长期毒性作用及其试验方法.ppt

《长期毒性作用及其试验方法.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《长期毒性作用及其试验方法.ppt（99页珍藏版）》请在三一办公上搜索。

1、2023/8/29,任立群,1,第十四章长期毒性作用及其试验方法,long-term toxicity impact and test method,2023/8/29,任立群,2,第一节 基本概念和目的 第二节 试验设计原则及方法,2023/8/29,任立群,3,第一节,基 本 概 念 和 目 的,2023/8/29,任立群,4,长期毒性作用是指药物以一定的等级剂量连续多日给予受试动物所产生的有害作用。为观察这种有害作用而设计的毒理学试验称之为长期毒性试验。,一、定义,急性毒性试验 是为观察和评价急性毒性的有害作用或中毒反应而设计的一种毒理学试验。研究药物一次或24小时内多次给予受试药物后，

2、一定时间内所产生的毒性反应。,2023/8/29,任立群,5,长期毒性试验与急性毒性试验的根本差别,2023/8/29,任立群,6,根据给药期限的长短，可分为：,亚慢性毒性试验给药期限不超过90天 或不超过试验动物平均寿命的10%；慢性毒性试验给药期限超过90天 或超过试验动物平均寿命的10%；终生毒性试验数代毒性试验,2023/8/29,任立群,7,给 药 的 期 限 不 同,给 药 的 剂 量 范 围 不 同,长期毒性试验与急性毒性试验的根本差别,2023/8/29,任立群,8,蓄积作用(accumulation action)当较长时间连续、反复给药时，或者说给药的时间间隔和剂量超过机体

3、消除药物的能力，就会出现药物进入机体的速度(或总量)超过排除的速度(或总量)的现象，此时药物就有可能在体内逐渐增加并贮存起来，即蓄积作用。,2023/8/29,任立群,9,蓄积作用的表现形式,作用量积蓄功能性蓄积,2023/8/29,任立群,10,给 药 的 期 限 不 同,给 药 的 剂 量 范 围 不 同,观 察 的 毒 效 应 不 同,长期毒性试验与急性毒性试验的根本差别,2023/8/29,任立群,11,急性毒性试验是以死亡为观察终点的质反应过程,长期毒性试验重点观察体重、血液生化等量反应指标（量变质变）,2023/8/29,任立群,12,二、目的与意义,2023/8/29,任立群,1

4、3,长期毒性试验的目的,2023/8/29,任立群,14,第二节,试 验 设 计 原 则 及 方 法,2023/8/29,任立群,15,一、一般原则和要求,基本原则,全面、严谨、合理,整体性,随机、对照、重复,2023/8/29,任立群,16,一、一般原则和要求,基本原则,整体性,长期毒性试验不能与药效学、药代动力性和其他毒理学研究割裂，试验设计应充分考虑其他药理毒理研究的试验设计和研究结果。长期毒性试验的结果应该力求与其他药理毒理试验结果互为印证、说明和补充。,2023/8/29,任立群,17,一、一般原则和要求,选用两种实验动物,三个剂量,给药途径应与临床拟用途径相同,基本要求,2023/

5、8/29,任立群,18,一、一般原则和要求,至少在两种动物体上进行，兼顾雌雄性别。,选用两种实验动物,基本要求,2023/8/29,任立群,19,一、一般原则和要求,三个剂量,剂量至少分为高、中、低三个档次。,高剂量组应能充分反映药物的毒性，低剂量组不出现毒性反应。,同时设一溶剂(或赋形剂)对照组或已知药物毒性对照组。,基本要求,2023/8/29,任立群,20,一、一般原则和要求,给药途径应与临床拟用途径相同,口服给药大鼠一般常用灌胃，灌胃的容量为每天12ml/100g，也可将受试药物混在饲料或水中给予，但要保证每只动物按规定剂量在一定时间内服入。静脉注射大鼠时可采用腹腔或皮下代替，各剂量组

