基因工程的操作程序.ppt
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1、1.2基因工程的基本操作程序,基因工程的基本操作程序,目的基因的获取,基因表达载体的构建,将目的基因导入受体细胞,操作过程,目的基因的检测与鉴定,目的基因主要是指_,编码蛋白质的结构基因,目的基因的获取,即:将需要的基因从供体生物细胞内提取出来,目前被广泛提取使用的目的基因有:植物抗虫基因、抗病基因、人胰岛素基因、抗体合成基因等。,获得目的基因的方法,3)从基因文库中获取目的基因,2),2)利用PCR技术扩增目的基因,1)化学合成,1.用一定的_切割 质粒,使其出现一个切 口,露出_。2.用_切断目 的基因,使其产生_ _。,核心,3.将切下的目的基因片段插入质粒的_处,再加入适量_,形成了一
2、个重组 DNA分子(重组质粒),限制酶,黏性末端,同一种限制酶,的黏性末端,切口,DNA连接酶,相同,(二)基因表达载体的构建,基因表达载体的组成:,目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时使目的基因能够表达和发挥作用。,不能转录为信使RNA,不能 编码蛋白质。,:能转录相应的信使RNA,能 编码蛋白质,编码区,非编码区,原核细胞的 基因结构,有调控遗传信息表达的核 苷酸序列,在该序列中,最重要的是位于编码区上 游的RNA聚合酶结合位点。,非编码区,非编码区,编码区,编码区上游,编码区下游,启动子,终止子,补:真核细胞的基因结构,编码区,与RNA聚合酶结合位点,内含子,
3、外显子,能够编码蛋白质的序列叫做外显子,不能够编码蛋白质的序列叫做内含子,启动子,终止子,编码区上游,编码区下游,内含子:,外显子:,Focus:真核细胞的编码区是不连续的,而原核生物的编码区是连续的,(三)将目的基因导入受体细胞,常用的受体细胞:,动植物细胞、大肠杆菌、土壤农杆菌、枯草杆菌等。,转化,目的基因进入_内,并且在 受体细胞内维持_和_的过程,受体细胞,稳定,表达,方法,导入植物细胞,导入动物细胞,导入微生物细胞,农杆菌转化法,基因枪法,花粉管通道法,显微注射法,感受态细胞吸收DNA分子,(三)将目的基因导入受体细胞,(四)目的基因的检测与鉴定,检查是否成功,检测,鉴定,检测转基因
4、生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因,检测目的基因是否转录出了mRNA,检测目的基因是否翻译成蛋白质,抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等,方法,方法,方法,DNA分子杂交,DNA分子杂交,抗原-抗体杂交,PCR技术聚合酶链式反应(polimerase chain reaction),原理:前提:条件:,PCR扩增仪,DNA双链复制的基本原理,一段已知目的基因的核苷酸序列,四种脱氧核苷酸,一对引物,热稳定DNA聚合酶(Taq酶),DNA的两条链为模板,温度控制,变性,1.目的基因DNA受热变性,解链;2.引物与单链互补结合;3.合成链在DNA聚合酶作用下进行延伸。,利用PCR技术扩增目的基因,P
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