兽医生物制品学第八章兽用疫苗生产与质量控制.ppt

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1、疫苗生产工艺介绍,疫苗生产基本条件疫苗生产工艺流程生产中影响疫苗质量的关键环节疫苗抗原制造技术介绍疫苗检验疫苗保存,1、疫苗生产基本条件,产品批准文号菌（毒）种疫苗制造及检验规程GMP厂房、设施和仪器设备,产品批准文号,农业部颁发批准文号GMP证书(具备该疫苗生产线)产品复核检验(具备生产该疫苗的能力)标签、说明书样稿审查(符合规程规定)省级文号？,菌（毒）种,菌（毒）种是疫苗生产必备的原材料，国家对菌（毒）的保管和使用有严格的规定和限制（生物安全问题）。生产疫苗的菌（毒）种来源：中国兽医药品监察所或新兽药转让单位。菌（毒）种保管和使用：基础种毒由中国兽医药品监察所或其委托的保管单位进行生产、

2、鉴定和保管，生产用种子批由企业生产、鉴定和保管。,菌（毒）种分类,菌（毒）种分强毒和弱毒强毒：通常指从得病动物体内分离到的致病毒株，只能用于制造灭活疫苗和检验用弱毒：通常是采用人工的方法用强毒致弱而成，一般于制造活疫苗,菌（毒）种质量标准,生物学特性明显、历史清楚：形态、培养特性、生化特性及血清免疫学特性等明显，易于鉴别；人工感染动物引起稳定一致的临床症状和病理变化特征；原始细菌或病毒株的来源地区、动物品种流行资料清楚；分离鉴定资料完整；传代、保藏和生物学特性检查方法明确。遗传学上相对纯一与稳定：菌毒种在传代增殖过程中某些遗传形状会发生改变和分离，如形态特征、毒力、反应原性、免疫原性等方面，因

3、此要求制造生物制品的菌（毒）种的这种改变和分离越小越好，应经常进行挑选，纯化和克隆。,反应原性和免疫原性优良：反应原性高，即使微量量的抗原物质进入机体内既能产生强烈的免疫反应，血清学上会出现很高的特意性；优良的免疫原性物质能使免疫动物产生完善的免疫应答，从而获得坚强的免疫力毒力应在规定的范围以内：用于制造弱毒疫苗的菌毒种，毒力应尽量弱一些；用于制造抗血清、灭活疫苗和疫苗效力检测的菌（毒）种毒力应强，且抗原性要尽量高,菌（毒）种的筛选程序和内容,弱毒菌（毒）种的选育,疫苗制造及检验规程,任何一种疫苗都有其制造及检验规程，它是国家法定标准。疫苗的生产必须严格按规程规定的方法进行生产和检验，若要改变

4、方法，则要提供研究材料证明是可行的，并报农业部评审批准，形成新规程才能进行生产。规程来源中华人民共和国兽用生物制品规程（常规疫苗）转让单位（新兽药）,厂房、设施和仪器设备,GMP证书是疫苗生产的准入证，疫苗生产必需拥有与生产工艺相符合的生产线 GMP 生产车间设计要求功能区：抗原制备区、成品生产区、洗涤区、办公区。各区域和功能间以洁净走廊相连，严格按人流物流分开原则进行设计。洁净度：按各功能间洁净度、压力、压差要求设计施工。有10万级区、万级区和局部百级区。六大系统：供电、供水、供汽、污水处理、净化、监控。,厂房、设施和仪器设备,检验设施质检室检验动物舍（应配备有符合各类实验动物级别饲养设施）

5、仓储设施原辅材料库半成品库成品库,厂房、设施和仪器设备,灭菌设备：高压蒸气灭菌柜、干热箱、锅炉等；净化设备：净化机组、无菌室、超净工作台等；微生物培养设施设备：温室、孵化器、细胞培养转瓶机、各种罐体、生化培养箱等；乳化设备：各种罐体、胶体摸、高压匀浆机等；冻干设备：冻干机；灌装设备：洗烘连动线、自动灌装加塞联动机；包装设备：扎盖机、帖标机；冷藏冷冻设施设备：冷库、冷柜、液氮罐等；污水废弃物处理设施设备：灭菌柜、消毒罐、污水处理站；检验仪器设施设备：各种显微镜、水分测定仪、二氧化碳培养箱、生物安全柜、动物房等。,福州大北农公司总体布局图,疫苗生产工艺流程,菌（毒）种 培养物（培养基、动 物、禽胚

