实验一收集动物组织的活细胞-RH.ppt
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1、实验一 收集动物组织的活细胞并计数和测定成活率,问 题,如何知道每升血液中红细胞、白细胞、血小板的数量?如何知道水样中某小型生物的数量?如何知道发酵液中啤酒酵母的密度?如何知道生物制剂生产罐中细胞的密度?,实验目的,学习机械分离法获得动物组织的活细胞学会使用血球计数板测定细胞悬液的细胞密度掌握活细胞和死细胞的鉴别方法,收集动物组织的活细胞,从组织中分离单细胞的方法有多种:对于较为柔软的组织(如肝脏、脾脏),可以采用机械研磨的方法分离细胞,但这会造成一些细胞的损伤而降低细胞的成活率;对于比重差异较大的细胞,可以采用离心的方法来分离,例如血液中各种血细胞的分离;对于股骨中骨髓细胞的分离,则可以采取
2、冲洗股骨腔的方法获得。,实验材料,小鼠小鼠的抓法:从鼠笼内将小鼠尾部抓住并提起,放在磁盘上或报纸上。,小鼠的处死:颈椎脱位法右手(左手)抓住鼠尾用力向后拉,同时左手(右手)拇指与食指用力向下按住小鼠头部,在颅骨基部的后侧与颈椎两侧,施加压力,使头颅和脑一起与脊髓分离。当脊髓与脑分离时,伴有大量的肌肉活动。经研究证明,这种方法能使实验动物对痛觉不再敏感。,脾脏淋巴细胞悬液的制备,1.机械分离法 用镊子将脾脏置于尼龙布上,用注射器推棒轻轻挤压组织,使细胞分散。将尼龙布置于玻璃漏斗中,用D-Hanks 液冲洗尼龙布,收集细胞悬液于离心管中。2.低渗溶解红细胞(红细胞溶血)0.87%NH4Cl 溶液,
3、股骨骨髓细胞悬液的制备,冲洗骨髓腔:用剪刀剪开股骨的一端,将注射器针头插入股骨开口端。然后用剪刀剪开股骨的另一端,用D-Hanks液多次冲洗骨髓腔,收集细胞悬液于离心管中。,D-HANKS液(无钙镁离子的HANKS液)配方,NaCl 80.0克Na2HPO42H2O 0.6克(如为12H2O,则需1.2克)KCl 4.0克KH2PO4 0.6克双蒸水 1000毫升 原液稀释10倍即为使用液-D-Hanks液,细胞计数和细胞存活率,利用单细胞悬液进行实验研究时,通常需要确定细胞悬液的细胞密度和活细胞的数量,这就要进行细胞计数和细胞存活率的测定。细胞计数一般用血球计数板,细胞存活率的测定一般采用染
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