《动物细胞工程》课件.ppt
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1、2.2 动物细胞工程,细胞工程的基本技术,植物组织培养技术,植物体细胞杂交技术,动物细胞核移植技术,动物细胞融合技术,单克隆抗体技术,动物细胞培养技术,(基础),从动物机体中取出相关组织,将它们分散成单个细胞,然后放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。,一、动物细胞培养1、动物细胞培养的概念,动物细胞培养技术,动物细胞培养技术,思 考,1、动物细胞培养取材时,一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官,请解释原因?2、为什么动物细胞培养过程需将组织分散成单个细胞?3、如何将动物组织分散成单个的细胞呢?4、如何理解原代培养和传代培养?5、传代培养的细胞能一直传代下去吗?为什么?6、动物细胞培养需
2、满足哪些条件?7、动物细胞培养有哪些应用?,动物细胞培养过程,1、选材:,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官它们细胞增殖能力强,分裂旺盛,分化程度低,容易培养。,2.将组织细胞分散成单个细胞,将组织块剪碎,用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理一段时间,这样组织就会分三成单个细胞。,思考:为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞?,单个细胞容易和周围环境进行物质交换获得营养物质、氧气等,排出代谢废物;分散成单个细胞培养能使细胞水平操作的其他技术得以实现。,1.进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞,说明细胞间的物质主要是什么成分?用胃蛋白酶行吗?,P44旁栏,用胰蛋白酶分散细胞,说明细胞间的物质主要是蛋白质。
3、不能用胃蛋白代替因为两者的最适pH不同,动物细胞培养适宜的pH为7.27.4,此环境下胃蛋白酶(最适pH 2.0)没有活性,而胰蛋白酶(最适pH 7.2-8.4)的活性较高。,胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗?为什么?,P44寻根问底,胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外,长时间的作用也会消化细胞膜蛋白,对细胞有损伤作用,因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。,动物组织,单个细胞,细胞悬液,贴壁生长,分瓶培养,10代细胞,50代细胞,不死细胞,原代培养,传代培养,胰蛋白酶,剪碎,加培养液,接触抑制,少数癌变,少数,3.配制细胞悬液,进行原代培养及传代培养,1、细胞贴壁:悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁
4、上,称为细胞贴壁。要求:培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。2、细胞的接触抑制:当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制。,4.如何界定原代培养和传代培养?,原代培养:将动物组织消化后的初次培养。传代培养:对贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理,然后再分瓶继续培养。,传代培养,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官,胰蛋白酶,(分解弹性纤维),10代细胞,无限传代,遗传物质未改变,遗传物质改变,动物细胞培养过程,多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中,根据你所学的内环境的知识,思考以下问题:1.体外培养细胞时需要提供哪些物质?2.体外培养的细胞需要什么样的环
5、境条件?,P46讨 论,充足营养(糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等合成成分及血清、血浆等天然成分。),适宜温度、PH和气体环境;无菌无毒环境,4、动物细胞培养的条件,(抗生素,更换培养液),(95%空气+5%CO2),(36.50.5,7.2-7.4),(合成培养基),1、大规模的生产生物制品。2、培养的动物细胞作为基因工程的受体细胞。3、检测判断物质的毒性。4、培养正常或各种病变的细胞,用于生理、病理、药理等方面的研究,如用于 等,为 及其他疾病提供理论依据。,5.动物细胞培养应用:,筛选抗癌药物,治疗和预防癌症,植物组织培养和动物细胞培养的比较,二.动物细胞核移植技术和克隆动物,
6、将动物的一个细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中,使其重组并发育成为一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体(克隆动物)。,1.动物细胞核移植概念:,(难度高),(二)、体细胞核移植的过程:,请看教材P48图2-21,思考:1.核移植的受体细胞是什么?处在什么时期?用此细胞作为受体细胞有什么好处?2.通过什么手段激活受体细胞,构建重组胚胎?,M中期卵母细胞,诱导方法:物理或化学方法激活受体细胞,完成细胞分裂和发育进程。,卵母细胞体积大,便于操作;含有营养物质丰富,提供早期胚胎发育所需的营养;含有激活细胞核体现全能性的物质。,胚胎移植,体细胞核移植过程(体细胞克隆动物),、在体细胞的细
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