细胞免疫学实验.ppt

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1、免疫学实验,微生物学与免疫学教研室,内容提要,E花环实验,E花环试验,人外周血T淋巴细胞上能与绵羊红细胞结合的受体，称为E受体，即CD2分子或LFA-2（淋巴细胞功能相关抗原-2）；在一定的试验条件下，绵羊红细胞能与该受体结合形成以T细胞为中心，四周绕以绵羊红细胞的玫瑰花团，故称E花环形成试验。,T,SRBC,CD2,固定、染色,固定：取出孵育后的细胞，滴加0.8%戊二醛200l（等体积），轻轻悬浮混匀，4孵育放置20-30min。涂片：向上述细胞悬液中加50l美兰染液，混匀，静置5min，取一滴于载玻片上，加盖玻片。,镜检,镜检：淋巴细胞呈蓝色，SRBC呈红色围绕淋巴细胞形成花环，凡表面粘附

2、有3个或3个以上SRBC者为花环形成细胞（即E阳性细胞）计数200个淋巴细胞，算出花环形成百分率，并推测其T淋巴细胞百分率。正常值为：5080%。,注意：计数及摇匀细胞时动作应轻柔，避免打散已形成的花环,结果,E花环分类,Ea-RFC(效应T细胞)：正常值为1535%。（activated rosette formation cells,A-RFC）。E-RFC(总和)：正常值为6080%。意义：E-受体为T细胞所特有，是鉴定T细胞的重要标志之一，还用于T细胞的分离。用于检测患者外周血中T细胞的比例及数目，间接反映患者细胞免疫功能。,视频动画,内容提要,淋巴细胞转化实验,淋巴细胞转化试验,植物

3、血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA）选择性刺激T细胞增殖；脂多糖（LPS）、葡萄球菌A蛋白（SPA）可刺激B细胞增殖；,T细胞、B细胞表面具有抗原识别受体和有丝分裂原受体,美洲商陆,淋巴细胞转化试验,原理,当T淋巴细胞在体外培养时，加入PHA或ConA刺激，T淋巴细胞可转化为淋巴母细胞，同时伴有DNA、RNA及蛋白质合成的增加，最终导致细胞分裂。根据其转化率可测定T淋巴细胞的功能，从而反映机体的细胞免疫功能。,DNA合成,分化,淋巴母细胞,刺激物,T淋巴细胞,未转化细胞,过渡态细胞,淋巴母细胞,转化淋巴细胞的判断标准,内容提要,大吞噬实验,原理,巨噬细胞对颗粒性抗原有强大的吞噬能力。常用细

4、胞型抗原如鸡红细胞、白色念珠菌、酵母细胞等与巨噬细胞孵育，检测巨噬细胞的吞噬能力。,原理,16,大吞噬试验,鸡红细胞,大吞噬细胞,对鸡红细胞消化程度分级：级：未消化，鸡红细胞核清晰，着色正常。级：轻度消化，鸡红细胞核模糊，核肿胀，着色淡。级：完全消化，鸡红细胞核溶解，染色极淡。,结果计算,可观察鸡红细胞的消化程度，以判断巨噬细胞胞内杀伤功能。吞噬百分比吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/所计数的巨噬细胞总数（吞噬的未吞噬的）100%吞噬指数100个巨噬细胞吞噬的鸡红细胞总数/100个巨噬细胞,临床意义,参考值：正常人吞噬百分比为60%65%，吞噬指数1%左右临床意义：可作为机体抗肿瘤能力的判断指标。恶性肿瘤病人吞噬百分比为34%38%。吞噬指数为0.6%左右。有人报告，食道癌、胃癌、肠癌、乳腺癌以及其它恶性肿瘤患者的吞噬百分比都在45%以下，吞噬指数也降低。不少患者在术后有不同程度的回升，提示本试验也可作为判断肿瘤疗效及预后的一个参考指标。,内容提要,小吞噬实验,原理,血液中的中性粒细胞通称小吞噬细胞。有强大的吞噬和消化异物的功能，构成机体天然抵抗力。在机体固有免疫和适应性免疫中发挥重要的作用。对中性粒细胞的检测包括运动功能、吞噬功能和杀伤功能的测定。对于感染等疾病有重要的辅助诊断意义。,结果,油镜下见中性粒细胞核深染且分叶，胞浆淡红色，细菌呈紫色。,