临床常用免疫学检验.ppt

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1、免疫学检验,1,临床常用免疫学检验1.免疫功能检验体液免疫 细胞免疫2.感染免疫学诊断试验病毒性肝炎；AIDS;STD;其它传染病；CRP3.自身免疫病的检验4.肿瘤标志物检验,免疫学检验,2,检验医学与临床医学,检验医学（laboratory medicine）是一门临床学科，它运用不断发展的自然科学和医学科学技术对患者血液、尿液和各种体液标本进行检验，并以发展检验技术、提高检验质量为重点，达到对患者疾病的诊断、病情观察和预后判断等目的。,免疫学检验,3,（一）现代检验诊断特点主要有：自动化和智能化。高质量控制。微量化标本、多参数分析。流水线检测和床边检测并存。基因检测前景可喜。,免疫学检验

2、,4,（二）现代检验诊断面临挑战虽然现代检验诊断的技术正在长足发展，但也面临许多挑战。表现在：1如何选择日益增多的检验诊断项目？2如何选择有多种方法的检验诊断项目？3如何判断检验诊断新项目的应用价值？4如何合理选择检验诊断项目，降低检验诊断的费用？,免疫学检验,5,二、循证检验医学新世纪检验诊断高质量发展的新天地,定义循证医学（evidence-basedmedicine，EBM）指：在对患者作出新的医疗决策的过程中，必须审慎、明确和明智地运用当前所能获得的最佳证据。这里，“最佳证据”指不仅可以否定迄今已被视为临床诊断或辅助诊断的“金标准”，并且其本身也可被未来的更准确、更有效新证据所取代。,

3、免疫学检验,6,目的主要是：不断弄清疾病的病因和发病危险因素的证据，为临床诊断和预防提供最为可靠的依据。提高疾病的早期诊断率，继而提高疾病的治愈率。改善患者的预后，提高患者的生存质量。提高临床医疗管理和决策水平。精选临床检查和治疗方案，降低医、患双方的医疗费用，使患者得到最合理的临床医疗服务。促进临床医学教学水平，培养业务精湛、医德高尚的临床医学人才。,免疫学检验,7,现行传统医学是以经验医学为主，而 EBM则要求选用最新的、经过临床研究机构科学评价过的、更为准确的新证据，而不采用尚未经过严格评价的、目前仍处于基础医学研究阶段的所谓“新证据”。,免疫学检验,8,概念：循证检验医学（eviden

4、ce-based laboratory medicine，EBLM）就是按照循证医学“以当前最佳证据为基础”的原则，用临床流行病学的方法学规范检验医学的研究、设计和文献评价，其任务是向临床医师提供反映患者真实情况的检验证据。,免疫学检验,9,循证医学同样也给检验医学带来了发展机遇。循证检验医学要求检验医师不仅向临床医师解释检验项目的意义，而且要帮助他们选择正确的检验项目，合理地利用实验室资源。这是因为有时候临床医师并不一定熟悉这些新的诊断指标，相反，过多的检查会提供一些不必要的信息和消耗不必要的费用，从而干扰诊断、治疗和医疗经济的合理分配。检验医师还必须使用综合分析方法对诊断指标进行评价。,免

5、疫学检验,10,一些专家认为，目前应用的实验室检查项目，在临床应用前并未给予充分的评价。Jaeshke等认为，判断一项诊断试验是否有用的最终标准是：试验是否增加了有用的诊断信息。Burke认为,如果一项试验主要用于筛检，其敏感性一定要高，但易出现假阳性。任何新的检验只有在充分评价其可靠性、准确性后才能用于临床实践。而现实是，由于制造商的热情提供试剂、临床医师和检验人员的欣然接受，许多新检验项目在未被评价充分之前，就已被积极的推向了临床应用。,免疫学检验,11,第一章 免疫功能检验(Immunological Function Test)免疫功能检验分为细胞免疫功能检验和体液免疫功能检验，对于了

6、解患者的免疫状态，以及细胞的各种功能，为深入研究和认识机体免疫系统的生理、病理改变，阐明某些疾病的发病机制和临床诊断与治疗将提供有利的信息。下面简单介绍临床常用的一些免疫检验项目。,免疫学检验,12,一.IgG、IgA、IgM测定 免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig)是一组具有抗体活性的蛋白。存在于 机体的血液、体液、外分泌液及某些细胞的膜上，分为 IgG、IgA、IgM、IgD、和IgE 五类。其中 IgG、IgA、IgM 含量较多，一般应用单向免疫扩散法、免疫比浊法和速率散射比浊法测定。,免疫学检验,13,参考值 依年龄、性别、地区等因素有差异。IgG：6.9416.18g/L