6、采用等容量不等浓度给药。特殊情况另作说明。,基本要求,2023/8/29,任立群,21,理想动物的标准：,对受试物的生物转化与人体相近；对受试物敏感；已有大量历史对照数据。,二、实验动物,2023/8/29,任立群,22,我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物,一种为啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。,1.种类及品系,二、实验动物,2023/8/29,任立群,23,我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物,一种为啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。,1.种类及品系,二、实验动物,Wistar大鼠SD大鼠,2023/8/29,任立群,24,我国药政部门规定的基本原则是选用

7、两种动物,一种为啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。,1.种类及品系,二、实验动物,一类新药：Beagle犬 二类新药：杂种狗,2023/8/29,任立群,25,我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物,一种为啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。,1.种类及品系,二、实验动物,在吸入给药时，猴是首先推荐的动物，因为它在呼吸系统的解剖学和生理学方面比其它动物更接近人类。,如研究计划生育用药，应选择猴或其他大动物。,2023/8/29,任立群,28,Beagle犬：原产英国，纯种小猎兔犬 Beagle犬的特点：体型小,毛短,性情温和,亲人,抗病力强 缺点：价格昂贵,2023/8

8、/29,任立群,29,2.起始月(周)龄,一般选择较年轻的或正处于生长发育阶段的动物。,二、实验动物,2023/8/29,任立群,30,2.起始月(周)龄,二、实验动物,原因：,一般选择较年轻的或正处于生长发育阶段的动物。,2023/8/29,任立群,31,啮齿类动物最好在断奶后不久即开始给药 大鼠起始周龄要求在 49周龄；犬的起始月龄为49月龄，一般不超过 12 月 龄；如选用杂种狗，起始年龄可稍大些。,二、实验动物,2.起始月(周)龄,2023/8/29,任立群,32,起始体重应在体重均值 20%的范围内。,二、实验动物,2.起始月(周)龄,2023/8/29,任立群,33,3.性别及数量

9、,（1）性别,二、实验动物,一般来讲是兼用两种性别的动物，每个剂量组中 雌雄性别的动物数必须一致。,2023/8/29,任立群,34,在特殊情况下如药物对雄性（或雌性）生殖细胞的毒效应已确知，或者急性试验已证明药物对雌雄两性动物的毒性有明显差别时，就应主要选用敏感性别的动物进行试验。,二、实验动物,3.性别及数量,（1）性别,2023/8/29,任立群,35,超过 90 天的试验 啮齿类动物每组至少 40 只（雌雄各 20 只）；非啮齿类每组 810 只（雌雄各 45 只）。,90 天以内的试验 啮齿类动物每组至少20只（雌雄各 10 只）；非啮齿类每组 6 只（雌雄各 3只）；,二、实验动物

10、,3.性别及数量,（2）数量,2023/8/29,任立群,36,超过 90 天的试验 啮齿类动物每组至少 40 只（雌雄各 20 只）；非啮齿类每组 810 只（雌雄各 45 只）。,90 天以内的试验 啮齿类动物每组至少20只（雌雄各 10 只）；非啮齿类每组 6 只（雌雄各 3只）；,二、实验动物,3.性别及数量,（2）数量,指导原则：一般大鼠为雌、雄各30只，Beagle犬或猴各36只。,2023/8/29,任立群,37,恢复期观察的动物数；给药期的长短，过长，试验过程中的自然死亡动物数。,注意,2023/8/29,任立群,38,4.饲养管理,严格控制环境条件，避免不必要的干扰因素是非常

11、重要的。,二、实验动物,2023/8/29,任立群,39,酮症酸中毒,室内温度,饲料或饲料配方,湿 度,光 照,通风条件,饮水质量,4.饲养管理,二、实验动物,2023/8/29,任立群,40,4.饲养管理,二、实验动物,适宜温度为 1826。相对湿度为 40%70%。光照宜持续 12 h明亮，12 h黑暗。通风条件良好。所用饲料应符合动物的营养标准。,2023/8/29,任立群,41,4.饲养管理,二、实验动物,啮齿类动物,雌雄动物应分开饲养，每笼不宜超过5只,2023/8/29,任立群,42,酮症酸中毒,4.饲养管理,二、实验动物,犬,单笼饲养，定量喂食。Beagle 犬实验前至少驯养 1

