血凝和血凝抑制实验.ppt

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1、血凝(HA)与血凝抑制(HI)试验,一、实验目的,1、掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操 作方法和结果判定方法2、了解新城疫有关背景知识,二、实验内容,1、血凝试验(HA)检测新城疫抗原的效价2、血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体（疫苗注射后的抗体检测）,三、实验原理,1、血凝试验（HA）原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物地红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝（HA）,也称直接血凝反应。,病毒颗粒,红细胞,2、血凝抑制试验（HI）原理：当病毒的悬液中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞

2、的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI）反应，也称血凝抑制反应。,I am late！,抗体,抗原,四、实验材料,1、血凝板（96孔90V型）2、新城疫阳性血清3、被检血清（1份）4、1红细胞悬液5、稀释液6、移液器（50ul,2人/把）7、枪头,五、实验方法与结果判定,血凝试验（HA)1、在血凝板上第一排和第二排的112孔内各加入25ul生理盐水2、在第1孔内加入25ul病毒抗原，然后依次倍比稀释至第11孔，最后弃25ul（也就是可以一次做2个抗原效价测定）3、每孔加入1鸡红细胞悬液25ul4、轻轻振荡均匀，后放于室温或37中静置30分钟5、结果判定,血凝效价测定,结果判定标准,1、：

3、红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100凝集；2、：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而稍向孔底集中，即75凝集；3、：红细胞形成一个环状，四周有凝集块，即50凝集；4、：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍有凝集块，即25凝集；5、：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集；,血凝价的判定,以出现（50凝集）的抗原最高稀释倍数为该抗原的血凝价（1:128）？。25ul 1:256稀释的病毒抗原为该抗原的一个血凝单位。,血凝抑制试验,1、将病毒抗原稀释成4个血凝单位（1/1284=1:32）2、在血凝板上112孔内各加入25ul生理盐水；3、在第1孔内加入被检血清25ul，然后倍比稀释至第

4、10孔，最后弃25ul；4、第111孔内加入4单位抗原25ul（第11孔为抗原对照第12孔为红细胞对照）；5、轻轻振荡均匀，后放于室温或37中静置30分钟6、每孔加入1鸡红细胞悬液25ul；7、轻轻振荡均匀，后放于室温或37中静置30分钟8、结果判定,血凝抑制效价测定,结果判定标准,1、：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100凝集；2、：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而稍向孔底集中，即75凝集；3、：红细胞形成一个环状，四周有下凝集块，即50凝集；4、：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍有凝集块，即25凝集；5、：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集。,血凝抑制价的判定,以出现

5、完全抑制凝集(即不凝集)的血清最高稀释倍数为该血清的血凝抑制价（1:4）即抗体为22。,六、注意事项,1、红细胞用前请摇匀2、用枪加样定要准，尽量不要有气泡3、结果判定有耐心4、HA和HI勿相混,红细胞的制备,1、采SPF鸡血20-40ml于加抗凝剂的试管中（真空采血管）2、用生理盐水以1:5的比例稀释鸡全血后放入离心管中以1500r/min离心10min，3、离心后用移液器吸取上清液，再次加入生理盐水稀释并以1500r/min离心10min。4、离心后用移液器吸取上清液，再次加入生理盐水稀释并以1800r/min离心8min。5、离心后用移液器吸取上清液，剩余红细胞配制为10%的红细胞溶液，4保存备用。,注意事项,1、在稀释移取混匀的操作过程中动作要慢，以免损坏红细胞（表现为分离是上清液为淡红色，正常情况第一次分离后上清液为淡黄色，之后直至清亮为清洗干净）。2、在吸取过程中一定要将中间的白细胞层吸取干净。,