负染技术、扫描电镜样品制备技术.ppt
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1、负染技术 阴性反差染色,染色剂不被样品吸收而是沉淀到样品四周。用于细菌、病毒、噬菌体、亚细胞成份的检测。(一)染色液的特点 1.不和样品发生反应 2.可保护样品结构 3.可提供足够高的反差 4.本身颗粒体积很小2-4%磷钨酸,;2-3%醋酸铀,pH4.2,(二)操作方法 待检生物组织悬液滴于载网,静置5-10 min 用滤纸吸去载网边缘多余液体 载网未完全干 滴染色液,染色3-5min用滤纸吸去载网边缘多余液体,自然干燥,镜检,(三)影响因素 1.被检样品纯度和浓度 2.染色液pH 3.操作技巧,扫描电镜生物样品制备技术 含水量少的组织(骨骼、牙齿、毛发等)预处理、导电 含水量多的组织(大多数
2、组织)预处理、干燥、导电一 样品预处理(一)常规样品 1.取材 58 mm,保护观察面 2.清洗 漂洗、冲洗、擦洗,快!3.固定、脱水 同超薄切片,(二)游离细胞 收集所需细胞 适量0.1%多聚赖氨酸 PBS洗涤,1000rpm 5min,弃上清 46 mm玻片,室温5-10min 滴入2-4ml 0.5%戊二醛,4oC 0.5h 吸去多余液体,成膜 PBS洗涤,1000 rpm 5min,弃上清,制成悬液 细胞悬液滴于玻片,5-30min滤纸吸去多余液体 1%戊二醛,4oC 1h PBS漂洗,1%OsO4,4oC 1h,梯度酒精脱水,膜未干,(三)欲看剖面的结构实质性脏器的断面或细胞内部 用
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- 技术 扫描电镜 样品 制备
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