全国艾滋病检测技术规范解读郭晓黎.ppt

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1、全国艾滋病检测技术规范,山西省CDC 郭晓黎 QQ:80252476,编写历程,全国艾滋病检测工作办法1997版全国艾滋病检测技术规范2004版 全国艾滋病检测工作管理办法2006全国艾滋病检测技术规范2009版,2004版与2009版内容的增补,样本采集中，增加了增加了滤纸干血斑样品、快速检测样品的采集和处理，用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定样品、尿液和唾液样品的采集和处理；在HIV抗体检测中，增加了免疫荧光法和化学发光法，进一步明确了不同情况下的检测策略；在HIV核酸检测中，增加了HIV感染产妇所生婴儿HIV感染早期诊断检测流程和适用于窗口期的集合核酸检测方法；根据临床治疗需求，增加了

2、HIV-1的耐药检测；进一步完善了艾滋病检测实验室安全防护和艾滋病检测实验室的质量管理，使其更加符合目前艾滋病防治工作的需求，更加具有可操作性；考虑到技术发展和新的需求，增加了HIV-1新近感染检测和HIV-1的分离培养技术。,2009版内容,样品的采集和处理HIV抗体检测HIV-1抗原检测HIV核酸检测HIV-1耐药检测CD4+和CD8+T淋巴细胞检测HIV-1的分离培养实验室生物安全艾滋病检测实验室的质量管理 九个章节涉及样本采集、检测技术、生物安全等全面质量管理体系，合并了2004版第十章试剂评估的内容到质量管理章节。,第一章 样本的采集和处理,一、规范性引用文件,艾滋病和艾滋病病毒感染

3、诊断标准中华人民共和国卫生行业标准 WS 293-2008艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测质量保证指南（试行）（中国疾病预防控制中心，2006年2月）HIV-1病毒载量测定及质量保证指南（试行）（中国疾病预防控制中心，2008年2月）Guidelines for Using HIV Testing Technologies in Surveillance WHO/CDS/CSR/EDC/2008可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定，卫生部第45号令 2006年2月1日,二、样品种类及相应的用途,全血、血清、血浆、唾液、尿液以及DBS样品可用于HIV抗体检

4、测。抗凝全血可用于CD4+和CD8+T淋巴细胞测定。血浆可用于HIV-1病毒载量、基因型及耐药检测。DBS样品可用于HIV-1基因型及耐药检测。全血、血浆、淋巴细胞富集液、外周血淋巴细胞（PBMC）及DBS样品可用于HIV核酸的定性检测。PBMC、全血、淋巴细胞富集液等可用于HIV-1分离培养。,二、样品种类及相应的用途,需要考虑的问题：1、如果下级实验室送来“尿液或DBS样本”，上游实验室是否可以接样？根据本实验室开展检测项目的实际能力出发，该类样本是否可用于现阶段检测方法，如不适用，如何处理？,二、样品种类及相应的用途,2、用途不同，样本类型的选择也不同。全血样本是否可以送检？抗体检测目的

5、 淋巴细胞检测目的 分子生物学检测目的,二、样品种类及相应的用途,3、对于VCT、哨点监测样本，如何做到第二次获取？匿名检测的受试者，有可能只有一次检测面对面的机会，样本的处理及保存就尤显重要，拒收不合格样本应谨慎对待。,三、操作步骤,采前准备,根据检测项目的具体要求，确定采集样品的种类、处理、保存及运输的时限和方法，按照临床采血技术规范的要求操作，遵守生物安全要求（参见本规范第八章实验室生物安全）。要检查所需物品是否已备齐，是否在有效期内，有无破损，是否足量，特别应检查受检者信息与样品容器表面的标记是否一致，并注明样品采集时间。选择合适的室内（外）采血空间，受检者坐（卧）于合适的位置，准备采

6、血用具、皮肤消毒用品、采血管及试管架、硬质废弃物容器等。,采前准备,样品的编码和记录应制定样品编码的标准操作程序（SOP），规定样品编码的原则和方法，为样品制定唯一性编码（编号），保证其唯一性。采血前，先对装有样品的离心管或滤纸进行标记，核对后编码。要将标签贴在试管的侧面，最好使用预先印制好的、专门用于冷冻储存的耐低温标签。应使用专门的样品记录本或登记表记录样品，同时录入电脑保存。,采集和处理样品,血液抗凝全血：消毒局部皮肤，用加有抗凝剂（EDTA钠盐或钾盐、枸橼酸钠、肝素钠）的真空采血管抽取适量静脉血，或用一次性注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管中，轻轻颠倒混匀68次，备用。末梢全血：

