分子生物学郑敏.ppt

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1、RNA的剪接（RNA splicing）,RNA剪接（RNA splicing）：从DNA模板链转录出的最初转录产物中除去内含子，并将外显子连接起来形成一个连续的RNA分子的过程。,断裂基因(interrupted gene):对可表达为蛋白质的基因，如其初始转录产物与成熟mRNA相比，其间含不能编码为蛋白质的间隔序列，则这个基因称断裂基因。包括内含子（intron）和外显子（exon）。,生物体内内含子的种类,内含子的删除机理,（1）GU-AG型内含子（2）GC-AG型和AU-AC型内含子（3）I 类内含子和 II类内含子,（1）GU-AG型内含子,5 splice site含：GU3 sp

2、lice site含：AGGU-AG（最初称GT-AG）规则：描述了在前体mRNA中内含子的最初及最末位置上必须出现的恒定的双碱基,Correct splicing removes 3 introns by pairwise recognition of the junctions,核内RNA完成剪接所需的只是5位点、3位点和分支位点（branch site)的三个短的一致性序列。分支位点位于内含子3剪接位点1850个核苷酸处。,snRNA是GU-AG型内含子剪接所必需的,参与剪接过程的5个snRNP是U1，U2，U4，U5和U6。每个snRNP含一个snRNA 和几种蛋白质。snRNP和其他

3、一些辅助蛋白共同构成剪接体。,（2）GC-AG型和AU-AC型内含子,人类基因组剪接位点：GU-AG98%GC-AG 1%AU-AC0.1%注意：这几种内含子在很多基因组内同时存在，有时甚至出现在同一条基因里。,（3）I 类内含子和 II类内含子,I 类和II类内含子具自我切割能力。自我剪接（self-splicing,autosplicing)：像催化作用一样，内含子能从RNA里切下自已，而这只依赖于内含子中的RNA序列。,原始转录产物,自由鸟苷酸的3-OH作亲核基团攻击内含子5端的磷酸二酯键，从上游切开RNA链,RNA剪接中间产物,上游外显子的自由3-OH作为亲核基团攻击内含子3位核苷酸上的磷酸二酯键，使内含子被完全切开,完成剪接的RNA,II类内含子的自我剪接过程,Note:I类内含子比II类内含子更普遍，两类之间几乎无联系。但这两类RNA在体外都能自我剪接，而不需其它蛋白质提供酶活性。但在体内需蛋白质帮助折叠。,三类剪接反应总结：都是按两步酯交换作用进行：首先游离羟基进攻外显子1和内含子结合处；接着外显子1末端产生的羟基进攻外显子2与内含子结合处；两个外显子相连，内含子释放。,