7、 IgA：0.68 3.78g/L IgM：0.60 2.63g/L临床意义 1.Ig 含量减低：一种或多种Ig 水平减少，分原发性和继发性。见于各种先天性或获得性免疫缺陷病。继发性常与免疫抑制剂应用、射线、蛋白质丢失、营养不良等有关。也可见于细胞毒药物治疗后。,免疫学检验,14,2.Ig含量增高：(1)多克隆性增高，见于各种慢性感染、慢性肝病、某些自身免疫病，如 SLE、RA、SS等；也见于寄生虫疾病、结节病等。(2)单克隆性增高，又称“M”蛋白，主要见于免疫增殖性疾病，如多发性骨髓瘤、重链病、轻链病，巨球蛋白血症等。,免疫学检验,15,注意事项 Ig水平与年龄、性别有一定的关系，Ig 含量

8、因检测方法不同而有差别，各地区参考值也不相同，在判断结果时应综合考虑。如有“M 蛋白”，可进一步作血清或尿液免疫电泳，检测轻链和重链。,免疫学检验,16,二.血清总IgE测定 IgE为血清中含量极少的一种免疫球蛋白，与过敏性疾病和寄生虫感染有关。目前检测方法有多种，包括 ELISA、间接血凝试验（indirect hemoagglutination assay IHA）、RIA、电化学发光法（electrochemiluminescence immunoassay，ECLIA，）、IFA 等。参考值 0.1-150IU/ml,免疫学检验,17,临床意义 1.IgE增高：见于IgE型多发性骨髓瘤

9、、特应性哮喘、特应性皮炎、过敏性鼻炎、寄生虫感染、热带嗜酸细胞增多症、SLE、RA及某些霉菌病等。2.IgE减低：一般无意义。可见于原发性无丙种球蛋白血症、恶性肿瘤及细胞毒药物治疗后。,免疫学检验,18,注意事项 年龄、性别均可影响总IgE水平。一般男性高于女性；新生儿水平低，青春期水平最高，30岁以后逐渐下降。不同种族血清总IgE水平也有差别，混血人种比白人高34倍，黑人水平更高，黄种人水平也较高。总IgE水平高不一定是过敏；过敏者总IgE也不一定高。因此，在评价总IgE结果时要考虑到以上因素。,免疫学检验,19,三.特异性IgE抗体（sIgE)的检测 过敏患者的血清中存在着具有变应原特异性

10、的IgE 称之为特异性IgE,如对牛奶过敏者则有针对牛奶变应原的IgE；对蒿草花粉过敏者，则有针对该花粉的IgE，该抗体只能与该变应原特异性结合。,免疫学检验,20,sIgE的测定在变态反应体外诊断中占有重要地位。在呼吸疾病中，过敏性哮喘，过敏性鼻炎，职业性哮喘等患者血清中均能检出 sIgE。sIgE检测方法有许多种，目前临床上常用的有ELISA，FEIA，免疫印迹等。随着sIgE测定技术的完善，此项测定已日趋商品化，开发了各种检测系统，如CAP过敏原检测系统，Master过敏原检测系统，Px过敏原检测系统等，这些测定系统包括了仪器、试剂、计算机软件处理系统。国内目前应用最多的是CAP检测系统

11、。,免疫学检验,21,1.CAP检测系统原理CAP，一个很小的塑料帽状物，其内置有多孔性、弹性和亲水性的纤维素粒，此粒多孔，吸咐了更多的变应原，加入血清，血清中的sIgE就会和变应原结合，再加入酶标抗人IgE，再加入荧光显色系统，在荧光分光光度计上测定荧光强度，计算机提供相应软件，自动计算出结果。报告sIgE含量。,免疫学检验,22,适应征（1）临床怀疑过敏性疾病，支气管哮喘等；（2）不适宜作皮内试验的患者；（3）脱敏治疗的病人观察疗效。（4）抗组胺等对症治疗药物影响皮肤反应者；（5）皮试可能发生危险者；,免疫学检验,23,（6）不能用于皮试的变应原，如毒素，非水溶性或高度致敏性物质；（7）食

12、物过敏，皮试结果不可靠者。（8）皮试结果可疑者。方法 RAST FEIA参考值CAP系统结果报告。一般报告sIgE含量。单位ku/L。正常人0.35ku/L，为阳性。sIgE的分级标准见表。,免疫学检验,24,表1.特异性IgE的分级标准_ RAST分级 sIgE含量(ku/L)sIgE水平 临床意义 O 100 特高（III）特别严重之 过敏 _例如：报告格式：sIgE（d1）81.3ku/L（级）其中 d1代表屋尘螨。每一过敏原均有代号，可查阅相关资料,免疫学检验,25,临床意义 sIgE测定是体外检测变应原的重要手段。其试验的灵敏度及特异性都很高、特别是对花粉、螨类、宠物皮屑、牛奶、鸡蛋

13、、坚果等变应原的sIgE测定，灵敏度和特异性都在90以上，有的甚至接近100。根据sIgE含量可确定患者 变应原 种类，可评价患者过敏状态，脱敏治疗的疗效，对哮喘的诊断和鉴别诊断有重要帮助。CAP吸咐变应原有单价，有多价，如多价霉菌，多价食物（Fx5E，含6种食物过敏原），多价羽毛等，多价变应原阳性后，再进一步确定单个变应原成分。,免疫学检验,26,注意事项（1）有明显的地域性，该法所使用的均系进口产品生产国的与我国的不一定完全符合。我国常见的 变应原，国外不一定有。因此，评价结果应注意区别。,免疫学检验,27,（2）某些小分子的变应原，sIgE测定的灵敏度不高，如青霉素降解物，对这些变应原，