6、或细胞等）收获抗原（培养液、含毒组织、胚液或细胞液等）配苗 分装 冻干成活疫苗或灭活后制成灭 活疫苗。,细菌疫苗的制造流程,蛋白胨、肉浸液等原料,病毒性细胞疫苗的制造工艺流程,健康动物（或胚胎）,病毒性组织疫苗的制造工艺流程,感染动物或胚胎,分装、扎盖、贴签,影响疫苗质量的关键环节,活疫苗生产用菌（毒）种的制备是否优良制苗用抗原制备（微生物增殖）是否高效冻干保护剂的选择和冻干曲线的制定是否合理灭活疫苗生产用菌（毒）种的制备是否优良制苗用抗原制备（微生物增殖）是否高效抗原灭活是否彻底乳化工艺是否先进,疫苗抗原制造技术介绍,细菌类疫苗抗原增殖技术（培养基增殖）细菌培养是指细菌在动物体外的人工培养基

7、上以及人工控制的环境中（通常用培养罐进行培养）生长繁殖的过程。细菌性疫苗都是利用培养基制造的，首先通过分离培养，获得单个菌落，制备细菌种子，然后逐级培养进行规模化生产。,细菌类疫苗抗原增殖技术（关键控制点）培养基质量：培养细菌类疫苗抗原的培养基一般是人工制备的一种液体培养基，它含有培养相应细菌所需营养成分，包括水、氮源、碳源、无机源和生长因子等它的好坏直接影响到产菌量和检验结果。,生产用菌种菌落挑选符合细菌培养特性活菌含量符合要求纯净无污染代次按规定控制工艺的稳定性培养条件工艺技术（各种参数如种子接种量、培养时间、收获时间等）,传统病毒类疫苗抗原增殖技术动物增殖禽胚增殖细胞增殖,5、疫苗检验,

8、活疫苗物理性状（冻干苗）无菌检验（纯粹检验）鉴别检验：特异性血清中和检验。外源病毒检验（病毒类疫苗）：中和法检验。活菌计数（细菌类疫苗）：平板计数。病毒含量测定（病毒类疫苗）：EID50、ELD50或TCID50。,安全检验：动物或鸡胚（剂量几倍至几十倍）效力检验：攻毒保护或微生物含量测定。水份测定（冻干苗）：4%以内。真空度测定（冻干苗）：白色、粉色或紫色辉光。,灭活疫苗灭活检验：半成品检测：EID50、ELD50或TCID50。物理性状：外观、剂型、稳定性、粘度检验。无菌检验：培养基检测安全检验：动物检验效力检验：攻毒保护或测抗体。灭活剂含量测定：化学分析,6、疫苗保存,疫苗对温度极为敏感

9、，保存不当会使效价严重受损（尤其是活疫苗）或剂型破坏，并导致疫苗失效，因此应严格在规定的条件下保存。,7、猪瘟活疫苗产品介绍,种类：猪瘟活疫苗根据抗原制备途径不同又分为：猪瘟活疫苗（成兔脾淋源）猪瘟活疫苗（乳兔源）猪瘟活疫苗（细胞源）猪瘟活疫苗（牛体源）疫苗研究和发展历史背景,3.6猪瘟活疫苗产品介绍生产和使用对比,猪瘟活疫苗质量控制要素,菌毒种纯净（细菌和外源性病毒污染）含毒量高于国家标准代次控制在5代以内原材料的选择组织苗家兔的选择（兔种、年龄、体重、健康状况等）乳兔的选择（日龄、体重、健康状况等）细胞苗细胞的选择（无污染外原病毒等）,猪瘟活疫苗质量控制要素,生产环境控制 组织苗动物饲养条

10、件控制接毒后动物反应观察与判断生产线功能间洁净级别要求 细胞苗细胞检测（BVDV等）健康细胞和接毒后细胞的观察与判断生产线功能间洁净级别要求半成品检测成品检测,四、疫苗生产质量控制,质量控制意义质量控制要求质量控制保证措施（兽药GMP管理）疫苗质量评价,1、质量控制意义,国家强制要求 禽流感事件，人血白蛋白事件企业自身要求 品牌、效益、责任 生物制品特殊性表现在在生产和使用过程中人和动物的安全性（污染、混毒、人畜共患）对环境的安全性群体性危害,2、质量控制要求,安全性：毒副作用、残留、环境、人类有效性：有效成分达到要求，疗效确切均一性：批间、最小单元间、贮存运输后等稳定性：贮存期稳定，有较长的

