需氧革兰阳性杆菌.ppt

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1、需氧革兰阳性杆菌,芽胞杆菌属Bacillus李斯特菌属Listeria丹毒斯菌属Erysipelothrix加德纳菌属Gardnerella,需氧芽胞杆菌属（Bacillus）48个种 与医学有关5个种 炭疽芽胞杆菌（B.anthracis）蜡样芽胞杆菌（B.cereus）蕈状芽胞杆菌（B.mycoides）巨大芽胞杆菌（B.megaterium）苏云金芽胞杆菌（B.thuringiensis）,临床意义,引起人、蓄共患的急性传染病，包括皮肤炭疽、肺炭疽、肠炭疽、败血性炭疽，烈性传染病,死亡率极致病因子：荚膜：抗吞噬，有利于细菌在组织内繁殖扩散炭疽毒素：保护性抗原、致死因子、水肿因子病后可获得

2、持久免疫力,炭疽芽胞杆菌,炭疽芽胞杆菌,革兰阳性大杆菌，两端截平，竹节状排列，有芽胞、无鞭毛、可有毒株有荚膜，芽胞椭圆形，小于菌体，位于菌体中央，多在有氧条件下形成，2530，在培养基中、土壤内、动物尸体解剖后暴露在空气中，都易形成芽胞在活体或完整未解剖尸体内不形成芽胞，尸体严禁解剖,普琼平板：灰色、粗糙型菌落；卷发状边缘（低倍镜下）BAP：不溶血NaHCO3 BAP：有毒株产生荚膜呈黏液型菌落，挑取时呈粘丝状(鉴别要点)无毒株粗糙型菌落,培养特性,肉汤培养基：絮状沉淀明胶371824h表面液化成漏斗状，由于细菌沿穿刺线向四周扩散形成倒松树状。,生化反应,葡萄糖+、麦芽糖+、蔗糖+、卵磷脂酶弱

3、+、触酶+硝酸盐还原试验+、VP、吲哚、硫化氢、柠檬酸盐、尿素明胶液化胨化牛乳：在牛乳中生长24天后牛乳凝固并缓慢胨化,抗原,菌体多糖抗原：与毒力无关，耐热，特异性不高，病兽脏器皮毛加热后仍可与相应抗体反应，称Ascoli热沉淀反应荚膜多肽抗原：抗吞噬，与毒力有关芽胞抗原：炭疽毒素Anthrax toxin：由保护性抗原、致死因子、水肿因子形成。,抵抗力,耐热、耐干燥对氧化剂敏感对青霉素、磺胺类抗生素敏感,微生物学检查,标本的采集：分泌物、痰、血液、粪便、呕吐物、脑脊液等，严禁宰杀解剖死蓄。标本的处理：液体标本取沉渣分离培养；固体标本用生理盐水浸泡，水浴杀死非芽胞菌；血液、脏器、渗出液增菌或直

4、接分离培养,痰、呕吐物、CSF及炎症分泌物,2%兔血清肉汤快速增菌374h,荚膜荧光抗体染色或荚膜肿胀试验,直接涂片,荚膜染色 G染色,初步报告,0.2ml注射小白鼠腹腔，8h后解剖,涂片G染色、荚膜染色,初步报告,快速检验程序,核酸检测,Ascoli试验,皮毛、腐败脏器等,生化反应,噬菌体裂解,青霉素抑制,毒力试验,皮毛、腐败脏器等,血液,以NG制成悬液经加温或饱和尿素处理,肉汤增菌培养,BAP或戊烷脒平板,2%兔血清肉汤48h,G染色镜检,菌落特征,动力观察,串珠试验,确定报告,荚膜肿胀试验,分离培养检验程序,法定报告传染病，发现疑是病例应于24小时内上报CDC,戊烷脒多粘菌素琼脂,基础培

5、养基25g/L戊烷脒:杀灭利什曼原虫等寄生虫 3000IU/L多粘菌素2%脱纤维羊血,检验方法,涂片染色：革兰阳性大杆菌、竹节状排列、有明显荚膜和芽胞初步报告荚膜荧光抗体染色或荚膜肿胀试验核酸检测：核酸杂交分离培养：BAP或戊烷脒多粘菌素B等选择性培养基。2%兔血清肉汤增菌分离培养,菌落特征形态染色生化试验:表131串珠试验:接种于含青霉素(0.050.5U/ml)的肉汤中，37 6h，大而均匀成串的圆球状菌体，与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关，类炭疽无此现象,鉴定试验,接种于含青霉素5、10、100U/ml琼脂平板，3724h 生长 受抑制不生长 串珠和青霉素抑制联合试验：,兔血琼脂平板,抑菌

6、环,青霉素纸片,青霉素抑制试验,串珠形成区,噬菌体裂解试验：AP631炭疽噬菌体 NaHCO3毒力试验：接种于含0.5%NaHCO3和10%马血清的平板，10%CO2、37、2448h，有毒株形成荚膜黏液型菌落，无毒株不形成荚膜粗糙型菌落 毒素动物试验：小鼠、家兔或豚鼠皮下接种植物凝集素试验：荧光或酶标记PHA与菌体多糖反应Ascoli热沉淀试验：可作追溯性诊断,其它实验,临床意义,食物中毒：含菌量达105/g以上，夏、秋季多见，中毒食物大多无腐败、变质现象，感官性状正常，应引起注意 呕吐型耐热肠毒素 腹泻型不耐热肠毒素全眼球炎（外伤后）心内膜炎、败血症和脑膜炎,蜡样芽胞杆菌 Bacillus