14、如测不出sIgE并不除外过敏的可能性。,免疫学检验,28,（3）要结合临床症状，体格检查，常规化验，当地的实际条件，体内试验以及体外试验的结果综合考虑，才能得出比较正确的结论。,免疫学检验,29,2.吸入物变应原过筛试验（phadiotop）。原理 呼吸道变态反应病在临床上很常见，有些病很难从临床上区别是否过敏，如过敏性鼻炎和血管运动性鼻炎的临床表现相似，外源性哮喘和内源性哮喘也有共同之处；在临床工作中首先要区别是否属于过敏范畴。血清总IgE测定作为过敏性疾病的过筛试验曾得到广泛应用，但其特异性、敏感性均不高，总IgE高并不一定是过敏，过敏者的总IgE水平也不一定高。过敏与否取决于sIgE的存

15、在。,免疫学检验,30,phadiotop是根据变应原吸附原理，将空气中90以上的最为常见的变应原吸咐到CAP上。患者血清中只要有针对其中之一种变应原的sIgE，即可呈阳性反应。据此可测知患者是否为吸入物变应原过敏者。,免疫学检验,31,与sIgE测定不同的是所用CAP为特制的，内含多种吸入物变应原。结果报告不是含量，而是比值，即待测血清吸光度与参考血清吸光度之比。参考值 正常人为阴性，当待测血清吸光度大于参考血清吸光度时报告为阳性。根据比值，可将 phadiotop 阳性者分为四个等级。弱阳性1；阳性2；强阳性20；特强阳性40。,免疫学检验,32,临床意义 阳性结果可视为多种sIgE的总和

16、，比值越大，表明体内sIgE越多，这可能是某一种变应原的sIgE很高，也可能是多种变应原sIgE累加的结果。,免疫学检验,33,注意事项 phadiotop中未包括律草花粉及蚕丝，这两种在我国都是很重要的变应原，如患者只对律草花粉或蚕丝过敏，phadiotop则为阴性。但如果同时还合并有其它 变应原过敏，phadiotop仍为阳性。phadiotop阳性只说明患者对常见的空气中的 变应原过敏，但对何种变应原过敏，仍需进一步检查。phadiotop作为过筛实验，可筛出非过敏的患者，以免进行不必要的特异性变应原检查。由于phadiotop中包被的是国外的抗原，有时临床诊断与phadiotop结果有

17、不符的个别现象发生。,免疫学检验,34,四.血清补体测定 补体（Complement)是血清中的一组具有酶活性的蛋白。它由20多种蛋白组成。当机体受到病原微生物侵袭时，在抗体的存在下，补体参与灭活 virus 或杀死 bacteria 的免疫反应。在自身免疫病中，complement 也能参与破坏自身组织或细胞而造成免疫病理损伤。测定血清中补体活性或其单一补体成分含量，对于许多疾病的诊断和鉴别诊断、疗效观察以及发病机理的研究都有一定的临床意义。,免疫学检验,35,(一)总补体活性测定（50%hemolytic unit of complement，CH50)Complement 可使溶血素(抗

18、体)致敏的 SRBC 裂解而发生溶血，补体活性与溶血程度呈正相关。根据产生50%溶血所需要的最小补体量，可计算出血清总补体的活性。,免疫学检验,36,参考值 75160 U/ml临床意义.增高：常见于各种急性炎症、组织损伤、心肌梗死和某些恶性肿瘤等。.降低：见于各种免疫复合物性疾病，如SLE、急、慢性肾小球肾炎、自身免疫性溶血性贫血。也可见于病毒性肝炎、DIC、蛋白丢失性肠病、严重灼伤、急性粒细胞性白血病等。,免疫学检验,37,注意事项 待测血清需新鲜、无溶血。测定方法有试管法、微量板法，近来又有生化仪器法等。不同方法具有不同的参考值。,免疫学检验,38,(二)补体C3测定（Complemen

19、t 3，C3)C3为补体系统各组分中含量最高的组分，是激活补体传统途径与旁路途径的关键成分。检测方法主要有RID、免疫比浊、速率散射比浊等。g/L,免疫学检验,39,临床意义 1.C3增高：见于某些急性炎症或传染病早期以及某些恶性肿瘤等。2.C3降低：见于SLE、RA、急性肾小球肾炎、肝脏疾病、冷球蛋白血症等。狼疮肾炎时血清中C3含量降低，当病情好转时，含量恢复正常。,免疫学检验,40,(三),补体C4测定（Complement 4，C4)C4是一种多功能的1-球蛋白，也是补体系统中的主要成分。在补体传统活化途径中发挥重要作用。裂解后的产物在补体的活化、促进吞噬、防止免疫复合物沉着和中和毒素等