12、2 周;杂种狗应先检疫，驱虫。,2023/8/29,任立群,43,试验前观察记录动物的行为活动、饮食、体重、精神状况、心电图，检测心、肝、肾功能2次；选择正常、健康、雌性无孕的动物作为受试动物。,2023/8/29,任立群,44,雪貂作为实验动物的资料介绍，还在本世纪，虽然它还未被广泛应用，但它对人类健康的贡献无疑是很重要的（北美常用）。,2023/8/29,任立群,45,雪貂是食肉类动物，属于鼬科。经驯化供实验的雪貂毛色呈野生色或白化的。它缺乏盲肠、汗腺，雄貂缺乏前列腺。通常雪貂的实验和繁殖期为5至6年，而整个寿命约14年。雄貂体重可为雌貂的两倍。雪貂在早期用于传播病毒性疾病的研究，如犬瘟和

13、人类流感，对其它一些病毒性疫病，雪貂也提供了独特的、合适的模型，如麻疹、疱疹性口炎，阿留申病和牛鼻气管炎。雪貂已应用于病毒学、生殖生理、药理学等研究，最近报导特殊适合毒理学试验。还可作为小脑发育不全、流行性感冒等动物模型来研究人类相应的疾病。,2023/8/29,任立群,46,三、给药期限,按我国药政管理部门的要求，长期毒性试验的给药期限一般为临床疗程的34倍时间。创新药品试验周期应不少于90天，超过180天的新药可以在试验开始90天后，同时进行I期临床试验。,创新药物是指具有自主知识产权专利的药物。相对于仿制药，创新药物强调化学结构新颖或新的治疗用途，在以前的研究文献或专利中，均未见报道。,

14、2023/8/29,任立群,47,我国药政部门关于一般药物重复给药毒性试验期限的规定,临床拟用 毒性试验期限 给药时间 啮齿类动物 非啮齿类动物5天 2周 2周2周 1月 1月 2-4周 3月 3月 1-3月 6月 6月 3月 6月 9月,2023/8/29,任立群,48,我国药政部门关于一般药物重复给药毒性试验期限的规定,临床拟用 毒性试验期限 给药时间 啮齿类动物 非啮齿类动物5天 2周 2周2周 1月 1月 2-4周 3月 3月 1-3月 6月 6月 3月 6月 9月,每天给药最好固定时间。,2023/8/29,任立群,49,四、剂量水平的选择,三个剂量组是必不可少的：一个是足以引起明显

15、的毒性反应的高剂量，但死亡率应控制在 10%以内；一个是不引起毒性作用的低剂量(一般为动物有效剂量或临床治疗量的23倍)；为表明毒性作用的量效关系，在上述两个剂量之间插入一个(或多个)中间剂量。,2023/8/29,任立群,50,亚慢性毒性试验基础,最大剂量：选择90天试验中体重增长不到10%的剂量；中剂量：1/4最大剂量；低剂量：1/8最大剂量。,2023/8/29,任立群,51,最高剂量组的基本要求,仅出现轻度毒性，不改变试验动物的正常寿命，或至少在给药的前四分之一时间内不影响动物的体质，外观无异常，可有血清酶活力的改变或轻度体重增长抑制（10%）。,2023/8/29,任立群,52,在选

16、择合适的剂量时还应考虑到：药物在体内的生物蓄积作用。对于高蓄积性药物应适当减少其剂量，否则在长期毒性试验结束时各剂量均有可能出现毒性作用；药物是否有可能被特殊的酶所“解毒”或“活化增毒”，而这些酶又是否易被药物本身所诱导或抑制。药物在消化道中的稳定性。与胃肠道内容物有亲和性的药物，则应酌情增加剂量。,可供参考的具体方法,（1）半数致死量（LD50）法,根据急性毒性的LD50值决定三个剂量。一般在大鼠3个月长期毒性试验中，高、中、低三个剂量可分别采用约LD50的1/10、1/50和1/100剂量，狗各剂量组可采用大鼠相应各组的1/21/3剂量。,可供参考的具体方法,（1）半数致死量（LD50）法