7、消毒局部皮肤（成人和1岁以上儿童可选择耳垂、中指、无名指或食指。1岁以下儿童采用足跟部）。用采血针刺破皮肤，用无菌纱布擦掉第一滴血。收集滴出的血液，备用。血浆：将采集的抗凝全血15003000r/min离心15min，上层即为血浆，吸出置于合适的容器中，备用。血清：根据需要，用一次性注射器（或真空采血管）抽取510ml静脉血，室温下自然放置12h，待血液凝固、血块收缩后再用15003000r/min离心15min，吸出血清，置于合适的容器中，备用。淋巴细胞富集液：将采集的抗凝全血15003000r/min离心15min，吸取血浆层下的淋巴细胞富集液，置于合适的容器中，备用。PBMC：使用淋巴细

8、胞分离液，进行密度梯度离心，吸出PBMC层，备用。根据检测要求选用适当的抗凝剂，如CD4+和CD8+T淋巴细胞测定可选用EDTA钠盐或钾盐、枸橼酸钠、肝素钠，HIV病毒分离、核酸定性/定量检测可选用EDTA钠盐或钾盐或枸橼酸钠。样品采集后处理、保存、运输的时限和条件，因不同的检测项目而异，应参见不同检测项目要求。采血完成后的穿刺针头必须丢弃于尖锐危险品容器里，妥善处理，防止发生职业暴露。,采集和处理样品,滤纸干血斑根据需要，可将采集的各种血液样品制备成滤纸干血斑，保存、运输及检测。最常用的是用抗凝全血、末梢全血和血浆制备滤纸干血斑。用移液器从样品管中吸取100L抗凝全血（或血浆）样品，对准滤纸

9、印圈的中心处，将样品滴在滤纸上，或将穿刺后自皮肤伤口流出的末梢全血直接滴加在滤纸印圈的中心处。根据需要，连续在数个印圈上滴加样品。于室温下自然干燥至少4小时（潮湿气候下至少干燥24小时），不要加热或堆叠血斑，勿与其它界面接触。血斑充分干燥后，将其放入密封袋中，避免血斑之间的相互污染，同时放入干燥剂及湿度指示卡，密封包装，保存备用。,采集和处理样品,尿液和唾液尿液：使用清洁的容器收集尿液。女性应避开月经期。尿液样品可以在28下存放。存放时间、是否冻存以及是否添加防腐剂以试剂盒说明书为准。唾液：使用试剂盒提供的容器收集唾液样品。存放时间和是否冻存以试剂盒说明书为准。,样品的保存,用于抗体和抗原检测

10、的血清或血浆样品，短期（1周）内进行检测的可存放于28，一周以上应存放于-20以下。用于核酸检测的血浆和血细胞样品4天内进行检测的可存放于4，3个月以内应存放于-20以下。3个月以上应置于-70以下。艾滋病检测筛查实验室检测的筛查阳性样品应及时送确证实验室，筛查阴性样品，可根据具体需要决定保存时间，建议至少保存12个月。特殊用途或专项项目的样品根据具体要求确定保存时间。艾滋病检测确证实验室收到的筛查阳性样品，无论确证结果如何，均应将剩余的样品保存至少10年，特殊用途或专项项目的样品根据具体要求确定保存时间。对于CD4检测的样本，本节去掉了在2004版的描述，具体采集方式第六章。,样品的运送,应

11、符合生物安全要求；要获得相应部门批准并由具有资质的人员专程护送。2004版未对运送人员的资质进行要求，同时2009版去掉了“实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血”的描述。应采用三层容器对样品进行包装，随样品应附有与样品唯一性编码相对应的送检单。送检单应标明受检者姓名、样品种类等信息，并应放置在第二层和第三层容器之间。,样品的运送,用于抗体检测的血清和血浆样品应在冻存条件下运送。用于CD4+和CD8+T淋巴细胞测定的样品应在室温下（1825）或4（特殊要求时）运送。用于病毒载量检测的样品应在-20以下运输。DBS样品应在室温下（1825）运送。每一件包装的体积以不超过50

12、mL为宜。,样品的运送,运送样品必须有记录。2004版对样本的定义为“感染性材料”，有一定的局限性。特殊情况下经有关部门批准可以用特快专递邮寄样品，但必须按三层包装，将样品管包扎好，严禁（2004版：避免）使用玻璃容器。,样品的接收,样品包裹必须在具有处理感染性材料能力的实验室内、由经过培训的、穿戴防护衣、戴口罩、防护眼镜的工作人员在生物安全柜中打开，用后的包裹应及时进行消毒。核对样品与送检单，检查样品管有无破损和溢漏。如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出，对样品管和盛器消毒，同时报告实验室负责人和上一级实验室技术人员。检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况。如果污

