实验动物设施与管理饲料与营养.ppt
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1、,实验动物设施与管理实验动物的饲料与营养,第一节 实验动物设施,四要素:建筑物、设备、运行、管理。实验动物设施及环境硬件条件是影响实验动物质量和动物实验结果的重要因素。实验动物设施及环境运行管理是实验动物工作者的重要工作内容。简要介绍实验动物设施及环境相关基础知识、建设标准和运行管理概要。,一、实验动物设施分类(一)根据功能、使用目的分类:1.实验动物繁育、生产设施:用于动物生产的建筑物、设备、运行管理的总称。包括:动物生产区、辅助生产区、辅助区。2.动物实验设施:进行动物实验的建筑物、设备、运行管理的总称。包括:动物实验区、辅助实验区、辅助区。(二)按照空气净化的控制程度,实验动物环境及设施
2、国家标准(GB149252001),分三类:1、普通环境:传染因子不完全控制,普通级动物。2、屏障环境:严格控制传染因子,SPF级动物。3、隔离环境:绝对隔离传染因子,悉生及无菌动物。,附:实验动物环境设施分类(国标GB50447-2008),二、环境和实验动物的关系1.温度:环境温度高,动物食欲减退,摄食量减少,雄性动物精子生成能力下降,甚至出现睾丸萎缩,繁殖功能下;环境温度低导致动物冻伤、感冒、支气管炎和肺炎等疾病。2.湿度:高温、高湿表现闷热;低温、高湿动物的感觉是阴冷(兔的腹泻等);低湿时空气过分干燥,动物表现为躁动不安及反常现象(哺乳母鼠不让仔鼠哺乳,甚至吃鼠;大小鼠表现有环尾病特征
3、性症);北方加湿南方减湿。3.噪声:噪声可妨碍动物的怀孕、受精卵的着床,或者导致流产,甚至出现食仔现象,泌乳量减少,离乳率下降,动物间的咬杀率升高;强噪声可100引起DBA/2小鼠的听源性癫痫,ICR小鼠也有6880的发作率,SD大鼠肾小球毛细血管充血,KM小鼠胸腺重量明显减轻,脾脏重量明显增加,抗体形成细胞分泌抗体的能力均显著降低。,4.氨:和环境中的微生物相互作用后会诱发动物呼吸器官疾病如肺水肿、肺炎等(250mg/L下豚鼠49d,死亡率达80%,25250mg/L的氨环境中4周6周时,可发生严重鼻炎、中耳炎、支气管炎和支原体性肺炎);5.照度:影响动物的发情、繁殖以及视网膜障碍等。大鼠在
4、15Lx条件下,不发情个体增加。产仔数在250Lx条件下最多,白化大鼠在20000Lx下12h后就出现视网膜障碍;在200Lx时,雌鼠阴道开口比30Lx时要早3d。小鼠的发情周期在20Lx的光照下有规律地呈4d周期,比在5Lx或200Lx条件下稳定)。6.动物在IVC环境:生长发育优于开放环境,昆明种小鼠、近交系BALB/c小鼠、SD大鼠体重有显著差异(P0.05或P0.01),生长发育曲线也表明清洁级昆明种小鼠在IVC的生长发育明显优于开放环境;肺炎的发生率明显减少、炎症程度明显减轻),三、我国实验动物与动物实验设施标准,(一)设施建筑要求1.选址:避开自然疫源地,选择空气质量及自然环境较好
5、的区域;远离铁路,码头,飞机场,交通要道及工厂,贮仓等污染,噪声干扰的区域;如不能远离,则应布置在当地夏季最小频率风向的下风侧;与生活区保持50m的距离。2.建筑卫生要求:材料应无毒,无放射性;内墙表面应光滑平整,墙面采用不易脱落,耐腐蚀、无反光、耐冲击的材料;阴阳角均为圆弧形,易于清洗、消毒;地面应防滑、耐磨、无渗漏;天花板应耐水、耐腐蚀;3.建筑设施要求:门窗良好的密封性走廊宽度不小于1.5m,门宽度不小于1m通风空调系统合理的设置电源应备有应急电源,(二)设施区域设置要求,1.前区设置:办公室 维修室库房饲料间外走廊(参观、通道)2.饲育区辅助区设置:仓库 洗刷间废气物品存放处理间动物尸
6、体冷藏存放间(冰箱)机械设备室(机房)沐浴间 更衣,休息室等,2.饲育区设置:,(三)实验动物与动物实验环境国家标准,1.实验动物环境及设施国家标准(GB149252001)该标准规定了实验动物设施的环境要求。2.实验动物设施建筑技术规范国家标准 GB50447-2008 该规范是解决如何建设实验动物设施,以满足实验动物设施的环境要求,包括建筑、结构、空调净化、消防、给排水、电气、工程检测与验收等。,繁殖、生产实验动物设施国标规定指标(生产许可证),动物实验设施国标规定指标(使用许可证),每平方米动物饲养密度,屏障级设施和普通级设施 生科院中药与海洋药物实验室,SPF级设施2004年取得使用许