7、 cereus,蜡样芽胞杆菌 Bacillus cereus,形态：革兰阳性大杆菌、两端钝圆、有芽胞、周鞭毛、无荚膜培养特性：需氧或兼性厌氧，最适温度3035，营养要求不高。普通琼脂平板：菌落较大，灰白色，表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状，有蜡样光泽 BAP 有溶血 卵黄平板生长迅速，培养3h后，虽看不到菌落，但该菌可分解卵磷脂而形成白色的混浊环，称乳光反应或卵黄反应,生化反应,葡萄糖、蔗糖、麦芽糖等卵磷脂酶+、VP胨化牛乳、液化明胶，多次传代后生化特性常可改变,微生物学检查,呕吐物、残留食物等,活菌计数,接种BMBAP卵黄琼脂平板,371824h,直接涂片染色镜检,动物试验,生化反应,血清凝集,报

8、告结果,结果解释,因食品暴露于空气中，在一定程度都会受到本菌污染，所以不能分离出该菌就认为是引起食物中毒的病原菌。从食物中分离出菌数105CFU/g，提示本菌活跃生长，构成潜在危险从可疑食物分离到的菌株与从病人粪便和(或)呕吐物中分离到的菌株属同一血清型,三、枯草芽胞杆菌,生物学性状形态染色,革兰阳性大杆菌、两端钝圆有芽胞、无荚膜、有鞭毛,培养特性,BM：灰白色、不透明、干燥、锯齿状粗糙大菌落BAP：溶血大菌落,生化反应,触酶+葡萄糖、甘露醇、木糖、阿拉伯糖串珠试验卵磷脂酶,炭疽芽胞杆菌与其他需氧芽胞杆菌的鉴别,鉴别项目 炭疽芽胞杆菌 枯草芽胞杆菌 蜡样及其他芽胞杆菌形态 菌体两端平截、长链

9、两端钝园、短链 两端钝园、短链荚膜 多肽荚膜 动力+菌落 卷发状，有毒株为M型 锯齿状、R型 蜡样或R型肉汤生长 絮状沉淀、上层清 形成菌膜 均匀混浊有菌膜卵磷脂酶+溶血反应 不溶或微溶血 溶血 溶血Ascolis试验+串珠试验+青霉素抑制试验+植物凝集素试验+荚膜肿胀试验+荧光抗体染色动物毒力试验+蜡样芽胞杆菌的肠毒素可致小鼠等动物发病致死，但不产生荚膜，其他需氧芽胞杆菌（）噬菌体裂解试验+,李斯特菌属,产单核细胞李斯特菌红斑丹毒丝菌,一、产单核细胞李斯特菌生物学性状,革兰阳性短小杆菌成双排列有鞭毛（1820有动力；37动力缓慢），无芽胞，无荚膜4可生长BAP：灰白色菌落，有狭窄的溶血环半固

10、体培养基：倒伞形生长,生化反应,发酵多种糖类硝酸盐还原试验甲基红+VP试验+,抵抗力,耐碱不耐酸对热敏感对多种抗生素敏感（首选氨苄青霉素）对磺胺、杆菌肽、多粘菌素耐药,临床意义,主要引起脑膜炎、败血症传播途径：粪口途径，胎盘和产道致病因子：溶血素和菌体表面成分,微生物检查,标本,涂片革兰染色镜检,荧光抗体染色,动力检查（25，37）,血液,肉汤增菌,脑脊液沉淀物,咽喉拭子、组织、粪便冷增菌,接种羊血琼脂平板,生化反应,血清学试验,动物试验,二、红斑丹毒丝菌,革兰阳性杆菌，无芽胞，无鞭毛，无荚膜厌氧或微需氧BAP：形成两种菌落光滑型小菌落和粗造型大菌落。发酵葡萄糖及乳糖、液化明胶、产生硫化氢主要

11、引起家畜感染及人类丹毒,加德纳菌属,阴道加特纳菌,生物学性状,多形性，单个或成双排列，染色不定（视菌龄和菌种而定：临床株G+，保存株 G），无芽胞、无荚膜、无鞭毛兼性厌氧，营养要求高，BAP：可有溶血葡萄糖、麦芽糖、蔗糖氧化酶、触酶对青霉素类敏感、对磺胺类耐药,临床意义,与非特异性阴道炎（BV）有关 BV是阴道内乳酸杆菌被另一组厌氧菌为主的细菌取代，同时伴有阴道分泌物性质改变的一组综合征。主要病因为阴道内乳酸杆菌大量减少，伴有阴道加特纳菌、类杆菌、消化球菌及支原体大量增殖。,微生物学检查,分泌物（阴道、宫颈）,涂片染色镜检,分离培养（5%人血平板）,溶血菌落,纯培养（5%人血平板）,触酶、氧化酶（）,初步报告,GV的主要鉴定试验,最后报告,本章要点,概念：串珠试验、Ascoli热沉淀试验、青霉素抑制试验、NaHCO3毒力试验炭疽芽胞杆菌所致疾病与致病机理、微生物学诊断方法与判断依据,思考题,如何鉴定炭疽杆菌与非炭疽杆菌？,