13、染过重或者认为样品不能被接受，应将样品安全废弃。并将样品情况立即通知送样人。接收样品时应填写样品接收单。2004版中“因特殊临床治疗导致自发荧光的样品不可用于荧光方法测试”被删除掉，但在临床实际工作中应考虑。,样本运送、接收表单,筛查阳性样本的运送：启运方：筛查实验室 内容：抗体检测 血清或血浆 送检单：HIV抗体筛查阳性送检单.doc CD4/VL检测 抗凝全血 送检单：山西省艾滋病CD4病毒载量检测 样本送检单.doc 接收方：筛查中心/确证实验室 检查样本物理性状，送检单的完整性，填写接收记录单HIV抗体检测收样记录.doc,第二章 HIV抗体检测,规范性引用文件,艾滋病和艾滋病病毒感染

14、诊断标准（中华人民共和国卫生行业标准，WS293-2008）Guidance for HIV testing in the Western Pacific Region.WHO Draft 19 July 2008.Statementfrom the Surveillance and Survey Working Group and the Laboratory Working Group to the Office of the Global AIDS Coordinator.26 Nov.2006.Guidelines for the use of the BED assay for in

15、cidence estimation and surveillance in resource-limited countries.Atlanta,5 June 2006.Revised Guidelines for HIV Counseling,Testing,and Referral.U.S.CDC 2001.Current HIV-2 diagnostic strategy overestimates HIV-2 prevalence in China.Journal of Medical Virology,2009,81:790-797.,HIV抗体检测实验室要求,应符合全国艾滋病检测

16、工作管理办法（2006）中对实验室人员、建筑设施和设备等条件的要求。实验室的质量保证和实验室安全防护按本规范相关章节规定执行。,HIV抗体检测的目的和要点,HIV抗体检测的目的 HIV抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等。以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状况，包括临床检测、自愿咨询检测、根据特殊需要进行的体检等。以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV，包括献血员筛查和原料血浆筛查。以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势，包括各类高危人群、重点人群和一般人群。HIV抗体检测的要点（2009）根据目的选择检测方法及检测策略。严格遵守实验室SOP。筛查试验阳性，

17、须作确证试验。筛查试验阴性，不应做确证试验。筛查及确证试验阳性均应做好咨询工作。HIV抗体检测的要点（2004）筛查试验阳性不能出阳性报告。严格遵守实验室标准操作程序（SOP）。严格按照试剂盒说明书操作。注意防止样品间交叉污染。,检测程序,在2009版中，根据应用范围的不同分三个方面阐述：1、以诊断为目的 2、以监测为目的 3、以血筛为目的,以诊断为目的的检测策略,HIV抗体检测分为筛查试验（包括初筛和复检）和确证试验。筛查试验筛查试剂 必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂，其中酶联免疫试剂应批批检合格。推荐使用临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。筛查样品 HIV抗体筛查可

18、采用血清、血浆、滤纸干血斑、唾液和尿液样品。,以诊断为目的的检测策略,酶联免疫吸附试验（ELISA）可使用血液、唾液、尿液样品，ELISA多为单纯HIV抗体检测试剂。HIV抗原抗体联合检测试剂可同时检测血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗体。HIV抗原或抗体包被于固相载体，加入待检样品和酶标记的HIV抗原或抗体，加底物显色，用酶标仪测定结果。有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定。,以诊断为目的的检测策略,化学发光或免疫荧光试验 这类试剂采用发光或荧光底物，既可检测抗体，也可联合检测抗原抗体。HIV抗原或抗体包被于固相载体，加入待检样品和酶或荧光标记的HIV抗原或抗体，加发光或荧光

19、底物，用发光或荧光仪测定结果。有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定。,以诊断为目的的检测策略,快速检测（RT）及其它检测试验这类试验简便快速，适用于应急检测、门诊急诊检测。一般可在1030分钟内得出结果。明胶颗粒凝集试验（PA）：是HIV血清抗体检测的一种简便方法。将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作用。当待检样品含有HIV抗体时，明胶颗粒与抗体发生凝集反应，根据凝集情况判读结果。PA试剂有两种:同时检测HIV-1和HIV-2抗体以及分别检测HIV-1和HIV-2抗体。有效试验必须有阴性和阳性质控。免疫渗滤试验：斑点ELISA和斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验：均以硝酸纤维膜

20、为载体，HIV抗原点状固定在膜上，加待检样品。阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在10分钟以内。有效试验的质控点必须显色。免疫层析试验：以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原线状固定在膜上，待检样品（血液或唾液）沿着固相载体迁移，阳性结果在膜上抗原部位显示出有色条带。有效试验的质控带必须显色。,以诊断为目的的检测策略,初筛试验根据检测目的选用符合要求的筛查试剂对样品进行初筛检测，对呈阴性反应的样品，可出具HIV抗体阴性（-）报告；对呈阳性反应的样品，需要进一步做复检试验和确证试验。2004版：根据检测目的选用符合要求的筛查试剂对样品进行初筛和重复检测（复检）。复检试验对初筛呈阳性反应的样品

