药物分析湖南大学第06章芳酸类药物的分析.ppt

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1、第一节、典型药物的分类与性质,第二节、鉴别试验,第三节、特殊杂质检查,第四节、含量测定,内 容,主要性质与苯甲酸和水杨酸类比较，布洛芬（苯乙酸衍生物）的酸性较弱，溶于中性乙醇后，可用氢氧化钠直接滴定。氯贝丁酯（苯氧基丙酸酯衍生物）遇光不稳定，易水解，可用两步滴定法测定含量。布洛芬和氯贝丁酯均具有特征的紫外和红外吸收光谱，可用于鉴别。,芳酸类药物的结构与性质比较结构共同点：苯环、羧基 不同点：取代基不同（如酚羟基、芳伯氨基等）物理性质大多数为固体，具有一定的熔点；游离芳酸类药物几乎不溶于水，易溶于有机溶剂；芳酸碱金属盐及其它盐易溶于水，难溶于有机溶剂；,芳酸类药物的结构与性质比较（续）化学性质芳

2、酸具游离羧基，呈酸性，其pKa在36之间，属中等强度的酸或弱酸；-X、-NO2、-OH等吸电子取代基使酸性增强；-CH3、-NH2等斥电子取代基使酸性减弱；邻位取代间位、对位取代，尤其是邻位取代酚羟基，形成分子内氢健，酸性大为增强。,芳酸类药物的结构与性质比较（续）化学性质（续）芳酸酯可水解利用其水解得到酸和醇的性质可进行鉴别；利用芳酸酯水解定量消耗氢氧化钠的性质，芳酸酯类药物可用水解后剩余滴定法测定含量；芳酸酯类药物还应检查因水解而引入的特殊杂质。,芳酸类药物的结构与性质比较（续）化学性质（续）芳酸碱金属盐易溶于水，水解，溶液呈弱碱性，可用双相滴定法或非水碱量法测定其含量。取代芳酸类药物可利

3、用其取代基的性质进行鉴别和含量测定。具有酚羟基的药物可用FeCl3反应鉴别。具芳伯氨基的药物可用重氮化-偶合反应鉴别、亚硝酸钠滴定法测定含量。,三、氧化反应,四、水解反应,五、分解产物的反应苯甲酸盐,含硫的药物,第三节 特殊杂质检查,一、阿司匹林中特殊杂质的检查 合成工艺,检查溶液澄清度未反应的酚类、及其他副反应生成的醋酸苯酯、水杨酸苯酯和乙酰水杨酸苯酯均不溶于碳酸钠试液，而阿司匹林溶于碳酸钠试液。,（水杨酸苯酯）,水杨酸的检查水杨酸杂质来源：原料残存（生产过程中乙酰化不完全）水解产生（贮存过程中水解产生）检查原理：水杨酸在弱酸性溶液中与Fe3+反应呈紫堇色阿司匹林结构中无游离酚羟基，无以上反

4、应限量:原料：0.1%阿司匹林片：0.3%阿司匹林肠溶片：1.5%,易碳化物的检查检查易被硫酸碳化呈色的低分子有机物质。检查方法：,取供试品0.5mg,置于含硫酸（95.5%g/g）5ml的比色管,振摇使溶解静置15min观察颜色,对照液（比色用氯化钴液0.25ml，比色用重铬酸钾液0.25ml，比色用硫酸铜0.40ml，加水成5ml）,与对照液比较颜色不得更深,二、对氨基水杨酸钠中间氨基酚的检查 间氨基酚杂质来源原料残存（间氨基酚为原料）对氨基水杨酸在潮湿空气中，露置日光或遇热受潮时，易脱羧基，生成间氨基酚。,双相滴定法原理：利用对氨基水杨酸钠不溶于乙醚，间氨基酚溶于乙醚的性质，使二者分离；

5、在乙醚提取液中加适量水和指示剂（甲基橙），用盐酸滴定；控制盐酸滴定液体积以控制间氨基酚限量；生成的盐酸盐在乙醚中不溶，转溶于水相中。,离子对HPLC法（内标法）色谱条件填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶流动相：磷酸二氢钠液(0.05mol/L)-磷酸氢二钠(0.05mol/L)-甲醇(含氢氧化四丁基铵1.9g)(425:425:150)内标：磺胺溶液（5g/ml）,用流动相配制。流速：1.5ml/min检测波长：254nm进样量：20l,离子对试剂和其他添加剂选用规则 样品中含有-COOH、-SO3H基团时，选用的离子对试剂应是带正电荷的有机胺盐，流动相通常使用甲醇-水；除离子对试剂外，一般还需加入