20、方面发挥很大作用。检测方法同C3测定。,免疫学检验,41,参考值 0.160.47g/L临床意义 1.升高：见于风湿热的急性期、结节性动脉周围炎、皮肌炎、心肌梗死、Reiter综合征和各种类型的关节炎。2.降低：见于自身免疫病，例如：SLE、RA、慢性活动性肝炎、多发性硬化症、IgA型肾病等。在SLE，C4含量下降明显，并较C3下降为早。,免疫学检验,42,五.循环免疫复合物（Circulating immunocomplex，CIC,)CIC是体内游离抗原与抗体相结合的产物。复合物可分大、中、小三类。大的复合物(19s)可被吞噬细胞吞噬去除；中等复合物(约等于19s)存在于局部病变部位，如肾

21、基膜、皮肤基底膜、血管内膜和关节滑膜等；只有小的复合物(19s)游离于血液、体液中，为一种可溶的CIC。CIC测定对免疫复合物病、自身免疫病以及肝病的诊断、疗效观察、预后判断均有重要意义。,免疫学检验,43,检测方法有多种，如聚乙二醇沉淀法、C1q结合法等。PEG可引起蛋白沉淀，蛋白分子愈大沉淀所需 PEG 浓度愈小。CIC分子量较大，且抗原-抗体结合后发生构型改变，而被低浓度PEG从液相中析出，PEG还抑制CIC解离，促使CIC聚合成更大的凝聚物而被沉淀，用分光光度计在波长450nm处测定吸光度。计算出浊度值，可知CIC的存在和含量。,免疫学检验,44,参考值 PEG沉淀法：10U/ml临床

22、意义 1.CIC阳性常见于自身免疫病如SLE、RA等，也可见于血清病、慢性活动性肝炎、细菌感染、传染病、恶性肿瘤等。2.动态检测CIC的变化，可监测疾病的发展、判断疗效及预后。,免疫学检验,45,注意事项 参考值依方法不同而有差别，此法快速简便，但特异性较差，只适于筛查。低密度脂蛋白可引起浊度增加，故应空腹取血。高球蛋白血症及标本反复冻融易造成假阳性。,免疫学检验,46,六.T淋巴细胞亚群（T cell subpopulation)测定 T cell 因功能不同可将其分为若干亚群，如T辅助/诱导细胞；T抑制/细胞毒性细胞等。也可根据T细胞表面分化抗原(CD)不同划分为相应的亚群，如CD3；CD

23、4；CD8等。同一CD表型的细胞功能可能不同。如CD8细胞中既有T抑制细胞，也有细胞毒性T淋巴细胞。T细胞各亚群的相互协调，稳定地调节着机体的免疫应答反应。,免疫学检验,47,应用抗CD抗原的单克隆抗体，如抗CD3、抗CD4、抗CD8等，对外周血单个核细胞进行检测，依据各单抗的阳性率，判定各T cell 亚群，并算出CD4/CD8的比值。测定方法有 IFA、IEA、APAAP法、流式细胞仪法等。,免疫学检验,48,参考值（IFA法）总T细胞（CD3+）53-88%；CD4+细胞32-60%；CD8+细胞20-40%。CD4+/CD8+1.5-2.0。（流式细胞仪法）总T细胞（CD3+）955-

24、2860/l；CD4+细胞27-51%，550-1440l；CD8+细胞15-44%，320-1250l。CD4+/CD8+0.64-2.85。,免疫学检验,49,临床意义 T cell 亚群在许多临床疾病中可发生异常改变，特别是免疫功能受损病人。测定T cell亚群变化对了解疾病的发病机制、指导临床治疗、控制疾病的发生发展均有重要意义。,1.在自身免疫病中，如SLE、RA、自身免疫性溶血性贫血，以及乙型肝炎病人常表现为CD8细胞的数量及功能低下，有时也有CD4细胞增高，CD4+/CD8+比值升高。,免疫学检验,51,2.免疫缺陷病患者CD4+/CD8+比值减少，如AIDS病人，CD4+显著减

25、少，常出现CD4+/CD8+比值倒置。常作为HIV感染者的监测指标。,3.感染性疾病患者免疫抑制功能增强，表现为CD8+细胞的数量及功能都异常增高。病毒感染时，CD3+、CD4+细胞减少，CD8+细胞增多，CD4+/CD8+比值降低。,免疫学检验,53,4.肿瘤病人CD3+，CD4+细胞明显减少，CD8+明显增加，CD4+/CD8+比值明显下降。据此，可了解机体的免疫状态，指导免疫调节剂及治疗药物的应用。,5.支气管哮喘病人，在过敏原激发后，外周血CD4+T 细胞迅速降低，支气管肺泡灌洗液中CD3+、CD4+、CD8+T 细胞则增高。过敏性鼻炎患者CD3+、CD4+、CD8+T 细胞均比正常人