21、，应使用原有试剂和另外一种不同原理（或厂家）的试剂，或另外两种不同原理或不同厂家的试剂进行复检试验。如果初筛检测使用抗原抗体联合试剂，则复检必须包括一种抗原抗体联合试剂。如两种试剂复检均呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性（-）；如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送艾滋病确证实验室进行确证试验（图1）。如果抗原抗体联合试剂检测呈阳性反应，而抗体试剂检测为阴性反应，则应考虑进行HIV-1 p24抗原或核酸检测，必要时进行随访。艾滋病检测筛查实验室复检判定为阳性反应的样品，确证实验室可以直接进行确证试验。,以诊断为目的的检测策略,以诊断为目的的检测策略,筛查试验结果的报告 HIV抗体筛查试验用HIV抗体筛

22、查报告进行报告，阴性反应报告为“HIV抗体阴性（-）”；阳性反应报告为“HIV抗体待复检”。,以诊断为目的的检测策略,筛查试验呈阳性反应样品的转送 如需送上级实验室进行复检，需要核对身份，补充个人信息（如姓名和身份证号码），必要时采集第二份血样，持HIV抗体筛查复检送检单，送当地艾滋病筛查中心实验室，或直接送确证实验室复检。HIV抗体复检试验用HIV抗体复检报告单.doc 进行报告，两次检测均阳性或一阴一阳报告为“HIV抗体待确证”；两次检测均阴性报告为“HIV抗体阴性（-）”。HIV抗体复检报告需由1名检验人员和1名审核人员签字。,以诊断为目的的检测策略,确证流程,以诊断为目的的检测策略,注

23、意事项：确证为不确定反应的样本，进行二次随访的，须做确证试验，而不是筛查试验。,以诊断为目的的检测策略,HIV抗体确证试验结果的判定 HIV-1抗体阳性 同时符合以下2条标准可判为HIV-1抗体阳性：至少有2条env带（gp41和gp160/gp120）出现，或至少1条env带和p24带同时出现；符合试剂盒提供的阳性判定标准。HIV-2抗体阳性 出现HIV-2型特异性指示带的样品：如果同时呈HIV-1抗体阳性反应，报告HIV-1抗体阳性，不推荐进一步做HIV-2抗体确证试验；如果同时呈HIV-1抗体不确定或阴性反应，需用HIV-2型确证试剂再做HIV-2的抗体确证试验。同时符合以下二条标准，即

24、出现至少2条env带（gp36和gp140/gp105），和试剂盒提供的阳性判定标准，可判为HIV-2抗体阳性。HIV抗体不确定 出现HIV抗体特异带，但不足以判定阳性。注：HIV-1抗体特异带包括：env带：gp160/gp120、gp41；gag带：p55、p24、p17（或p18）；pol带：p66（或p65）、p51、p31。HIV-2抗体特异条带包括：env带：gp140/gp105、gp36；gag带：p56、p26、p16；pol带：p68、p53、p34。（由于使用的毒株不同，HIV-2 env带也可为gp125/gp80、gp36）。HIV抗体阴性 无HIV抗体特异带出现。确

25、证报告单.doc,以诊断为目的的检测策略,质量控制1、抗体检测的统计学室内质量控制2、快速检测质控试剂内对照 在质控窗口内出现质控带，该质控带是试剂自带的内部过程质控，说明实验操作全部完成并且实验所用材料处于工作状态。清洁的检测区背景是内部阴性过程质控。如实验完成后未呈现红色质控带，说明试剂盒内质控无效，该试验结果无效，样品须重检。外部质控品对照外部对照质控品，可采用商用质控品或自制质控品。质控品应包含抗体阳性样品和阴性样品。自制质控品可使用本室保留的阳性样品。不能使用酶联试验的外部质控品。下列情况需做质量控制：更换试剂批号；更换检测人员；更换包装；每个检测日；更换试剂厂家。,以诊断为目的的检

26、测策略,出现以下问题，提示存在质量隐患，应引起重视：运输包装、内盒或试剂盒的物理损伤；在单包装内存在混杂物质；标签出现错误、缺失或字迹模糊（特别是产品名称或出产厂家名称，批号和货号，失效期或/和生产日期）；缺失目录；泄漏或污染；不适宜的存放条件；保护包装纸破损或污染；未达到质量控制标准（阳性/阴性控制结果以及质控条带出现与否等标志）。除上述情况以外，建议：每个检测日检测一次阳性和阴性质控品；如果日检测量大于50份样品，至少应作2次质控。开展快速检测的确证实验室须参加中国CDC组织的检测能力验证，开展快速检测的筛查实验室及检测点须参加省级或地市级CDC组织的实验室能力验证。,实验室生物安全,规范