7、可证,SPF级饲养员罗秀兰(8年),普通级设施2004年取得使用许可证,SPF级饲养员宗国巧(18年),生科院中药与海洋药物实验室SPF动物设施人员流动路线,生科院中药与海洋药物实验室SPF级动物设施物品流动路线,生科院中药与海洋药物实验室SPF级设施动物流动路线,第二节 实验动物设施的运行管理,动物设施正常运行离不开管理管理的核心内容是:管人、管物、管设备管理的方式是:规章制度和操作规程(SOP)管理效果验证:环境检测结果(动物质量检测)管理的理想模式:员工道德价值观的建立,一、人员配置及管理设施负责人:负责、协调、跟踪、落实后勤保障人:设施、设备运行、记录、维护。一般由设施内、外辅助人员担
8、任。质量监督人:设施内外操作、记录监督。,罗秀兰实验动物技术培训资格证,二、屏障设施、设备运行维护重点新设施运行前准备:调试、检测、入设备、卫生、消毒、再检测配电系统:备用电源,电管家空调系统:温湿度。专业公司,定期维护。备用空调风机、风管:风量。报警,检漏。备用风机过滤器:定期更换灭菌器:安检,持证上岗。净化水设备:设施内外:环境卫生,维持性消毒。渡槽液更换环境监测:定期,三.规章制度和操作规程1.设施设备运行、使用、维护方面。如:空调、电、水、风机、灭菌炉、传递窗、渡槽等。2.过滤器安装、使用、清洁、更换。3.设施内外卫生、维持性消毒。4.人员、物品、动物的管理及进出设施的管理。5.设施内
9、饲养人员和实验人员操作及管理。6.安全值班检查7.环境检测,举例实验动物编号标记标准操作规程(SG-016),1目的:为了规范实验动物编号标记方法,对分组后的实验动物进行标记编号,制定本程序。2范围:适用于实验动物编号标记的活动。3职责:所有实验人员应遵守本规程,动物实验室负责人负责监督和管理。4工作程序:4.1良好的标记方法应满足标号清晰、耐久,简便、适用、无明显损伤、无毒和易辨认等要求。常用的标记方法有染色法、耳缘剪孔法、烙印法、挂号牌法、挂环法等。4.2染色法:染色法是用化学剂在动物身体明显部位如被毛、四肢等处进行涂染,或用不同颜色等代表一定的编号,来区别各组动物,是实验室最常用、最容易
10、掌握的方法。常用染色剂:黄色:35苦味酸溶液 红色:0.5中性红或碱性品红溶液 咖啡色:2硝酸银溶液(涂后需光照10分钟)黑色:煤焦油的酒精溶液,4.2.2 编号的原则:如动物数在10只以下,在左前腿上为 1,左腰部为2,左后腿为3,头部为4,背部为5,尾基部为6,右前腿为7,右腰部为8,右后腿为9。如果动物编号超过10,需要编10100号码时,可采用在上述动物的不同部位,再涂染另一种涂染剂(如0.5中性红或品红溶液)斑点,即表示相应的十位数,即左前腿上为10,左腰部为20。如在左前腿上标记红色和黄色斑点,表示为11,如果红色标记在左前腿上,而黄色标记在左腰部,是12,以此类推。如图。本设施大
11、小鼠采用染色法编号标记。,4.3 烙印法:用刺数钳在动物耳上刺上号码,然后用棉签蘸着溶在酒精中的墨黑在刺号上加以涂抹,烙印前最好对烙印部位预先用酒精消毒。4.4 号牌法:用金属制号牌固定于实验动物的耳上或系颈上。本设施狗采用此法编号标记。,4.5鼠尾标记编号 用苦味酸溶液涂擦在鼠尾部(图)。4.6 孔法或剪口法:耳孔法是用打孔机直接在实验动物的耳朵上打孔编号,根据打在动物耳朵上的部位和孔的多少,来区分实验动物的方法。用打孔机在耳朵打孔后,必须用消毒过的滑石粉抹在打孔局部,以免伤口愈合过程中将耳孔闭合。耳孔法可标记三位数之内的号码。另一种耳孔法是用剪刀在实验动物的耳边上剪缺口的方法,作为区分实验
12、动物的标记。本设施内裸鼠采用剪耳法进行编号标记。,四.近年来中山大学和生科院的新规定等1.中山大学:生物安全管理实施细则的颁布 突发事件的紧急预案 实验动物管理委员会2.生命科学学院:伦理委员会 动物福利与伦理审查表 动物尸体无害化处理3.生科院中药与海洋药物实验室动物实验流程图,2007年12月12日通过中山大学实验室生物安全管理实施细则,2008年12月中山大学生命科学学院成立实验动物伦理委员会。,广东生活环境无害处理中心集中上门收集动物尸体和其他废弃物。操作是实验处死的动物先低温冷冻保存,待冰箱填满后通知中心前来收取。,动物实验流程图,实验动物质量合格证明(生产许可证单位提供),动物实验