26、低。,6.血液系统疾病 T cell 亚群也有相应变化，如再生障碍性贫血、粒细胞减少症时CD4+细胞减少，CD8+细胞增多，CD3+/CD8+比值下降。,免疫学检验,56,注意事项 T cell 亚群检测方法很多，参考值也不尽相同，在判断结果时要全面考虑，结合临床及其他检查。此外，利用上法也可测定B细胞、NK细胞等。流式细胞仪法，B细胞绝对值为 90-560/l，百分数为 5-18%，NK细胞绝对数为 150-1100/l，百分数为 7-40%。华人较其他种族有较高的NK细胞值。,免疫学检验,57,七.细胞因子（Cytokine，CK)及其受体（receptor)测定 CK是由多种细胞产生的免

27、疫功能调节因子，其中主要包括：淋巴因子（Lymphokine，LK)，单核因子（Monokine，MK)以及其他由非淋巴细胞及非单核细胞产生的CK。白细胞介素（Interleukin，IL)是体内一大类细胞因子。,CK在调节机体的免疫功能方面发挥着重大作用。新的CK不断被发现。各种CK需与各自的 receptor 特异结合才能起作用。CK受体存在于被作用的细胞膜上或细胞质内，目前所知不是太多。迄今所发现的CK近百种，其中多数仍处于研究和探索阶段。,免疫学检验,59,检测CK及其 receptor 的产生和免疫细胞对其反应能力，可以了解淋巴细胞及其他细胞的免疫功能。目前临床上用于测定CK及其受体

28、的方法有生物活性测定法、RIA法和ELISA等，并且已有试剂盒供应。如IL2、IL4、IL6、IL8、TNF、干扰素、粒细胞集落刺激因子(GCSF)、促红细胞生成素(EPO)等等。,近来，DNA分析法已经用于CK的研究，应用分子杂交法检测CK的基因；应用PCR技术测定CK的mRNA表达等。目前，利用PCR技术已建立了定量测定TGF、IL2、IL1、TNF等CK的方法。,免疫学检验,61,（四）寄生虫病的检测1、猪囊虫抗体测定 Cysticercosis（囊虫病）又称Cysticercosis Celluosae（猪囊尾蚴病）,是人和猪共患的一种寄生虫病。又分为肌肉型、中枢神经型等。主要检测方法

29、有ELISA、IHA（间接血凝试验）等。用以检测病人体内特异性IgG抗体。对临床诊断及血清流行病学调查均有实用价值。,免疫学检验,62,参考值一般阴性 ELISA：P/N 2.1临床意义 囊虫IgG抗体阳性，多见于脑囊虫病。可作 血清 和脑脊液囊虫抗体检查。应结合临床表现和CT、核磁检查结合作出判断。,免疫学检验,63,2、血吸虫抗体测定 日本血吸虫病早期宿主对血吸虫可发生特异性免疫反应。血清 中产生IgM,IgG,IgE抗体。IgM,IgE抗体阳性可作为日本血吸虫病的早期诊断指标。IgG抗体阳性表明病人处在恢复期。抗体检测有助于临床诊断和流行病学研究，主要方法有ELISA、乳胶凝集试验、环卵

30、沉淀试验等。参考值阴性 ELISA：P/N 2.1临床意义（1）血清 中IgM抗体阳性提示疾病处于早期。（2）血清 中IgG抗体阳性表示疾病处于恢复期，P/N值的大小表示抗体效价的高低，部分患者感染后IgG抗体可持续数年。,免疫学检验,64,注意事项 血吸虫抗体的将测可以达到诊断病人的目的，但不能区分血吸虫现症病人和过去感染者，早期慢性和晚期血吸虫病患者，未治愈的血吸虫病人及新感染和既往感染的混合病人。此外用于考核疗效尚不够理想。目前，不少学者应用单克隆抗体ELISA检测循环抗原用于诊断和考核疗效。但仍存在不少问题，仍需改进。,免疫学检验,65,3、肝吸虫抗体测定 肝吸虫病又称华支睾吸虫病，是

31、由华支睾吸虫寄生于人体肝胆管内所引起的寄生虫病。主要依靠临床流行病学、病原学检查、免疫学检查结合临床表现作出诊断。因病原学检查受到排卵量和排卵规律的影响，以及受所用方法敏感性的限制，很难查到虫卵。因此应用免疫学诊断具有重要意义。宿主感染华支睾吸虫后，在抗原刺激下，诱发产生特异性抗体，主要是IgM,IgA,IgE和IgG。一般抗体检出时间均明显早于粪便中虫卵出现的时间。检测肝吸虫抗体方法主要有皮内试验、ELISA、IFA等。,免疫学检验,66,参考值阴性 ELISA：P/N 2.1临床意义 目前所查多为IgG抗体，P/N 2.1为阳性。数值越大，表明患者体内抗体效价越高，表明患者为华支睾吸虫感染

32、。如能测到IgM抗体，对于早期诊断有很大帮助。如有可能，可检测循环抗原以考核疗效和早期诊断。,免疫学检验,67,4、肺吸虫抗体测定 肺吸虫病又称并殖吸虫病，是由并殖吸虫引起的自身免疫源性疾病。临床表现多种多样，可分肺型和肺外型。诊断主要结合流行病学。临床症状及实验室检查。其中免疫学检查对临床诊断有很重要意义。人感染肺吸虫后，可出现抗肺吸虫抗体，以IgG型为主。血清 中IgE水平也可升高。IgM、IgE型抗体检方法主要有ELISA、IFA、皮内试验等。参考值阴性 ELISA：P/N 2.1,免疫学检验,68,临床意义 抗体阳性表明患者为肺吸虫感染者，结合其他检查和临床表现可作出诊断。在判断结果时