17、,（2）短期蓄积试验过渡法,根据急性毒性试验所提供的相关信息，如毒性的量效关系，毒性出现的剂量范围及敏感动物等，先过渡到7天至21天的短期蓄积性试验，再将获得的参数外推于长期毒性试验。,急性毒性试验,蓄积毒性试验和/或7天短期重复给药试验,90天重复给药试验,180天或更长期重复给药试验,2023/8/29,任立群,56,可供参考的具体方法,（1）半数致死量（LD50）法,（2）短期蓄积试验过渡法,Traina法 第一步：确定大鼠亚急性毒性试验的最高剂量 根据大鼠的急性毒性试验找出最大无症状剂量，再分别以该剂量及其1/3和1/10量给三组大鼠（雌雄各半）连续服药23周。（此剂量下的动物仅出现轻

18、微的毒性反应，如食耗量略减，体重增长率略慢等）,2023/8/29,任立群,57,可供参考的具体方法,（1）半数致死量（LD50）法,（2）短期蓄积试验过渡法,Traina法,Traina法 第一步：确定大鼠亚急性毒性试验的最高剂量,第二步：确定犬亚急性毒性试验的最高剂量 以大鼠亚急性毒性试验的最高剂量为起点，给狗单次服用，根据观察结果适当增减剂量（对数间隔），找出狗单次服药的最大无症状剂量，再分别以此剂量及其1/3和1/10量给少数狗连续服药23周。,2023/8/29,任立群,58,可供参考的具体方法,（1）半数致死量（LD50）法,（2）短期蓄积试验过渡法,Traina法,Homburg

19、er法,选择一个剂量给雌雄各5只大鼠，连续服药2周。,如果无动物死亡，再成倍增加剂量，直至出现死亡；如果第一个剂量就出现动物死亡，再成倍减少剂量，直至无死亡出现。,2023/8/29,任立群,59,可供参考的具体方法,（1）半数致死量（LD50）法,（2）短期蓄积试验过渡法,Traina法,Homburger法,选择一个剂量给雌雄各5只大鼠，连续服药2周。,如果无动物死亡，再成倍增加剂量，直至出现死亡；如果第一个剂量就出现动物死亡，再成倍减少剂量，直至无死亡出现。,以无动物死亡的剂量为最大非致死量，以首次出现动物死亡的剂量为最小致死剂量，求算最大耐受量（MTD）。,2023/8/29,任立群,

20、60,可供参考的具体方法,（1）半数致死量（LD50）法,（2）短期蓄积试验过渡法,Traina法,Homburger法,选择一个剂量给雌雄各5只大鼠，连续服药2周。,如果无动物死亡，再成倍增加剂量，直至出现死亡；如果第一个剂量就出现动物死亡，再成倍减少剂量，直至无死亡出现。,以无动物死亡的剂量为最大非致死量，以首次出现动物死亡的剂量为最小致死剂量，求算最大耐受量（MTD）。,MTD=lg-1(lg最小致死剂量+lg最大非致死剂量)/2,2023/8/29,任立群,61,可供参考的具体方法,（1）半数致死量法（LD50法）,（2）短期蓄积试验过渡法,Traina法,Homburger法,Wei

21、l法,取初断乳大鼠30或40只，随机分为34组，每组雌雄各5只。连续给药7天。,观察死亡率、体重、肝肾指数和进食量的改变。找出7天药物最小有效量（MIE）。,MIE 90天=MIE 7天/6.2,可供参考的具体方法,（1）半数致死量（LD50）法,（2）短期蓄积试验过渡法,（3）药代动力学（MBS）法,根据药代动力学最大有效安全浓度（MCD）大鼠3个月长期毒性试验时，低、中、高三个剂量可分别 采用大鼠的1.0、3.36.6 和1020 MCD;狗一般可采用大鼠1/21/3的剂量。,注意：国内应用不多。,可供参考的具体方法,（1）半数致死量法（LD50法）,（2）短期蓄积试验过渡法,（3）药代动