27、性引用文件,医务人员艾滋病病毒职业暴露防护工作指导原则（试行）中华人民共和国卫生部，2004年5月31日颁布，2004年6月1日起实施。实验室生物安全通用要求GB 19489-2008，2009年7月1日起实施。微生物和生物医学实验室生物安全通用准则（WS 233-2002）中华人民共和国卫生行业标准，2002-12-03发布，2003-08-01实施。Guidelines for the Safe Transport of Infectious Substances and Diagnostic Specimens.WHO 1997.消毒技术规范（2002年版）中华人民共和国卫生部2002-

28、11-15发布，2003-04-01起实施。,艾滋病检测工作中的生物安全全国艾滋病检测工作管理办法第五章21-24条,对传染场所、物品以及医疗废弃物进行消毒和无害化处理，遵循“标准防护原则”防止室内外传染艾滋病毒株和样品的采集、保藏、携带、运输，必须符合可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样品运输管理规定的要求硬件必须执行实验室生物安全通用要求（GB19489-2004）的有关规定职业暴露的防止,艾滋病防治条例（29/1/06，1/3/06）,第三章第三十二条对卫生技术人员和在执行公务中可能感染艾滋病病毒的人员，县级以上人民政府卫生主管部门和其他有关部门应当组织开展艾滋病防治知识和专业技

29、能的培训，有关单位应当采取有效的卫生防护措施和医疗保健措施。第七章第六十三条附则标准防护原则，是指医务人员将所有病人的血液、其他体液以及被血液、其他体液污染的物品均视为具有传染性的病原物质，医务人员在接触这些物质时，必须采取防护措施。,HIV的生物危害,第一类、第二类病原微生物统称为高致病性病原微生物。人类免疫缺陷病毒（HIV）属第二类病原微生物，是高致病性病原微生物。定义了艾滋病病毒的分级标准。,HIV相关检测的生物安全级别,HIV抗体检测（包括筛查和确证实验）、抗原检测和相关的免疫学检测应在符合级生物安全实验室（BSL-2）要求的艾滋病检测实验室中进行。HIV分离培养、浓缩、中和试验、细胞

30、培养及研究工作及其它需要应用活病毒的研究工作，应在级生物安全实验室（BSL-3）中进行。HIV核酸提取和检测均应在符合级生物安全实验室（BSL-2）要求的艾滋病检测实验室中进行。HIV病毒株应保存在符合级生物安全实验室（BSL-3）要求的艾滋病实验室；HIV阳性样品，包括全血、血清、血桨和其他组织（液）、核酸提取物应保存在符合BSL-2要求的艾滋病实验室。2009版新规定了病毒分离培养、保存不同样本的实验室级别,生物安全保证措施,建立安全制度实验室主任是实验室安全的第一责任人，对实验室工作和环境的安全负责，负责制定全面的实验室安全管理制度并监督落实。所有工作人员都应无条件遵守实验室安全管理制度

31、，保护自己和他人的安全。艾滋病检测实验室应建立下列安全制度，每年都应对安全制度或安全标准操作程序及其落实情况进行检查和修订，并有记录。,生物安全保证措施,应建立的制度：实验室的安全工作制度或安全标准操作程序（S-SOP）。意外事故处理预案，主要是生物安全意外事故。内容包括应急处理、登记和报告、调查和处理。信息安全及保密制度：与HIV/AIDS检测相关的所有资料均应严格保密，包括送检单、检测记录、样品登记、报告单及工作人员年度检测结果等，不得对无关人员透露检测结果。,生物安全保证措施,培训和管理 实验室应进行全员安全培训并强化“普遍性防护原则”安全意识，所有的血液、未固定的组织和组织液样品，均应

32、视为有潜在的传染性，都应以安全的方式进行操作。所有管理和检测人员都应接受省级以上艾滋病检测实验室主持的安全培训，包括上岗前培训和复训，并接受管理人员的监督。必须对新上岗人员进行安全教育和培训（2004版仅仅是告知，未要求培训），使他们清楚实验室工作的潜在危险，通过考核等方式确认他们具备安全操作的能力后方可单独工作。必须对新调入人员、外来合作、进修和学习的人员进行生物安全培训（2004版仅需批准即可进入），经实验室主任批准后，方可进入实验室。生物安全培训和监督应有客观详实的记录。实验室主任应详细了解所有工作人员的教育和培训背景、特长、性格特点等。要根据人员特点、工作种类、所涉及的生物材料合理安排

33、工作区域，要定期对实验室环境进行安全检查。,生物安全保证措施,个人保健和防护遇有手部皮肤有开放性伤口及其他不适于工作的情况，应暂停工作。皮肤的微小伤口、擦伤、皲裂等，应用防水敷料严密覆盖。应为每一名在艾滋病实验室工作的人员提供充足的防护服、一次性乳胶手套、口罩、帽子和覆盖足背的工作鞋。应将清洁的防护服和其他个人防护用品置于实验室清洁区内的专用处存放。实验室应设置应急冲洗眼睛装置。工作人员上岗前必须进行HIV抗体和乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒等肝炎病毒标志物检测，应接种乙肝疫苗。应每年对工作人员采血检测HIV抗体，血清应长期保留。进实验室工作前要摘除首饰，修剪长的带刺的指甲，以免刺破手套。,生物安