33、应该注意。其它寄生虫病，如血吸虫病、囊虫病与此有轻度的交叉反应。此外还可应用双抗体夹心ELISA法检测循环抗原用于诊断和流行病学调查。目前应用尚不广泛。,免疫学检验,69,第三章 自身免疫病和风湿病的免疫学检验,免疫学检验,70,自身免疫病（AID)是指由于过度而持久的自身免疫反应导致组织器官损伤并引起相应器官病变或临床症状的一类疾病。风湿病是一类涉及到关节、软骨、肌肉等结缔组织的慢性疾病。,实验室检查特别是免疫学检查对AID和风湿病的诊断是及其重要的。有些检查可作为诊断指标之一；有些检查可作为病情进展和预后判断的监测指标；有些检查可作为药物疗效的考核指标之一。,免疫学检验,72,随着免疫学技

34、术的发展以及分子生物学的应用，各种自身抗体的检查越来越多地应用于临床。作为临床医生，应该熟悉这些检验的意义，并能结合临床及其他检查，客观地运用这些指标，协助诊断，了解病情，指导治疗。这里仅介绍临床常用的一些自身抗体的检测。,免疫学检验,73,1.抗核抗体测定（Antinuclear antibody,ANA)ANA是抗细胞核多种成分的自身抗体，无种属及器官特异性。ANA可分为抗DNA抗体、抗组蛋白抗体、抗非组蛋白抗体、抗核仁抗体及其他细胞成分抗体。这些抗体共同组成ANA谱。,免疫学检验,74,抗核抗体（ANA）的检查最常用于筛查全身性风湿病和自身免疫病。ANA的检查可观察到能与细胞核内的核酸和

35、蛋白抗原起反应的自身抗体。细胞内可能存在对多种抗原起反应的抗体。只有某种抗体的效价很高时，IFA才能加以鉴别。,免疫学检验,75,homogenous（均质型）又称弥散型，相应的抗原是双链DNA和组蛋白复合物。常见于SLE，特别是肾脏受累病人。也可见于其它结缔组织病，如：风湿性关节炎，MCTD，干燥综合征，硬皮病，慢性活动性肝炎及原发性胆汁性肝硬变。Peripheral(周边型)相应的抗原为双链DNA，多见于活动性SLE病人。,免疫学检验,76,Speckle(斑点型)主要是针对ENA的抗体，包括Sm，RNP，SSA，SSB，Scl-70。一般认为低效价的斑点型ANA不是结缔组织病特有的，实际

36、上不代表临床异常。高效价的抗Sm抗体多与SLE有关。高效价的抗RNP自身抗体见于MCTD，但也见于SLE。抗SSA和抗SSB抗体，见于S.S，也可见于SLE。当病人有抗SSA抗体时，通常以皮肤表现和光过敏为主。，也存在于ANA阴性狼疮和新生儿狼疮。Scl-70抗体与硬皮病有关。,免疫学检验,77,Nucleoli(核仁型)其靶抗原是与RNA分子相关的核蛋白。多见于硬皮病。Centromere(着丝点型)抗着丝点抗体（ACA），多见于全身性硬皮病的CREST综合征。,常用检测方法为IFA、ELISA、免疫印迹法、RIA、免疫斑点法、胶体金标斑点免疫渗滤法等。其中IFA是应用较广的一种方法。一般采

37、用鼠肝切片或Hep-2细胞为底物抗原片，当加入病人血清时，病人血清中的ANA可与细胞中相应抗原成分结合。再加入荧光标记抗人IgG，在荧光显微镜下可见细胞核内亮绿色荧光。,免疫学检验,79,参考值 1:10或阴性临床意义 NA阳性见于多种疾病，常用于风湿病及自身免疫病的诊断。SLE患者阳性率在95以上，且效价常在1：80以上。在其他风湿病如RA、系统性硬化症、皮肌炎、干燥综合征(SS)、混合结缔组织病(MCTD)等也可阳性。其他如肝病，病毒感染等也可呈低效价阳性。,注意事项 在大约1%的正常人的体内可测到低效价的非特异性抗核抗体，80岁以上老人的检出率可高达50%。高效价的ANA一般与活动期SL

38、E密切相关。采用Hep-2细胞检测ANA，可见到不同的染色模型。此外，口服避孕药的妇女也可检测到ANA。,免疫学检验,81,免疫学检验,82,免疫学检验,83,免疫学检验,84,免疫学检验,85,二.可提取性核抗原（Extractable nuclear antigen ENA)抗体 ENA是细胞内许多小分子的RNA和多肽组成的非组蛋白的酸性核蛋白颗粒。分布在细胞质中的称为小细胞浆核糖核蛋白(scRNPs)；分布在细胞核内的称为小细胞核核糖核蛋白(snRNPs)。目前已发现的有20余种，其中常用的抗ENA抗体有如下几种。,免疫学检验,86,（一）抗Sm抗体 Sm是病人Smith的缩写。Sm抗原