22、力学（MBS）法,根据大鼠急性毒性试验的最大耐受量(MTD)(最大无症状剂量)大鼠长期毒性试验的三个剂量分别为1、1/3及1/10 MTD；狗和猴可采用大鼠1/21/3的剂量。,（4）最大耐受量（MTD）法,注意：蓄积性大的药物参考价值小。,可供参考的具体方法,（1）半数致死量（LD50）法,（2）短期蓄积试验过渡法,（3）药代动力学（MBS）法,根据临床拟用剂量（3个月长期毒性试验）大鼠低、中、高三个剂量可分别采用50100倍、2550倍和 1020倍临床拟用剂量狗可分别采用3050倍、1525倍和510倍临床拟用剂量猴可采用与狗相近的剂量或略低于狗的剂量进行试验,（4）最大耐受量（MTD）

23、法,（5）临床拟用剂量（ACD）法,可供参考的具体方法,（1）半数致死量法（LD50法）,（2）短期蓄积试验过渡法,（3）药代动力学法（MBS法）,根据人和动物的等效剂量比值，再按一定倍数扩大。,（4）最大耐受量法（MTD法）,（5）临床拟用剂量法（ACD法）,（6）等效剂量法,2023/8/29,任立群,66,不同动物的剂量折算系数,动物种属 小鼠 大鼠 豚鼠 兔 猫 猴 狗 人标准 K(剂量折算系数)1 7 12.3 27.5 29.7 64 124 388体重 K(kg体重剂量折算系数)1 0.71 0.62 0.37 0.30 0.32 0.21 0.11任何 R(动物体型系数)0.0

24、59 0.09 0.099 0.093 0.082 0.111 0.104 0.1体重 W(标准体重kg)0.02 0.2 0.4 1.5 2 4 12 70注：有些资料记载的动物体型系数（R）为此表中R 值的1000 倍，如小鼠R 为59，大鼠R 为90，这不影响药物剂量的折算。,2023/8/29,任立群,67,对于标准体重的动物：,KA，KB，RA，RB 值由上表查找,2023/8/29,任立群,68,对于任何体重的动物：,式中DB、dB 分别是欲计算的B 种动物的每只剂量及公斤体重剂量，DA、dA 分别是已知A 种动物的每只剂量及公斤体重剂量，WA、WB 是已知动物体重，RA、RB 是

25、体型系数，可由上表查得。,可供参考的具体方法,（1）半数致死量法（LD50法）,（2）短期蓄积试验过渡法,（3）药代动力学法（MBS法）,（4）最大耐受量法（MTD法）,（5）临床拟用剂量法（ACD法）,（6）等效剂量法,2023/8/29,任立群,70,五、给药方法,长期毒性试验的给药途径一般应尽量与预期临床使用的途径相一致。,临床用药途径为静脉或肌注时，3个月及以上的试验，由于试验周期长大鼠给药有困难，可用腹腔或皮下注射代替。,临床用药途径为口服时，可采用口服、灌胃或片剂、胶囊给药，也可混于饲料中给予。,2023/8/29,任立群,71,五、给药方法,灌胃给药可将供试药物制成一种溶液或混悬

26、液，但必须注意给药容量不应超过 12ml/100g 体重/天。,优点：给药剂量精确；时间易于掌握；从药动学角度出发符合临床给药的实际情况。,缺点：技术要求高（误入气管）；属外界刺激。,2023/8/29,任立群,72,五、给药方法,混于饲料给药则需计算食耗。,食 耗：从断奶至成年期食耗不同。药物量：要求每周或每两周根据各组动物的平均体重 进行调整。,灌胃,2023/8/29,任立群,73,预计动物体重（W）,W3rd=W2nd+1/2(W2nd-W1st),预计食耗（FC）,FC3rd=FC2nd+1/2(FC2nd-FC1st),预计食耗率（R）,R3rd=FC3rd/W3rd=g饲料/kg

