醋酸纤维膜电泳.ppt

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1、醋酸纤维薄膜电泳实验操作指南,北京君意东方电泳设备有限公司,Beijing JUNYI-DONGFANG Electrophoresis Equipment CO.,LTD,网址实名：君意东方,点 击 进 入,退出请按 ESC,企 业 资 质,Credentials,ISO9001:2000国际质量管理体系认证 北京高新技术企业 制造计量器具许可证 医疗器械生产企业许可证 医疗器械产品注册证 质量、信誉双保障师范单位,凭借国内一流和领先的技术与雄厚的实力，敢于在国内率先提出“电泳仪保修三年”的服务承诺。电泳仪以极其优异稳定的性能赢得很多客户的高度好评，凭借电泳仪的高度稳定性才能确保“君意”电泳

2、槽每一次实验都能获得精确而清晰的电泳实验效果。凭借国内一流和领先的技术与雄厚的实力，敢于在国内率先提出“免费试用，满意后购买”的为新顾客解除购买顾虑保障消费者利益“的服务措施。经试用后，越来越多的老师，科研人员对“君意东方”的电泳产品和实验效果给予极高的评价。试用满意度和留用率为100%。实验结果的准确性和精度质量为100%。一次做成实验的成功率为100%，居国内 电泳产品领先水平。北京君意东方电泳设备有限公司生产的电泳产品，已多次代表中国出口到美国、巴西、澳大利亚等国家，国外的客户对国内的各个不同厂家的产品进行检测、试用后，并给予“君意东方”的电泳产品最好的评价，最终选定并批量定货的是“君意

3、东方”的电泳产品。,产 品 质 量,JY-SP7型醋酸纤维膜电泳槽(780元）双桥结构，配置三根铂金丝，有循环冷却用规格尺寸：225050(mm)可做各种纸电泳、醋酸纤维膜、载玻片等 电泳适用于临床检验、高校教学、科研等领域,材料和试剂,染色液：丽春红S（猩红）：1.6g三氯醋酸：12.0g蒸馏水：200ml漂洗液：(分三盒装)95%乙醇：450ml冰醋酸：50ml蒸馏水：500ml,镊子两把方饭盒一个长饭盒四个铅笔、直尺、剪刀、纱布蒸馏水摇床（可选）搅棒或磁力搅拌器锥形瓶或烧杯量筒（1000、250和100ml）玻璃片（1厘米宽、1毫米厚）微量移液器吸水纸封口膜,醋酸纤维膜的取用（1）,1,

4、用干净镊子从封口袋中夹出醋酸纤维硬膜，待硬膜露出2/3时进入下一步。,醋酸纤维膜的取用（2）,2,镊子转为夹取膜的短边，将膜取出。转入下一步。,醋酸纤维膜的浸润（1）,3,将膜的光面向下，使膜浮在缓冲液面上。注意：不要将膜直接插入缓冲液面下。,醋酸纤维膜的浸润（2）,4,缓冲液就会自膜的边缘逐渐渗透。,醋酸纤维膜的浸润（3）,5,直至膜全部均匀润湿。,醋酸纤维膜的裁剪（1）,6,用干净镊子取出全部均匀润湿的膜，用干净剪刀在暗面的“左上方”剪角。（这样便于在后续的操作中确定膜的反正面。）,醋酸纤维膜的裁剪（2）,7,如果只做一个样品，可以从膜上剪取一条。,醋酸纤维膜的加样（1）,8,用吸水纸吸干

5、膜表面的缓冲液。（加样处若不吸干的话，样品会随膜表面的缓冲液不定向漂移，造成实验结果不理想）,醋酸纤维膜的加样（2）,9,吸干表面的缓冲液时，若发现膜内出现干燥时（部分区域变白），应将膜放回缓冲液中润湿均匀后再吸干表面的缓冲液。,醋酸纤维膜的加样（3）,10,用铅笔在暗面距离上方1cm左右轻轻划线，根据上样量决定划线长度。（一般是1.5cm，宽度不超过4mm）,醋酸纤维膜的加样（4）,11,将样品用微量移液器点在封口膜或塑料膜的表面形成液滴。,醋酸纤维膜的加样（5）,12,用宽度为1cm、厚度为1-1.5mm，具有一定长度的玻璃片作为点样工具，用其平整的边缘蘸取样品。,醋酸纤维膜的加样（6）,