6、磷酸盐缓冲液，以控制流动相的酸度。从而使这些酸性官能团获得解离；样品中含有-NH2、-NH-基团时，选用的离子对试剂应是烷基磺酸盐或硫酸盐；样品中同时含有-NH2、-COOH，-SO3H等不同性质的基团时，则规则、或选用的离子对试剂和添加剂均为合理。,三、二氟尼柳中有关物质的检查 二氟尼柳存在多条合成路线，产品中可能存在多种苯或联苯类合成中间体及副产物，结构和性质相差较大；使用单一的正相或反相色谱法难以检出有关物质；中国药典（2005）分别采用TLC（正相）和反相HPLC，以自身对照法检查有关物质A和B。,有关物质A的检查（自身高低浓度对比法）：,吸取5l点样,精密量取适量加甲醇稀释成浓度为5

7、0g/ml,配制本品的甲醇溶液浓度约为10mg/ml,对照液,吸取5l点样,同一硅胶CF254薄层板,以正己烷-二氧六环-冰醋酸（85:10:5）为展开剂，展开后，晾干，置于紫外灯(254nm)下检查,判断:控制杂质斑点个数，控制杂质种类；供试品溶液所显杂质斑点不得深于对照溶液的主斑点（或荧光强度）。,优点：以供试品的稀溶液作为对照液，不需要杂质对照品，简单、价廉，还可配成几种限量的对照溶液；缺点：不同物质，不同Rf值比较，准确度较差、直观性较差。,杂质对照品法 判断：供试品中所含杂质斑点不得超过相应的杂质对照斑点。优点：同一物质，同一Rf值比较，准确度高、直观性强。缺点：需要杂质对照品。,供

8、试品,对照品,有关物质B的检查取有关物质A项下的供试品与对照液，照HPLC法测定。填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶流动相：水-甲醇-乙腈-冰醋酸(55:23:30:2)检测波长：254nm进样量：供试品和对照品各20l判断：供试品溶液的色谱图中的各杂质峰面积的和不得大于对照品溶液的主峰面积。,四、甲芬那酸中特殊杂质的检查 合成工艺,（邻氯苯甲酸）,+,（2,3-二甲苯胺）,（甲芬那酸）,检查中国药典（2005）规定检查“铜”和“有关物质”。“铜”检查法采用原子吸收分光光度法测定，铜含量的限度：0.001%。供试品：,加硫酸湿润炽灼至灰化完全,取本品1.0g置于石英坩埚,加0.1mol/L硝酸溶液溶

9、解，定量转移至25ml容量瓶中，摇匀，即得,加0.1mol/L硝酸溶液稀释至刻度，摇匀即得,精密称取硫酸铜0.393g置于1000ml量瓶中,加0.1mol/L硝酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀,标准铜溶液：,精密称取标准铜溶液1.0ml，置于25ml量瓶中,精密量取10ml置于100ml量瓶中，加0.1mol/L硝酸溶液稀释至刻度，摇匀即得,对照品溶液：,测定法：324nm处测定吸光度，A供试品A对照品,检测波长：254nm进样量：10l判断：供试品中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照液主峰面积的1/5;各杂质峰面积的总和不得大于对照溶液主峰面积。,五、氯贝丁酯中特殊杂质的检查 合成工艺,缩

10、合，水解,CH3COCH3,CHCl3,NaOH,（对氯苯酚）,（对氯苯氧异丁酸钠）,酸化,HCl,酯化,CH3CH5OH,H2SO4,（对氯苯氧异丁酸）,对氯酚的检查对氯酚为起始原料，且氯贝丁酯可分解产生对氯酚，其毒性大。中国药典（2005）采用气相色谱法检查对氯酚。色谱柱：2m玻璃色谱柱；固定液：甲基硅橡胶（SE-30）；载气：氮气柱温：160检测器：氢火焰离子化检测器对照品溶液：0.0025%对氯酚的三氯甲烷溶液,供试品溶液：,取本品10.0g，加氢氧化钠试液20ml振摇提取,分取下层液，用水5ml振摇洗涤，留作挥发性物质检查,水洗液并入碱性提取液用三氯甲烷洗涤2次后加稀盐酸使成酸性,用

