实验四福医大白细胞计数、网织红细胞计数、血沉.ppt

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1、实验四 白细胞计数、网织红细胞计数及血沉测定,目的 1掌握显微镜白细胞计数的方法。2掌握网织红细胞手工计数的方法。3血沉测定（示教）。,一、显微镜白细胞计数（临检指导P32）,1.概述 人外周血白细胞 单核细胞 白细胞 淋巴细胞 中性分叶核粒细胞 粒细胞 中性杆状核粒细胞 嗜酸性粒细胞 嗜碱性粒细胞,一、显微镜白细胞计数,2原理 用白细胞计数稀释液（2%冰醋酸加入1%美蓝或结晶紫数滴）0.38ml，将血液（20l）稀释20倍，在破坏成熟红细胞的同时固定白细胞，后充入改良牛鲍计数板，在低倍镜下计数四角4个大方格内的白细胞数，经换算求得每升血液中白细胞数。,一、显微镜白细胞计数,3.操作步骤（1）

2、加稀释液：白细胞稀释液0.38ml（2）稀释血液：末梢采血20l，加入稀释液中混匀（3）溶血：混匀后静置，待液体变为棕褐色（4）充池：同红细胞计数（5）计数：低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数。,一、显微镜白细胞计数,4.计算WBC=N/41020106=N/20109/L5.参考值 成人：（410）109/L 初生儿：（1520）109/L 6月2岁：（1112）109/L,6.注意事项（1）器材：微量吸管及牛鲍计数板的校正（2）标本采集和稀释应准确（3）加盖玻片方式：WHO推荐“推式”法（4）充液的影响：同红细胞计数（5）计数原则,一、显微镜白细胞计数,（6）计数室内的细胞分布要均匀：

3、各大方格间细胞 数相差不超过10%，否则应重新重池。（7）调整计数白细胞的数量或稀释倍数:细胞数量过 少，可扩大计数域(计8或9个大方格)或加大取 血量；细胞数量过多，可增加稀释液至0.79ml 或仅加血10l。（8）去除有核红细胞的影响：实际白细胞数/L=100校正前白细胞数/（100+有核红细胞）,7.方法学评价 显微镜计数法是传统的白细胞计数法，并可用 于校准血细胞分析仪，但其精密度和重复性欠佳。用于校准血液分析仪时应在严格规范的条件下进行。而校准的血液分析仪在严格规范的条件下，精密度和 准确性较高。,一、显微镜白细胞计数,血液分析仪检测速度快，适合大规模健康人群普查，但需特殊仪器，当某

4、些人为或病理情况（如外周血有核红细胞、巨大血小板和血小板凝集等）可干扰白细胞计数。,一、显微镜白细胞计数,8.临床意义 白细胞在生理或病理情况下均可有差异。多数与中性粒细胞数量变化一致。,二、网织红细胞计数（临检指导P26）,1.原理 网织红细胞（Ret）是晚幼红细胞脱核后到完全成熟的红细胞间的过渡细胞。其胞质中残存核糖核酸等嗜碱性物质，故经煌焦油蓝/新亚甲蓝染液活体染色后，可见有蓝绿色点状、线状、颗粒状或网状结构，故名网织红细胞。,二、网织红细胞计数,2.操作步骤（玻片法）（1）加染液：于载玻片的中央滴加煌焦油蓝乙醇溶液，自 然干燥后备用。（2）加血液：取血1滴，滴在染料上，用推片角轻轻将血

5、 滴与染料混匀，然后用另一载玻片垂直盖在此玻片上（尽量不留气泡），室温下静置1520min。（3）制备涂片。（4）油镜下计数1000个红细胞中的网织红细胞数（一般 连续计数3个视野即可）。,（5）也可用米勒氏窥盘（Miller oculordisc）置入接目镜内 进行计数（如下图）。具体方法是以窥盘的A区计数红细胞，B区计数网织 红细胞，由于B区的面积为A区的9倍，故计算如下：网织红细胞（%）=B区网织红细胞数/A区红细胞数 9 100%,二、网织红细胞计数,3.计算 网织红细胞分数数=计数的网织红细胞数/1000 网织红细胞绝对数=红细胞数/L网织红细胞分数数 4.参考值 正常成人：0.5%

6、1.5%新生儿：2%6%成人网织红细胞绝对值：（2484）109/L,5.注意事项（1）只有活体染色后才能看到网织红细胞，故必须将新鲜 血滴与染液相混合，染液与血液之比一般约为1：1，但若贫血严重也可按1：2关系处理。注意混匀，否则 有时凝固。（2）染色时间不得短于10min，否则可能着色不佳。计数 前注意多部位观察，可与涂片的体尾交界处选染色 好，红细胞分布既不分散又不重叠的区域进行计数。经此种染色后红细胞呈清晰的蓝绿色，凡胞质中含有 蓝绿色点状、短线状结构者为网织红细胞。,二、网织红细胞计数,网织红细胞,（3）计数时需注意与异物或假象相区别。如有异物残渣，多呈黑色，转动微螺旋时可见其折光性

7、。接目镜中粉尖 重叠于红细胞上所致的假象，则随接目镜转动而移位。勿将皱缩红细胞较深染的皱缩点勿认为网织结构，皱缩 红细胞其边缘处均匀的锯齿状可供作鉴别。（4）染色后的涂片应尽快观察计数，否则其网织结构可因 久置而溶解消失（尤其在夏天湿度大的季节）。,6.方法学评价 玻片法取血量少，且易于使混合血液中的水分蒸发，造 成染色结果偏低，但携带方便，适宜床边采血检查。,二、网织红细胞计数,二、网织红细胞计数,7.质量控制1.显微镜法 网织红细胞目视计数误差较大，影响因素主要有：操作人员对网织红细胞认识不同；血涂片质量好坏，计数红细胞数量的多少和计数方法等。,2.仪器法 虽可计数红细胞10 00050

8、000个，但受到H-J小体、有核红细胞、巨血小板等影响，可出现假阳性。,三、血沉测定（示教）（临检指导P29）,1原理(魏氏法)将一定量的抗凝全血灌注于特制的血沉管中，垂直立 于血沉架上1h后读取红细胞下沉后所暴露出的血浆段高 度（mm/h）。,三、血沉测定,2方法（1）取静脉血1.6ml，加入含109mmol/L枸橼酸钠0.4ml 的抗凝管中混匀。（2）吸血入血沉管中至刻度“0”处，将血沉管直立于血 沉架上。1h后观察结果。,三、血沉测定,3.参考值 50岁：男性015mm/h 女性020mm/h,4注意事项（1）枸橼酸钠抗凝剂与血液比例为1：4，并充分混匀。（2）最适温度为18-250C，并于采血后2h内完成。（3）温度高或低会影响血沉，需根据温度校正图校正。（见P32图2-11）（4）血沉管内径要标准，放置要垂直、不得倾斜。,三、血沉测定,