27、体重/动物/天,预计药物浓度（C）,2023/8/29,任立群,74,注意事项,药物在饲料中的含量不应超过5%；,药物的异味,对饲料进行阶段性检查，确保药物在饲料中的稳定性。,饲料抽样：新鲜配制 存放一定时间,2023/8/29,任立群,75,五、给药方法,混于饲料,稀释剂：惰性的，如乳糖、甘露醇、干酪、淀粉、白陶土、碳酸钙、磷酸钙。,灌胃,胶囊或片剂给药，将受试物与稀释剂混合。,明胶胶囊，（赋型剂）片剂,2023/8/29,任立群,76,五、给药方法,一般情况：长期毒性试验均强调每天给药，每周必须给药 7 天。给药期限长（3个月）的药物每周至少应给药6天。,给药频率,特殊情况：参考体内代谢速

28、度。,2023/8/29,任立群,77,六、观察及测定指标,试验前，啮齿类动物至少应进行5天的适应性观 察，非啮齿类动物至少应驯养观察12周，应对 动物进行一般观察及血液生化学指标的检测。,试验期间，至少应每天或每两天作一次详细的 观察。,试验结束时，必须留1/3的动物做恢复期的观察 试验，其观察期时间一般不超过28天（可逆性）。,2023/8/29,任立群,78,（一）日常观察,1.一般观察内容 包括对实验动物被毛、皮肤、眼睛、粘膜、孔道(及其分泌物)、呼吸、循环、自主神经系统、躯体和肢体活动情况以及精神行为进行仔细地观察；对动物粪便的量、色泽和内含物，散失的食物，饮水瓶中残余的水以及一切可

29、以反映动物生活情况变化的各种迹象，都必须加以注意。所有出现的症状都必须记录在案。,观察及测定指标,2023/8/29,任立群,79,1.一般观察内容,如果发现动物死亡，必须尽可能快地进行尸体剖检，以减少组织自溶。将组织置于 10%的中性福尔马林或其它适宜的固定液中。如果尸体剖检不能立即进行，则必须将动物冷藏起来以延缓组织自溶。,（一）日常观察,观察及测定指标,2023/8/29,任立群,80,1.一般观察内容 对濒死的动物也应立即处死作尸体剖检。,（一）日常观察,尸体剖检后行组织病理学检查、评价。,观察及测定指标,2023/8/29,任立群,81,2.生长率,（一）日常观察,观察及测定指标,食

30、耗量饮水量体重,低毒药物的毒性表现,2023/8/29,任立群,82,（一）日常观察,观察及测定指标,3.食耗食耗常用来评价给药对食欲及食物利用率的影响食耗的计算,将加入供食器具中饲料的重量减去剩余的饲料重量再除以给食天数,2023/8/29,任立群,83,将给药组和对照组的食耗加以比较，有助于说明药物是否影响实验动物的食欲。（吸收、合成代谢）,（一）日常观察,观察及测定指标,3.食耗食耗常用来评价给药对食欲及食物利用率的影响食耗的计算,2023/8/29,任立群,84,（二）测定指标,1.器官重量,观察及测定指标,2023/8/29,任立群,85,年组织编写 药物研究技术指导原则规定,长期毒

31、性试验中需称重并计算脏器系数的器官,脑肝脏肾上腺脾脏附睾子宫,心脏肾脏胸腺睾丸卵巢肺脏,观察及测定指标,目的：确定靶器官,甲状腺、前列腺,长期毒性试验中进行病理组织学检查的组织或器官：,脑（大脑、小脑、脑干）垂体甲状腺食管胃肝脏肾脏脾脏气管主动脉附睾卵巢前列腺坐骨神经眼（眼科检查发现异常时）给药局部淋巴结,脊髓胸腺甲状旁腺唾液腺小肠和大肠胆囊肾上腺胰腺肺心脏睾丸子宫乳腺膀胱视神经骨髓,注：为啮齿类动物可不进行组织病理学检查的组织或器官,2023/8/29,任立群,87,器官重量降低，表示该器官萎缩或发育不良；器官重量增加提示可能有充血、水肿、增生、肥大、酶诱导变 化或新生物等。,将动物处死后取