13、设施使用证明(使用许可证单位提供),第三节 特殊要求的动物实验室,一.生物危险因素设施(Bio-hazard)1.实验动物所产生的危害:抓伤/咬伤;吸入气溶胶;动物尸体污染。2.以脊椎动物为媒介和宿主的微生物病等病原体危害:微生物的致病性;微生物的生态变异和免疫学特征;疾病的临床症状和预后;预防治疗和诊断的难度;疾病的生态分布。3.转基因、克隆、重组基因等的危害:由DNA载体的不同,特别应重视因致病性、产生毒素的能力、寄生性、定着性、致癌性、耐药性、产生变态反应、产生扰乱物质代谢和扰乱生态体系等,造成生物危害。二.放(辐)射污染设施(Radio-hazard)1.GB4792-84放射卫生防护
14、基本标准和GB8703-88辐射防护规定2.GB11928低、中水平放射性固体废物暂时贮存规定3.GB14925-2001实验动物环境及设施,三.生物危害程度分级级:不会致病的危害(枯草杆菌、丝状虫类)级:个体危害不严重、群体传播风险及危害有限(流行性感冒等)级:个体危害严重、群体传播风险及危害低等(霍乱、结核等)级:个体危害严重、群体传播风险及危害高等(出血热等)四.生物危害程度分级 生物安全水平分级:对应相应的生物危害程度分为4级;实验室:BSL-1 BSL-2 BSL-3 BSL-4 动物实验室:ABSL-1 ABSL-2 ABSL-3 ABSL-4,BSL-1 实验室可从事一般具有活性
15、但对健康成人不致病、对人员和环境可能有微弱伤害的微生物;建筑防护:无需特殊选址;防止节肢和啮齿动物进入;每个实验室应 设洗手池;台面防水、耐磨蚀;应有适当的消毒设备等;人员防护:穿实验室外衣;手皮肤破损需要戴乳胶手套操作;必要时 佩戴眼睛或防护面罩;培养物、菌种管等抛弃前进行适当 消毒;BSL-2 实验室适合从事某些带有传染性或潜在传染性,但在标准操作时对工作人员不构成伤害的微生物工作;建筑防护:满足BSL-1的要求;建筑内应配备有高压蒸气灭菌器;配备生 物安全柜;配备应急喷淋及洗眼设备;可以使用自然通风等;人员防护:感染危险(免疫力下降、使用免疫抑制剂或措施)人员不准 进入;在生物安全柜中进
16、行操作(易产生气溶胶等的实验);高度警惕锐器伤及动物咬伤;穿防护衣、佩戴目镜、口罩等;处理感染动物戴双层手套等;,BSL-3 实验室适用于或类危害,使之对人或环境不产生危害;建筑防护:满足BSL-2的要求;独立建筑物或单元;要有淋浴;进出实验 室要有气锁门;负压通风,保证气流从外进入,不倒流不能 在实验室内部循环;至少经一道HEPE过滤方可排放;安全柜 必须一年检定一次;实验室出口处设置脚动、肘动或自动洗 手池;8级抗震设计;设立压力报警装置;人员防护:满足BSL-2的要求;实验室里必须穿背开衣或连裤衣;不能在 安全柜操作时严格佩戴防护面具;有感染动物实验时戴防毒 面具更安全;BSL-4 实验
17、室从事对工作人员有极大危害和产生烈性传染病流行的微生物工作;不同于BSL-3的特点是次级防护性能更加严密;防止传染因子外溢环境更加可靠;建筑防护:满足BSL-3的要求;独立建筑或完全隔离区域;设置双屝高压 灭菌器;两级污水排放消毒池;2次以上高压过滤排出;配 备3级生物安全柜、正压服;设置观察室;人员防护:满足BSL-3的要求;进入离开均需淋浴;所有进入器材均经双 屝高压灭菌器或熏蒸消毒柜或气锁传入,传入时两门不能同 时开启;传出的活体或材料经2级包装、表面消毒,能高压 的均需高压灭菌传出;每次实验完成后均彻底消毒、检察和维护;,第二部分,实验动物饲料与营养,主 要 内 容,实验动物所需的营养
18、素实验动物的营养需要实验动物饲料的分类及配制,水 分,无氮浸出 物,饲料中营养成分组成,饲料,干物质,无机物(粗灰分或矿物质),有机物,含氮化合物(粗蛋白质),无氮化合物,乙醚浸出物(粗脂肪),碳水化合物,粗纤维,第一节 实验动物营养需要与营养标准,营养素(nutrition)指生物体为了维持生命而从外界以食物形式摄入的必需物质。实验动物所需营养素的种类:到目前为止已知动物机体所需的各种营养物质达50余种,其中最主要的可划归六大类,即:蛋白质、脂类、碳水化合物、矿物质、维生素、水。作为能量来源:脂肪、碳水化合物、蛋白质;作为身体构成成分:蛋白质、矿物质;调节身体功能:维生素、矿物质。合理搭配这
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