39、属于SnRNP，由5个RNA和多肽组成，抗原表位在29KD、28KD和13.5KD多肽上，抗Sm抗体是酸性糖蛋白，是SLE的标记抗体。,免疫学检验,87,(二)抗nRNP(u1RNP)抗体 u1RNP是u1RNA和蛋白质组成的，抗原表位在73KD、32KD和17.5KD多肽上，是MLTD的重要血清标志。,免疫学检验,88,（三）抗SSA抗体 SS为干燥综合征的缩写。此抗体又称抗RO抗体。SSA抗原是RNA和蛋白质复合物，抗原表位在52KD多肽上，主要见于原发性干燥综合征患者及SLE。,免疫学检验,89,（四）抗SSB抗体 SSB抗体常伴随SSA抗体同时出现，又称抗La抗体，SSB抗原属于SnR

40、NP，是含有RNA和50KD蛋白质的复合物。抗原表位在45KD、47KD和48KD多肽上。与SSA抗体并存对诊断SS有特异性。,免疫学检验,90,（五）抗Scl-70抗体 Scl-70抗原表位在86KD、70KD的片段上，是DNA拓扑异构酶I的降解产物，抗Scl-70抗体几乎仅见于硬皮病，阳性率30%左右。,免疫学检验,91,（六）抗Jo-1抗体 Jo-1抗体是组氨酰tRNA合成酶，抗原表位在55KD多肽，抗Jo-1抗体是多发性肌炎和皮肌炎的标记抗体，阳性率25-40%。,免疫学检验,92,（七）抗核糖体抗体 核糖体在核仁合成，然后转入胞浆，抗原表位在大亚基上的38KD、16KD和15KD多肽

41、上。抗核糖体抗体阳性主要见于SLE，阳性率20-30%。,免疫学检验,93,检测以上抗体的方法主要有：对流免疫电泳法(CIE)、双相免疫扩散法，免疫印迹试验(IBT)，免疫斑点技术和ELISA法等。一般采用兔胸腺或牛胸腺提取物或细胞提取物作为抗原。近年来，应用分子重组抗原制备的试剂盒已投入市场。,免疫学检验,94,参考值阴性临床意义 1.抗n RNP抗体：见于3540的SLE病人，在MCTD病人中阳性率可达95100，也可见于其他风湿性疾病。2.抗Sm抗体：主要见于SLE及重叠综合征，急性期病人75为阳性。一般SLE患者3040阳性率。但Sm抗体阳性者90以上为SLE，故称之为SLE的标记抗体

42、。,免疫学检验,95,3.抗SSA和抗SSB抗体：见于4045的SS病人。抗SSA抗体也可见于25的SLE病人及其他风湿性疾病；抗SSA抗体与新生儿狼疮和先天性传导阻滞有关。抗SSA抗体也可见于病毒感染等非风湿性疾病。抗SSB抗体对原发性干燥综合征较特异，但阳性率仅27左右。,免疫学检验,96,4.抗Scl-70抗体：一般仅见于系统性硬化症病人，阳性率2060。5.抗Jol-1抗体见于30的多发性肌炎病人及10的皮肌炎病人。抗Jol-1抗体与多发性肌炎病人间质性肺炎的发生率增加有关。6.抗rRNP 抗体：主要见于SLE患者，阳性率20%左右，与中枢神经系统病变有关，多在疾病活动期出现。,免疫学

43、检验,97,注意事项 判断试验结果时要结合临床表现作出评价，也应根据试验方法来作出解释。对流免疫电泳法和双相扩散法敏感性低，但特异性较高；免疫印迹法、斑点免疫法及ELISA方法敏感性提高，但特异性相对减少。,免疫学检验,98,三.抗双链DNA抗体（Antidouble-stranded DNA，A-dsDNA，)A-dsDNA 对SLE有高度特异性，是针对细胞核脱氧核糖核酸的自身抗体。临床上常用的检测方法有：Farrs法：125IDNA与待检标本中的A-dsDNA形成免疫复合物，加饱和硫酸铵使复合物沉淀，以计数器分别测定上清中游离及沉淀物中已结合的125IDNA含量，可计算出 血清中AdsDN

44、A的结合活性。,ELISA法：将小牛胸腺DNA包被在微孔板中，加入病人血清，如有A-dsDNA则结合到微孔板上，加入酶标抗人IgG，加入底物显色后经酶标仪比色可知血清中A-dsDNA抗体的量。,免疫学检验,100,免疫荧光法：采用马疫锥虫或短膜虫作为基质，加入病人血清。血清中的A-dsDNA与膜上的天然DNA结合，加入荧光标记抗人IgG。马疫锥虫和短膜虫的动基体会发出绿色荧光。金标斑点法：双链DNA包被于硝酸纤维膜上，加入病人血清，加入金标记抗人IgG，如有A-dsDNA存在，会显示红色斑点。,免疫学检验,101,参考值依方法不同参考值也有不同。Farrs法：0.20 免疫荧光法：1:10 E