34、全保证措施,个人保健和防护严禁在实验室内进食、饮水、吸烟和化妆。实验操作时应穿合适防护服（白大衣、隔离衣或一次性工作服）、戴手套和口罩、穿实验室专用的工作鞋。如接触物的传染性大、应戴双层手套；含有HIV的液体（样品或病毒培养液）有可能喷溅时，应戴防护眼镜、穿防水（如塑料）围裙。工作完毕，先脱去手套，再脱去防护服，用肥皂和流动水洗手。穿过的污染的防护服应及时放入污物袋中，消毒后方可洗涤或废弃。操作过程中，如发现防护服被污染应立即更换，如手套破损，应立即丢弃、洗手并换上新手套。不能用戴手套的手触摸暴露的皮肤、口唇、眼睛、耳朵和头发等。不要将手套清洗或消毒后再次使用，因为使用表面活性剂清洗可使手套对

35、水的通透性增加，消毒剂可以引起手套的破损。禁止使用口腔吸液管，必须使用移液器来操作实验的所有液体。,生物安全保证措施,安全操作试剂及样品的管理实验室的清洁和消毒 样品的带入、带出和操作 使用利器注意事项较2004版相比，将个人防护、安全操作分开来阐述，更细致、清晰，可以有效指导实验室技术人员的实际工作。,污染物处理,应按照实验室生物安全通用要求（GB 19489-2004）和消毒技术规范（2002年版）处置实验室废弃物。艾滋病实验室产生的所有废弃物，包括不再需要的样品、培养物和其它物品，均应视为感染性废弃物，应置于专用的密封防漏容器中，安全运至消毒室，经高压消毒后再进行处理或废弃。,污染物处理

36、,艾滋病检测实验室常用的消毒方法物理消毒方法高压蒸汽消毒，121，保持1520min;干燥空气烘箱消毒（干烤消毒），140，保持23h。化学消毒方法含氯消毒剂（次氯酸钠，含有效氯20005000mg/L）75%乙醇2%戊二醛艾滋病检测实验室物品常用的消毒方法废弃物缸：5000mg/L 次氯酸钠。生物安全柜工作台面和仪器表面：75%乙醇。溢出物：5000mg/L次氯酸钠。污染的台面和器具：2000mg/L 次氯酸钠,也可以用过氧化氢或过氧乙酸。器械可用2%戊二醛消毒。,意外事故处理,将意外、事故的定义合并，取消形式化的解释，小型意外、重大意外等词汇被删除。突出强调发生意外事故后的处理方法。,意外

37、事故处理,发生意外事故时，应针对事故的类型立即进行紧急处理，主要包括：皮肤针刺伤或切割伤，应立即用肥皂和大量流水冲洗，尽可能挤出损伤处的血液，用70%乙醇或其它消毒剂消毒伤口。皮肤污染：用水和肥皂冲洗污染部位，并用适当的消毒剂浸泡，如70%乙醇或其它皮肤消毒剂。粘膜污染：用大量流水或生理盐水冲洗污染部位。衣物污染：尽快脱掉污染的衣物，进行消毒处理。污染物泼溅：小范围污染物泼溅，应立即进行消毒处理和清洗。发生大范围污染物泼溅事故时，应立即通知实验室主管领导和安全负责人到达事故现场，查清情况，确定消毒的程序。发生空气污染时，可采用低温蒸汽甲醛气体对空气进行消毒，但甲醛有致癌作用，不宜用于生物安全柜

38、和实验室的常规空气消毒。,意外事故处理,如果发生重大泼溅事故，应采取以下措施进行从污染处疏散人员，但要防止污染扩散；控制污染扩散，锁门并禁止人员进入；通知实验室主管领导、安全负责人等，查清情况，确定消毒处理的程序；必要时可进行生物安全柜和/或实验室的低温蒸汽甲醛气体消毒，使用这种方法生物安全柜和/或实验室必须密闭，人员必须离开。具体操作可按说明书执行。溢漏处可用经消毒剂浸泡的吸水物质覆盖；消毒剂作用1015分钟后，移走吸水性物质，用消毒剂冲洗，用水清洗。,意外事故处理,2004版采取以下措施：从污染处疏散人员，但要防止污染扩散；控制污染锁门并防止进一步进入；通知实验室主管领导、安全负责人等，以