6、一手用干净镊子按住膜片，另一只手拿着蘸取样品的玻璃片“印盖”在加样线上。,13,醋酸纤维膜的加样（7）,可以调节膜片的角度使样品均匀分布于样品线内。,14,醋酸纤维膜的电泳（1）,将加好样的膜片架在电泳槽的调节杆上，加样端靠近负极。,15,醋酸纤维膜的电泳（2）,在膜片的两端加盖双层纱布，去除纱布间的气泡，使正、负极缓冲液可通过膜片得以连接。,16,醋酸纤维膜的电泳（3）,以恒定电流进行电泳。中压电泳仪电流大小按所有膜的宽度之和进行计算：常用0.5毫安/厘米。,17,醋酸纤维膜的电泳（4）,左图是一张9(1.56)厘米宽的膜被分成6条膜片。所以恒定电流应设为：5mA 或4mA(90.5=4.5

7、mA),18,膜宽1.5cm,醋酸纤维膜的电泳（5）,样品中加入0.05%(g/ml)溴酚蓝，便于在电泳过程中判断样品泳动状况。,19,醋酸纤维膜的染色、脱色,20,（染色、脱色时均可用摇床，用我厂的JY15B型时可选最大频率。）,电泳完毕，将纤维膜浸入染色液中3分钟。然后放入第一盒漂洗液中5分钟再移至第二、第三盒漂洗液中。直至蛋白呈红色，背景无色为止。,醋酸纤维膜电泳结果,21,稀释5倍的小牛血清恒定电流5mA电泳半小时染色、脱色的结果。,故障分析（1）,在浸泡膜的时候由于缓冲液直接到达了暗面的内部，致使越过的地方不易润湿。解决办法：以膜的光面向下，使膜浮在液面上。,22,故障分析（2）,加

8、样时膜片已经干燥，上样后，在纱布导引的缓冲液不均匀受力造成。解决办法：加样时若膜片已经干燥，请重新润湿均匀。,23,故障分析（3）,加样处若不吸干膜表面的缓冲液，样品会不定向漂移，造成实验结果不理想。解决办法：用吸水纸吸干膜表面的缓冲液。.,24,故障分析（4）,加样处若不吸干膜表面的缓冲液，样品会不定向漂移，造成实验结果不理想。解决办法：用吸水纸吸干膜表面的缓冲液。,25,故障分析（5）,右侧的膜电泳时间较短右侧的膜左数2、4泳道由于不溶颗粒物的影响而“拖尾”。可通过上样前对样品进行瞬时离心得以解决。,26,故障分析（6）,在膜上用铅笔勾划样品线时，若划破膜，就会形成图中右下角膜上的锯齿状条

9、带。解决办法：笔尖要光滑，用力要均匀适中。,27,建议配套使用君意的电泳仪 没有好的稳定的电泳仪，电泳槽很难跑出好的电泳谱带。君意电泳仪以极其优异稳定的性能，确保每一个电泳槽能跑出精度高，条带直，分离效果很清晰的电泳谱带。,请您登录君意电泳公司的网页：，通过“联系我们”中的“客户留言”您可以快速、便捷的获得以下服务：可以从网上定货、购买所需产品；可以对各种君意的电泳产品进行售前咨询；可以通过您留下的电子邮件为您寄去您所感兴趣的任何一款电泳产品的详细 实验操作及安装、制胶、灌胶、电泳条件的图片演示和各类资料；可以为您提供周到及时的售后技术支持；君意电泳实验室的国内一流电泳专家可随时为您咨询解答各种电泳实验技术 和电泳实验操作问题。,谢 谢！,