45、LISA法：依试剂盒而定，一般70u 金标法：阴性,免疫学检验,102,临床意义 A-dsDNA 阳性对 SLE 有较高的特异性。大约60的活动性 SLE 病人会出现 A-dsDNA。其他风湿性疾病也会出现，但阳性率非常低，如RA、S.S。注意事项 假阳性结果非常少见，但阴性亦不能排除SLE的诊断。,免疫学检验,103,四.抗中性粒细胞胞浆抗体（Antineutrophil cytoplasmic antibody,ANCA)测定 ANCA是针对中性粒细胞胞浆多种成分的 自身抗体，主要有髓过氧化物酶(MPO)和蛋白酶3（Proteinase 3，PR3)的抗体。主要用于诊断Wegener 肉芽

46、肿和系统性血管炎，特别是伴有肾病、呼吸疾病或其他类型血管炎引起多器官损害的患者。检测方法有IFA、ELISA、IBT等。,免疫学检验,104,参考值 阴性。临床意义 免疫荧光法检查ANCA阳性一般分为两种荧光类型，一种是胞浆型，称为cANCA，一种是核周型，称为pANCA。cANCA产生弥漫性细胞浆染色，是针对PR3的抗体，一般见于wegener肉芽肿病(WG)，特别是肾和肺受累的病人。pANCA产生核周染色，是针对MPO的抗体，主要见于系统性血管炎病人。,在WG病人中，cANCA阳性率在活动期可达80，且有较高的抗体效价。在缓解期抗体阳性率低，且效价下降，或完全消失。,免疫学检验,106,注

47、意事项 ANCA 阳性也可见于 Good-Pastares 综合征和SLE病人。WG的诊断不能单纯依赖ANCA的结果，还要结合其他临床表现，试验室检查和组织病理学检查才能确定。ANCA效价不能完全反应疾病的活动以及对治疗的反应。,pANCA 阳性不是特异性的抗MPO抗体，也可以是抗粒细胞胞浆中其他酶的抗体，如弹性蛋白酶，组织蛋白酶G等。ANCA检测应注意排除其他自身抗体的交叉反应，如ANA。因其可产生假阳性应注意鉴别，并进行ANA检测。,免疫学检验,108,五.抗线粒体抗体（Antimitochondrial antibody,AMA)AMA是以细胞浆中的线粒体为抗原的一种自身抗体，无器官和种

48、属特异性。一般采用大鼠肾及胃作为抗原基质，采用IFA检测，阳性可见大鼠肾和胃的细胞浆呈现细颗粒状荧光。,采用免疫印迹法可将与线粒体抗原的反应分为从M1到M9九种类型，高效价的M2和M9型自身抗原与原发性胆汁性肝硬变相关。目前已有检测M2的ELISA试剂盒供应。,免疫学检验,110,参考值 阴性 1：10 为阳性临床意义 AMA是原发性胆汁性肝硬化的标记 抗体，阳性率达90%，并且50%患者 抗体效价达1：1280或更高。此外，也可见于慢性活动性肝炎、隐匿性肝硬化。肝外阻塞性黄疸患者AMA常阴性，因此可作为鉴别诊断的一个指标。正常人中阳性率10%，且效价较低。,免疫学检验,111,六.抗平滑肌抗

49、体（Antismooth muscle antibody，ASMA)ASMA是抗肝细胞膜上一种肌动球蛋白的自身抗体。这种肌动球蛋白与平滑肌有交叉抗原性，因此与平滑肌有反应。一般采用IFA法，以大鼠胃作为抗原基质，阳性可见胃壁平滑肌呈现亮绿色荧光。,免疫学检验,112,参考值 阴性，1：10为阳性临床意义 主要见于明显活动期的自身免疫性肝炎患者，阳性率在80%以上，效价 在1：80以上。急性病毒性肝炎早期ASMA也可阳性，且早于 HBsAg出现。其他疾病如传染性单核细胞增多症、SS、RA、支原体肺炎、肿瘤和病毒感染者也有不同程度的阳性率。正常人中仅有2%阳性。,免疫学检验,113,七.抗甲状腺球

50、蛋白抗体（ATGA)和抗甲状腺微粒体抗体(ATMA)ATGA 是由甲状腺炎引起的自身抗体，抗原是一种糖蛋白。ATGA有器官特异性而无种属特异性。ATMA 的抗原是甲状腺滤泡上皮细胞胞浆内的脂蛋白。常用检测方法有：IFA、IHA、RIA、ELISA等。,免疫学检验,114,免疫学检验,115,参考值 IHA：血清效价 1：32，1：32为阳性，ATGA 和ATMA ELISA：正常为阴性，P/N 2.1 为阳性,ATGA 和 ATMA RIA：ATGA 30%；ATMA 15%,免疫学检验,116,临床意义 主要见于桥本甲状腺炎、甲亢、甲低患者，也可见于甲状腺瘤、恶性贫血、重症肌无力、Ediso