39、便查清情况，确定消毒处理的程序；如果认为合适，可进行生物安全柜和/或实验室的低温蒸汽甲醛气体消毒，但生物安全柜和/或实验室必须有可靠的密闭性能，人员必须完全离开。【生物安全柜：25ml福尔马林和等量水混合后放在一个蒸发皿中使其在密封的生物安全柜中蒸发，保持至少6h，最好过夜。实验室：福尔马林和水的体积根据实验室大小而定】。具体操作可按说明书执行。发生溢出后应离开房间约30分钟。穿防护服，被溅的地方用经消毒剂浸泡的吸水物质覆盖；消毒剂起作用1015分钟后清理该地方。移走吸水性物质，用消毒剂冲洗该地方。,意外事故处理,意外及事故的登记、报告和检测 对重大意外和事故必须进行登记，对职业暴露事故应填写

40、“艾滋病职业暴露人员个案登记表”（附表9明确了事故发生时必须填写个案表）。内容包括：意外和事故发生的时间、地点及详细经过。详细记录职业暴露发生的时间、地点及经过；暴露方式；损伤的具体部位、程度；暴露物种类（培养液、血液或其它体液）和含有HIV的情况；事故处理方法和经过，包括专家或领导赴现场指导和处理的情况。处理方法及经过；是否采用暴露后预防药物，详细记录用药情况、首次用药时间（暴露后几小时或几天）、药物毒副作用情况（包括肝肾功能化验结果）、用药的依从性。随访和检测的日期、项目和结果。对重大意外和事故必须进行报告和检测发生重大事故时，在紧急处理的同时要立即向主管领导和专家报告。同时抽血检测HIV

41、抗体，暴露后4周、8周、12周、6个月要定期检测。发生小型事故时可在紧急处理后立即将事故情况和处理方法报告主管领导和专家。,HIV职业暴露的特点,经血传播为主,可能发生血源性病原体职业接触的主要工作场所,医疗机构病原制备机构血源性病原体临床实验室血源性病原体研究实验室医疗废弃物的收集、运输和处理的单位其他场所：采供血机构、戒毒所、殡仪馆、羁押或劳教机构等。,可能接触血源性病原体的主要人群,医疗机构医护人员疾病预防控制机构工作人员(包括志愿者)微生物实验室和科研机构工作人员.其他人员,如羁押或劳教机构、戒毒所的工作人员和殡葬业工作人员等*血源性病原体职业接触防护导则（报批稿）,医疗机构中可能涉及

42、的人员,医务卫生人员(有接触传染因子的护理、手术、接生、拔牙、内窥镜检查、输血、透析等）清洁人员检验人员病理人员护工人员,2008年全国职业暴露报告情况,单位报告例数*%医院 633 67.5公安司法系统 224 23.9采供血机构 7 0.7疾控机构 43 4.6其他 31 3.3*2008年(938)比2007年(598)增加56.9%.由于HIV检测实验室建立加快,2005-2006年HIV职业暴露系统分布,我国HIV职业暴露事故发生实验室类别统计（1997-2003),经血(体液)传播的方式,输血血制品共用针具皮肤粘膜刺伤，擦伤供血医源性传播日常生活传播其他,职业暴露的病因,已发现的病

43、因20种常见的病因HIV、HBV、HCV常见的途径皮损和粘膜暴露，溅向眼，鼻，口这里指的病因HIV,最常见的经血传播的传染因子,病毒类HIV，HBV，HCV，HGV，TTVHTLV-1，HTLV-2螺旋体类梅毒螺旋体原虫类疟疾，南美洲锥体虫病（Chagas Disease）,流行病学和实验研究证明增加感染的危险因素,接触血液量大，接触时间又长（血量）受损伤口深（深度）造成伤口的器械上有明显的血迹（血污）器械曾插入静脉或动脉内（采血的针头）接触的患者在事故后60天内死于AIDS（滴度）HIV培养物（滴度）皮肤粘膜病人处于急性感染与发病期（滴度）CD4低，VL高,估计暴露危险性,HIV皮肤 0.3

44、，粘膜 0.09HCV皮肤 1.8HBV皮肤 eAg(+)40%,eAg(-)1.5-10%,全球卫生保健人员被针刺伤,病种传染力感染可能性流行率(中国)HBV 30%14%HCV 6%10倍 4.1%HIV0.3%20倍0.1%,HIV职业暴露,存在危险性发生率很低,预防关键,认识和建立制度建筑布局安全操作个人防护医疗器具设备和消毒废弃物处理健康监护,HIV/AIDS的预防策略,一切阻断HBV的措施完全能对付HIV暴露阻断的重点是血液和体液严格执行阻断血液传播的法规，条例和规定加强工作人员防范意识的教育，树立良好的消毒灭菌观察，遵守各种制度要建立起管理系统，纳入单位重要工作议程一旦发生意外事