11、有效期方便性：给药的方式、途径经济性：在保证质量的前提下，改进生产工艺，提高效力，降低成本,3、保证措施兽药GMP管理,GMP是英文Good Manufacturing Practice for Drugs的缩写，直译为“优良产品的生产实践”。我国的兽药GMP是药品生产质量管理规范的简称。兽药GMP是在兽药生产过程中，用科学、规范化的条件和方法来保证生产优良兽药的整套科学体系。它实施的目标就是对兽药生产的全过程进行质量控制，以保证生产的兽药质量是合格优良的。,3、保证措施兽药GMP背景,GMP是从药品生产实践中取得经验教训的总结。人类社会经历了12次药物灾难，特别是20世纪出现的药物灾难“反应

12、停”事件后，公众要求制定严格监督法律；最早的GMP是由美国坦普尔大学6名教授编写制定；1963年美国颁布第一部GMP，美国FDA经过实施；1975年WHO正式公布GMP，开始向成员国推荐，并确定为WHO的法规之一，迄今为止有100多个国家实施了GMP；我国医用药品从1982年开始颁布GMP，农业部于己于1989年颁布并决定实施GMP，规定至2005年12月31日未取得GMP合格证的企业，不得进行药品生产。,3、保证措施控制要求,生产、管理人员,厂房、设施、设备,原料、包装材料,生产方法,检验、监控,售后服务,经检验合格的,经过验证的,可靠的,完善的,经验证合适的,训练有素的,GMP,基本控制要

13、求,影响质量的因素,完善的,管理文件,3、保证措施控制要求,在GMP管理要求中，3条主线贯穿全过程生产处处防污染：原材料或产品被微生物或外来物搀杂、玷污、混杂、失真、遗漏、任意等造成产品的质量问题，生产过程对环境和人员的安全性：事物件件有验证：能证明任何程序、生产过程、设备、物料、活动或系统能导致预期结果，有文件证明的行动。凡是须问个为什么？怎么样？好不好？行不行？-通过验证-放心使用工作一律守制度：有一项工作或活动就必须有一项制度；有制度就必须执行；有执行就必须有综合（分析、检查）；有综合就有提高（改进、修订）,3、保证措施管理软件,软件：是指企业对管理体系中采用的全部要素、要求和规定编制成

14、各种制度、标准和程序形成文件系统，在实施中及时正确地记录执行情况且保存完整的执行记录。从组织架构、工作标准到记录（凭证）等都进行了详细的制定，它是质量控制的重要保证。,3、保证措施过程控制方法,过程控制方法：监督加检查（检验）人员（培训、技能等）原辅材料（供应商评估、小样实验、检验）设备仪器定期验证和校验生产过程监督和检查（半成品检验）产品检验（企业内控标准）批记录核查、批签发售后服务（运输、保存、使用注意事项、客户访问、退回产品的处理、不良反应的处理等）,3、保证措施过程控制目标,控制管理目标把影响产品质量的人为差错，减少到最低程度防止一切对产品的污染、交叉污染和产品质量下降的情况发生建立完

15、善的质量保证体系，确保GMP的有效实施 产品质量优劣取决于企业的质量观是否保证GMP的有效实施,四、疫苗质量评价,生产过程评价检验结果评价安全性效力稳定性临床使用效果评价（国家标准与企业内控标准差异）自家苗？,五、疫苗研究发展方向,传统疫苗改进精制化（减少副反应）；规模化（改进工艺、提高产能、降低成本）；耐热化（有利于保存和运输）；多联多价化（减少动物应激）；高效化（改进疫苗质量，提高内控标准，增强疫苗免疫效果，如种毒的改造、佐剂的运用等）。,新型疫苗研发：以分子生物学技术为基础，研究新型疫苗是新世纪疫苗研究的主导方向。新病（包括变异）疫苗研发：企业与科研单位联合开发已成为趋势，一些企业成立的研发部门也在从事基础研究和临床应用研究，为生产出高质量的疫苗奠定了基础,谢谢！,