即：每100克蛋白质含氮16克，100/16=6.25克蛋白质含氮1克。所以，每克样品含氮量6.25100=100克样品蛋白质含量（克%）。,有些蛋白质含有其他微量元素：P、Fe、C

6、u、Mn、Zn、Co、Mo、I 等。,蛋白质是分子量很大的生物分子1均一的蛋白质它的所有分子在AA的组成和顺序以及肽链的长度方面是相同的2寡聚蛋白质某些蛋白质是由两个或更多个蛋白质亚基（多肽链）通过非共价结合而成的。特点：a.可解离成亚基，但相当稳定；b.可以结晶的形式从组织中分离；c.有此蛋白质以寡聚蛋白质表现其活性的。3 简单蛋白质AA残基数目的估算。AA残基的数目蛋白分子量/110因为，AA残基的平均分子量12818110。,1.1 蛋白质通论,四.蛋白质的大小与分子量,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,一.蛋白质的水解,1.酸水解,条件：510倍的20%的盐酸煮沸回流1624小时，或加压

7、于120水解2小时。,优点：可蒸发除去盐酸，水解彻底，终产物为L-氨基酸，产物单一，无消旋现象。,缺点：色氨酸破坏，并产生一种黑色的物质：腐黑质，水解液呈黑色。,2.碱水解,条件：4mol/L Ba(OH)2或6mol/L NaOH煮沸6小时。,优点：水解彻底，色氨酸不被破坏，水解液清亮。,缺点：产生消旋产物，破坏的氨基酸多，一般很少使用。,3.蛋白酶水解,条件：蛋白酶如胰蛋白酶、糜蛋白酶，常温3740，pH值58。,优点：氨基酸不被破坏，不发生消旋现象。,缺点：水解不完全，中间产物多。,蛋白质酸碱水解常用于蛋白质的组成分析，而酶水解用于制备蛋白质水解产物。,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,1

8、.2 蛋白质的分子组成氨基酸,二、蛋白质分子的基本组成单位氨基酸,（一）氨基酸的结构通式：,1、构成蛋白质的氨基酸均为L-氨基酸。2、除R为H（甘氨酸）外，其余氨基酸均具有旋光性。3、各种氨基酸的区别在于侧基R基上。,从氨基酸的结构通式可以看出：,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,（二）氨基酸的构型：,构成蛋白质的氨基酸除甘氨酸外，均含有-碳原子，在空间各原子有两种排列方式：L-构型与D-构型，它们的关系就像左右手的关系，互为镜像关系，下图以丙氨酸为例：,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,（三）氨基酸的结构与分类,1、按氨基酸分子中羧基与氨基的数目分：,（1）酸性氨

9、基酸：一氨基二羧基氨基酸，有：天冬氨酸、谷氨酸、（2）碱性氨基酸：二氨基一羧基氨基酸，有：赖氨酸、精氨酸、组氨酸（3）中性氨基酸：一氨基一羧基氨基酸，有：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸。,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,2、按侧基R基的结构特点分：,（1）脂肪族氨基酸（2）芳香族氨基酸：苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸（3）杂环氨基酸：脯氨酸、组氨酸,3、按侧基R基与水的关系分：,（1）非极性氨基酸：有甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、脯氨酸。（2）

10、极性不带电氨基酸：天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸。（3）极性带电氨基酸：天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸。,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,4、按氨基酸是否能在人体内合成分：,（1）必需氨基酸：指人体内不能合成的氨基酸，必须从食物中摄取，有八种：赖氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸。（2）非必需氨基酸：指人体内可以合成的氨基酸。有十种。（3）半必需氨基酸：指人体内可以合成但合成量不能满足人体需要（特别是婴幼儿时期）的氨基酸，有两种：组氨酸、精氨酸。,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,二十种氨基酸的名称和结构如图所示:,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,1

11、.2 蛋白质的分子组成氨基酸,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,注：二十种氨基酸的结构特点支链氨基酸：缬氨酸、亮氨酸，异亮氨酸含羟基的氨基酸：丝氨酸、苏氨酸含硫的氨基酸：半胱氨酸（含巯基）、甲硫氨酸（含硫甲基）含苯环的氨基酸：苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸含胍基的氨基酸：精氨酸含咪唑基的氨基酸：组氨酸亚氨基酸：脯氨酸含酰胺的氨基酸：天冬酰胺、谷氨酰胺含吲哚基的氨基酸：色氨酸含-氨基的氨基酸：赖氨酸,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,（四）蛋白质中不常见的氨基酸,羟-脯氨酸、羟-赖氨酸、r-羧基谷氨酸、6-氮-

12、甲基赖氨酸,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,（五）非蛋白氨基酸,鸟氨酸、胍氨酸、高半胱氨酸、高丝氨酸、-丙氨酸、-氨基丁酸等,鸟氨酸,瓜氨酸,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,三.氨基酸的理化性质,（一）物理性质,1.形态：均为白色结晶或粉末，不同氨基酸的晶型结构不同。2.溶解性：一般都溶于水，不溶或微溶于醇，不溶于丙酮，在稀酸和稀碱中溶解性好。3.熔点：氨基酸的熔点一般都比较高，一般都大于200，超过熔点以上氨基酸分解产生胺和二氧化碳。4.旋光性：除甘氨酸外的氨基酸均有旋光性，含手性碳。5.光吸收：氨基酸在可见光范围内无光吸收，在近紫外区含苯环氨基酸有光的吸收。,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸

13、,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,（二）化学性质,1.氨基酸的两性电离及等电点：,氨基酸既含有氨基，可接受H+，又含有羧基，可电离出H+，所以氨基酸具有酸碱两性性质。通常情况下，氨基酸以两性离子的形式存在，如下图所示：,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,从上图可知：氨基酸在酸性环境中，主要以阳离子的形式存在，在碱性环境中，主要以阴离子的形式存在。在某一pH环境下，以两性离子（兼性离子）的形式存在。该pH称为该氨基酸的等电点。所以氨基酸的等电点可以定义为：氨基酸所带正负电荷相等时的溶液pH。,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,氨基酸的水溶液既可被酸滴定，又可被碱滴定，应该具有两性电离的性质，现以甘氨

14、酸为例来说明氨基酸两性电离的特点。,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,左图是甘氨酸的电离酸碱滴定曲线，从左向右是用NaOH滴定的曲线，溶液的pH由小到大逐渐升高；从右向左是用盐酸滴定的曲线，溶液的pH由大到小逐渐降低。曲线中从左向右第一个拐点是氨基酸羧基解离50%的状态，第二个拐点是氨基酸的等电点，第三个拐点是氨基酸氨基解离50%的状态。,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,通过氨基酸的滴定曲线，可用下列 Henderson-Hasselbalch 方程求出各解离基团的解离常数（pK）：,根据pK可求出氨基酸的等电点，可由其等电点左右两个pK，值的算术平均值求出。,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,中

15、性氨基酸：,pI=(pK1+pK2)/2,pK1为-羧基的解 离常数,pK2为-氨基的解 离常数。,氨基酸等电点的计算,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,二十种氨基酸的pK，及等电点：,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,2.由-氨基参加的反应：,(1)与亚硝酸反应：放出氮气，氮气的一半来自氨基氮，一半来自亚硝酸，在通常情况下测定生成的氮气的体积量可计算氨基酸的量，此反应可用于测定蛋白质的水解程度。,(2)与甲醛的反应：用过量的中性甲醛与氨基酸反应，可游离出氢离子，然后用NaOH滴定，从消耗的碱量可以计算出氨基酸的含量。此法称为间接滴定

16、法。,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,(3)与2,4-二硝基氟苯（2,4-DNFB）的反应（Sanger反应）：生成黄色的二硝基苯-氨基酸衍生物。(4)与苯异硫氰酸酯（PITC）反应（Edman反应）：生成苯乙 内酰硫脲-氨基酸。(5)与丹磺酰氯（DNS-Cl）的反应：生成荧光物质DNS-氨基酸。,（3）、(4)、(5)反应用于蛋白质的N-末端的测定。,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,3.-羧基参加的反应：(1)与碱反应成盐(2)与醇反应成酯(3)与酰化试剂反应成酰氯,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,4.-氨基与-羧基共同参加的反应-与茚三酮的反应：除脯氨酸与羟

17、脯氨酸外，可与其它氨基酸生成蓝紫色化合物。脯氨酸与羟脯氨酸为黄色化合物。,反应要点A.该反应由NH2与COOH共同参与，-氨基酸特有B.茚三酮是强氧化剂C.该反应非常灵敏，可在570nm测定吸光值D.测定范围：0.550g/ml E.脯氨酸与茚三酮直接生成黄色物质，440nm测定（不释放NH3），谷氨酰胺和天门冬酰胺与茚三酮直接生成棕色物质。应用：A.氨基酸定量分析（先用层析法分离）B.氨基酸自动分析仪：用阳离子交换树脂，将样品中的氨基酸分离，自动定性定量，记录结果。,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,4.-氨基与-羧基共同参加的反应-与茚三酮的反应,4.-氨基与-羧基共同参加的反应-成肽反应,

18、1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,(1)Millon反应：检测Tyr或含Tyr的蛋白质的反应。Millon试剂：汞的硝酸盐与亚硝酸盐溶液。产物：红色的化合物。(2)Folin反应：检测Tyr或含Tyr的蛋白质的反应。Folin试剂：磷钼酸、磷钨酸混合溶液。产物：蓝色的钼蓝、钨蓝。(3)坂口反应：检测Arg或含Arg的蛋白质的反应。坂口试剂：萘酚的碱性次溴酸钠溶液。产物：砖红色的沉淀。,5.侧链反应（颜色反应）：,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,(4)Pauly反应：检测His、Tyr及含His、Tyr蛋白质的反应。试剂：对氨基苯磺酸盐酸溶液、亚硝酸钠、碳酸钠混合溶液产物：橘红色的化合物。(5)乙

19、醛酸的反应：检测Trp或含Trp蛋白质的反应。当Trp与乙醛酸和浓硫酸在试管中叠加时，产生分层现象，界面出现紫色环。(6)Cys的反应：Cys或含Cys蛋白质与亚硝基亚铁氰酸钠在稀氨的溶液中，产生一种红色的化合物。,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,四.氨基酸的分离测定,（一）层析法,层析法是利用被分离样品混合物中各组分的化学性质的差异，使各组分以不同程度分布在两个相中，这两个相一个为固定相，另一个为流动相。当流动相流进固定相时，由于各组分在两相中的分配情况不同或电荷分布不同或离子亲和力不同等，而以不同的速度前进，从而达到分离的目的。,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,常见的层析法有：滤纸层析、薄层层析、离子交换层析、亲和层析,（二）电泳法,电泳是指带电的颗粒在电场中向着以其颗粒所带电荷相反的电极移动的现象。,蛋白质化学,【目的与要求】,1.1 蛋白质通论,1.2 蛋白质的分子组成氨基酸,