微生物8细菌感染的检查方法与防治原则.ppt

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1、第八章 细菌感染的检查方法与防治原则,海南医学院 病原生物学教研室 饶朗毓,2011本科,2,目的要求,掌握：病原菌的常规分离与鉴定方法原则；疫苗的概念；死疫苗和活疫苗的概念及区别；类毒素的概念和特点；人工主动免疫和人工被动免疫的比较。熟悉：细菌形态学检查的方法；血清学诊断的方法。了解：细菌的免疫学诊断技术；亚单位疫苗和DNA疫苗。,3,感染性疾病的诊断,微生物学诊断,样本采集与送检原则,检验程序,血清学诊断,原则：采取急性期和恢复期双份血清，后者的抗体效价比前者升高4倍者有意义。,检测病原菌及其抗原、产物或核酸,检测患者血清中的特异性抗体,5,一.细菌标本采集与送检原则,采集合适的标本严格无

2、菌操作正确采集标本正确标记及包装正确运输及保存,6,二、致病菌的检验程序,形态学检查,分离培养,生化试验,血清学试验,动物实验,药敏试验,快速检测方法,初步诊断,明确诊断,7,（一）细菌的形态学检查,几种常用的显微镜：普通光学显微镜 暗视野显微镜 相差显微镜 荧光显微镜 电子显微镜,8,直接涂片染色镜检,菌体形态、排列、大小、染色性、特殊结构初步鉴定,9,单 染 法只显示细菌的形态与排列,复 染 法可观察细菌的形态、排列及其染色性,革兰染色（Gram stain),抗酸染色（Acid-fast stain),特殊染色法荚膜染色、芽胞染色、鞭毛染色、异染颗粒,染色法,步骤：,结果:阳性菌紫色 阴

3、性菌红色,由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。,革兰染色法（Gram Stain）,11,步骤：涂片固定 5%石炭酸复红初染 3%盐酸酒精脱色 美蓝复染 镜检,抗酸染色法,结果:抗酸菌红色；非抗酸菌蓝色。,12,特殊染色法,细胞壁染色法荚膜染色法芽胞染色法鞭毛染色法异染颗粒染色法,13,（二）分离培养与鉴定,液体培养基：增菌培养半固体培养基：查动力或保存菌种固体培养基：平板用于分离培养 斜面用于纯培养或保存菌种,14,菌落colony,大小、形状、色泽、边缘、透明度、凹凸、湿润度、溶血现象,细菌的生长现象 固体培养基,光滑型,粘液型,粗糙型,细菌的生长现象 固体培

4、养基,与鉴定细菌有关的菌落特征：,（1）溶血（2）色素（3）气味,17,（三）生化试验（biological tests）,糖类代谢,糖发酵试验,VP试验（Vi）,甲基红试验（M）,枸橼酸盐利用试验（C）,蛋白质代谢,靛基质（吲哚）试验（I）,硫化氢试验,尿素分解试验,糖发酵试验,产酸,产酸产气,不产酸不产气,原理：不同细菌因酶系统不同，能分解不同的糖；细菌分解糖后能产酸；如某些细菌因具有特殊的解氢酶则进一步分解酸产气。用途：肠杆菌科细菌的鉴定如：大肠埃希菌 伤寒沙门菌+痢疾志贺菌,碳水化合物代谢试验,吲哚试验,原理：,分解,细菌（含色氨酸酶）,色氨酸,吲哚（靛基质）,对二甲基氨基苯甲醛,玫瑰

5、吲哚,应用：肠道杆菌鉴定如：大肠埃希菌+沙门菌属,蛋白质和氨基酸代谢试验,20,（四）血清学鉴定（serological tests）,直接法玻片凝集试验（定性试验）,21,（五）动物试验,主要用于分离、鉴定致病菌，测定菌株产毒性等,22,23,（六）药物敏感试验,纸片琼脂法,测量抑菌环直径,24,25,（1）沉淀反应（precipitation）可溶性抗原（细菌可溶性抗原、免疫球蛋白、细胞裂解物、组织浸液等）与相应抗体结合，形成不溶性免疫复合物，出现不透明的沉淀物。多在半固体琼脂凝胶上进行，形成白色的沉淀。可分为单向免疫扩散试验、双向免疫扩散试验、免疫电泳、免疫比浊法等。,（七）病原菌的抗原

6、检测,沉淀环,环的直径与抗原含量成正相关,抗体混于琼脂凝胶中制板,对流免疫电泳,（2）协同凝集：用SPA测脑膜炎奈瑟菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌可溶性抗原作早期诊断。,（3）免疫荧光法：痢疾杆菌荧光Ab培养基+粪便标本荧光菌球,（5）免疫印迹技术：对细菌蛋白的检测,（4）酶免疫测定：ELISA测淋球菌、肠道菌抗原检测。,28,协同凝集试验：,葡萄球菌,SPA,IgG抗体,抗原,SPA-IgGFc段-Ag,29,荧光显微镜,30,二、致病菌的检验程序,形态学检查,分离培养,生化试验,血清学试验,动物实验,药敏试验,快速检测方法,初步诊断,明确诊断,31,标本：双份血清标本，恢复期血清中抗体效价比急性期

7、血清中抗体效价升高4倍者方有意义,种类：凝集试验：肥达试验（诊断伤寒、副伤寒）、外斐试验、显微镜凝集试验等沉淀试验：梅毒VDRL、RPR试验等,三、血清学诊断（双份血清）,原理：用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异性抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。,32,补体结合试验：诊断Q热（Q热柯克斯体抗体检测）；中和试验：诊断链球菌后风湿热的抗O试验 链球菌溶血素O+SRBC溶血（毒性）病人血清+链球菌溶血素O+SRBC不溶血（中和）ELISA:间接法查病人血清中病原体抗体（HBV）；双抗体夹心法测病原体抗原（HBV）。,(direct agglutination),

8、（乳胶颗粒）streptolysinO anti-slo（抗O试验）,补体结合试验：诊断Q热；,Ab?,+,-,35,(一)人工主动免疫(artificial active immunization)1.疫苗:（1）死疫苗：如白百破、伤寒、流脑、乙脑、流感、钩端螺旋体等。安全、方便；但抗原性改变，效果差，需多次注射；反应重）。（2）活疫苗：如BCG、鼠疫、炭疽等。多由减毒病原菌制成；偶可发生回复突变，毒力回升，接种后发病。联合疫苗在试用中。（3）基因工程疫苗、重组载体疫苗、合成疫苗、亚单位疫苗、DNA疫苗2.类毒素：细菌外毒素+0.3%0.4%甲醛处理后毒性消失,保留抗原性的生物制剂，如白百破疫苗.,第二节 细菌感染的特异性预防,36,1.抗毒素(antitoxin)2.抗菌血清3.丙球4.其他免疫制剂（IFN-、IFN-、IL、CSF、LAK细胞）。,(二)人工被动免疫,37,人工主动免疫与人工被动免疫,比较,38,思考题1.鉴定细菌的基本程序有那些?2.人工主动免疫与人工被动免疫的比较？3.何谓类毒素？,