45、故，按要求处理对阳性者的态度,医务人员须知,有可能接触病人血液、体液要戴手套，操作完毕，脱手套洗手或消毒血液、体液飞溅到面部时，要戴口罩和防护眼镜，必要时穿隔离衣操作工作环境光线充足，防止意外刺伤或者划伤避免锐器或针头刺伤*卫医发2004108号,一般病房，如并有结核病要分开接触到血液、体液、分泌液事先戴好手套手术时可戴上两付手套接触后洗手工作人员有皮损或皮炎要用纱布覆盖，直至痊愈用纸巾擦去溅出的血并烧去,HIV/AIDS的预防要求 1,对血液或体液污染环境要消毒小心使用尖锐器具（尽量不用），刺破粘膜的要消毒后移出不能共用牙刷、剃须刀和其他个人用品医务人员在进行侵袭性诊疗，护理操作时要保证充足

46、的光线,HIV/AIDS的预防要求 2,实验室安全措施布局,有专用实验室（至少检测台），划分清洁区和污染区（半污染区），有明显标记，充足操作空间墙面、地面、台面耐酸、耐碱、易消毒、不渗液检验台应装置紫外灯备有消毒药品、消毒器材和设备有脚踏或感应流水装置，备有冲眼睛水，足够一次性手套、口罩、隔离服和防护眼镜清洁区（间）备有存放个人衣服、用品的设施；有条件的可设专用淋浴设备实验室应装置恒温设备，室温保持在20-25有防蚊蝇、鼠设备,实验室安全措施安全操作 1,实验室人员熟悉生物安全操作知识和消毒技术不在实验室喝饮料、吸烟、吃食物、化妆和会客实验室用品专用，不将私人和无关物品带入实验室工作时戴手套、

47、穿工作衣和隔离衣，如手套破损应立即丢弃、洗手并戴上新手套不用戴手套的手触摸暴露的皮肤、口唇、眼睛、耳朵和头发等尽量避免使用尖锐物品和器具；宜用不易破碎材料制品；禁止用口吸任何物质,实验室安全措施安全操作 2,结束工作后，对操作台消毒，如用消毒液清洗后，要干燥20分钟以上；操作时有标本、检测试剂溅出时应及时消毒，平时保持环境整洁工作完毕，脱去手套后洗手，再脱去工作衣，用肥皂和流水洗手遇意外事故，立即处理并分别以口头和书面方式报告上级部门，并立即进行局部处理遇高危意外事故，除局部处理外，同时应立即采取预防措施，包括随访、HIV检测、休息并暂时离开原岗位3个月，按医嘱服用抗HIV药物进行预防,推荐的

48、预防措施,对病毒传代、增殖和保存；生物学特性鉴定；药物体外筛选试验；培养传染性分子克隆；中和抗体试验；病人病毒分离应在P3进行，要按三级生物安全水平要求装置、设置、个人防护和消毒对人或动物疑有HIV或SIV样品、体液在BSL-2内进行，如处理浓缩材料，还要采用BSL-3级附加操作技术和防护设备（灭活的样品可以在BSL-1中进行）,实验室安全措施健康监护,工作人员从事工作前必须进行HIV抗体（乙型肝炎丙型肝炎等肝炎病毒标记物）的检测每半年做一次HIV抗体复测，并保留血样一年以上,半污染区,污染区,清洁区,职业暴露后预防,职业暴露指医务人员从事诊疗、护理、检验等工作过程中意外被艾滋病病毒感染者或者

49、艾滋病病人的血液、体液污染了皮肤或者粘膜，或者被含有艾滋病病毒的血液、体液污染了的针头及其他锐器刺破皮肤，有可能被艾滋病病毒感染的情况（2004版即暴露于含有HIV的液体等引起的危害）。职业暴露也包括其他行业的工作人员，如警察、公安、司法等部门的工作人员，羁押或劳教机构、戒毒所和殡葬业的工作人员，在工作过程中被艾滋病病毒感染者或艾滋病病人的血液、体液污染皮肤、粘膜或者刺破皮肤等情况（2004版：有关监管人员，不尽详实）。,职业暴露后预防,职业暴露发生后，通常应遵循四条原则：及时处理原则报告原则保密原则知情同意原则,职业暴露后预防,发生职业暴露以后，可以服用抗病毒药物，进行暴露后预防。艾滋病的职

50、业暴露后预防（Postexposure Prophylaxis，PEP）包括：急救（2个版本阐述无大的区别）对暴露级别的评估对暴露源的评估预防性用药（2004版：预防性用药的推荐处理方案）报告与保密,对暴露感染的危险进行评估,发生艾滋病病毒职业暴露后，所在医疗卫生机构应当组织专业人员对暴露的级别和暴露源的病毒载量水平进行分析、综合评估HIV感染的危险，必要时邀请本省或国家艾滋病专家参加分析和评估。根据暴露级别和暴露源病毒载量的水平估计HIV感染的危险，确定是否进行预防性用药及采取何种预防方案。,对暴露感染的危险进行评估,对暴露的评估：对应于2004版的暴露级别轻度暴露：指皮肤被实心针刺伤或表皮