32、出上述器官，除去附着的组织、除尽余血后立即称重（注意勿使组织干燥）。,（二）测定指标,观察及测定指标,1.器官重量,2023/8/29,任立群,88,2.血液学,（二）测定指标,常规的血液学参数骨髓涂片,观察及测定指标,1.器官重量,2023/8/29,任立群,89,年组织编写 药物研究技术指导原则规定,血液学指标,红细胞计数红细胞容积平均红细胞血红蛋白网织红细胞计数血小板计数,血红蛋白平均红细胞容积平均红细胞血红蛋白浓度白细胞计数及分类凝血酶原时间,红细胞压积,观察及测定指标,2023/8/29,任立群,90,血液学指标观察时间非啮齿类动物一般于整个试验周期中每隔 1.5 2 个月采血测定一

33、次各项指标。啮齿类动物试验周期为 6 个月时，可于试验中期、试验末 期以及恢复期分别剖杀部分动物(约 1/4、2/4、1/4)，进行各项检查；试验周期为 3 个月时，可于试验未期以及恢复 期分别剖杀部分动物(约 2/3、1/3)，取血检查。,（二）测定指标,观察及测定指标,2023/8/29,任立群,91,3.血液生化学,注意事项：采血时从各组中随机捉取动物，样本不能溶血、凝血使用足够数量的动物采样前禁食 12 小时使用合适的统计学分析方法，注意剂量反应关 系；将所得资料和数据与同种、同龄、同性别、同生理状况的实验动物的资料加以比较分析,（二）测定指标,观察及测定指标,2.血液学,1.器官重量

34、,2023/8/29,任立群,92,年组织编写 药物研究技术指导原则规定,血液生化学指标,天门冬氨酸氨基转换酶碱性磷酸酶尿素氮总蛋白血糖总胆固醇谷氨酰转移酶氯离子浓度,丙氨酸氨基转换酶肌酸磷酸激酶肌酐白蛋白总胆红素甘油三酯钾离子浓度钠离子浓度,观察及测定指标,2023/8/29,任立群,93,3.血液生化学,（二）测定指标,4.尿液分析,观察及测定指标,2.血液学,1.器官重量,2023/8/29,任立群,94,尿液分析指标,尿液外观pH值尿蛋白尿胆原潜血,比重尿糖尿胆红素酮体白细胞,年组织编写 药物研究技术指导原则规定,观察及测定指标,2023/8/29,任立群,95,七、恢复期观察,最后一

35、次给药物后24小时，每组活杀部分动物检测上述各项指标，留下1/31/4动物进行恢复期观察。观察期一般不超过28天，而后再活杀检查上述所有指标，以了解毒性反应的可逆程度和可能出现的延迟性毒性反应。,2023/8/29,任立群,96,综合评价,长期毒性试验是药物非临床安全性研究的有机组成部分，是药物非临床毒理学研究中综合性最强、获得信息最多和对临床指导意义最大的一项毒理学研究。对其结果进行评价时，应结合受试物的药学特点，药效学、药代动力学和其他毒理学研究的结果，以及已取得的临床研究的结果，进行综合评价。,2023/8/29,任立群,97,本章学习要点,掌握相关基本概念、长期毒性试验与急性毒性试验的根本差别、长期毒性试验设计的基本原则（总原则）、给药期限及恢复期观察熟悉试验设计的一般原则和要求、剂量水平的选择及给药方法了解慢性毒性试验的目的和意义、实验动物的选择、长期毒性试验的观察及测定指标,2023/8/29,任立群,98,本章复习,长期毒性试验；蓄积作用长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异蓄积作用的表现形式有几种？我国药政部门对长期毒性试验动物数的要求长期毒性试验时检查脏器指数的器官包括哪些？恢复期观察剂量水平的选择有哪几种具体方法参考？,2023/8/29,任立群,99,本章复习,长期毒性试验的目的和意义。长期毒性试验的基本原则、基本要求？如何确定长期毒性试验的试验期限？,