11、三氯甲烷提取2次，每次5ml，合并提取液，并加三氯甲烷至10ml即得,供试品中对氯酚峰面积不得大于对照品中对氯酚峰面积,挥发性杂质的检查中国药典（2005）采用气相色谱法检查在合成过程中引入的脂类与其他挥发性物质及残留有机溶剂。色谱条件：同对氯酚的检查供试品溶液：预试溶液：,取对氯酚项下经碱液洗涤后的本品适量，经无水硫酸钠干燥即得。,称取供试品适量，用三氯甲烷溶解制成每ml约含10mg的溶液，用于调节检测器灵敏度。,供试品中各杂质峰面积的和，不得大于总峰面积的千分之五,第三节 含量测定,一、酸碱滴定法 直接滴定本类药物中的游离羧基的酸性（pKa36），可用碱滴定液直接滴定。,（阿司匹林）,缺点

12、：酯键水解干扰（不断搅拌、快速滴定）、酸性杂质干扰（如水杨酸）；适用范围：不能用于含水杨酸过高或制剂分析，只能用于合格原料药的含量测定；苯甲酸、丙磺舒、水杨酸、二氟尼柳、双水杨酸脂和布洛芬等的含量可采用直接滴定法测定；二氟尼柳：以甲醇-水为溶剂，酚红为指示剂；甲芬那酸：以无水中性乙醇为溶剂，以酚红为指示剂。,两步滴定法 阿司匹林片片剂中加有少量酒石酸或枸櫞酸做稳定剂，制剂工艺过程可能产生水杨酸与醋酸，不能采用碱直接滴定法和水解后剩余滴定法，需采用两步法。第一步:中和,注：消除了酸性杂质的干扰，降低了酯键水解的干扰;阿司匹林肠溶片和氯贝丁酯采用同法测定;氯贝丁酯：消除供试品中共存的酸性杂质;氢氧

13、化钠与阿司匹林反应摩尔比为1:1；故氢氧化钠的滴定度为：T=0.11/1180.16=18.02（mg/ml)片剂含量测定结果的计算,三、双相滴定法芳酸碱金属盐（如苯甲酸钠）易溶于水，呈碱性，可用酸滴定液滴定；滴定过程中析出的游离苯甲酸微溶于水，具有一定的酸性，使溶液浑浊且形成缓冲体系，滴定终点pH突跃不明显；苯甲酸溶于有机溶剂，在水相中加入不相混溶的有机溶剂，可将滴定过程中产生的苯甲酸不断萃取出来，降低苯甲酸在水相的量，使终点易于判断。,苯甲酸钠取本品1.5g，精密称定，置分液漏斗中，加水25m1、乙醚50ml及甲基指示液2滴，用盐酸滴定液(0.5mo1/L)滴定，边滴边振摇，至水层显橙红色

14、，分取水层，置具塞锥形瓶中，乙醚层用水5ml洗涤，洗液并入锥形瓶中,加乙醚20m1，继续用盐酸滴定液滴定，至水层显持续的橙红色。每1ml的盐酸滴定液(0.5mol/L)相当于72.06mg的C7H5NaO2。,注：优点：消除了反应产物的干扰;乙醚的作用：萃取反应生成的苯甲酸，使水相中的中和反应进行到底;滴定中要强力振摇。随着滴定不断进行，苯甲酸不断被萃取入有机溶剂层，使滴定反应完全，终点清晰。,四、紫外分光光度法直接分光光度法贝诺酯的取代苯结构在乙醇溶液中，在240nm处有最大吸收，可用于含量测定。离子交换-紫外分光光度法氯贝丁酯在226nm处有最大吸收，但对-氯酚等亦有吸收，干扰测定。氯贝丁

15、酯不发生电离，而对-氯酚等可发生酸性解离，采用阴离子交换色谱分离后，再用紫外-可见分光光度法测定。,注：水杨酸与三氯化铁-尿素生成紫色配位化合物，保留于硅藻土色谱柱上;用三氯甲烷洗脱时，高浓度的尿素使配位化合物移动较慢;以冰醋酸的乙醚溶液洗脱时，紫色配合物解离，水杨酸游离出来，继而被三氯甲烷洗脱。,五、高效液相色谱法药物制剂中的杂质、辅料及稳定剂，常干扰主成分的含量测定。中国药典（2005）采用HPLC测定阿司匹林肠溶胶囊、栓剂，布洛芬缓释胶囊、口服溶液、糖浆剂等的含量。填充剂：十八烷基硅烷键硅胶流动相：1%冰醋酸-甲醇（50:50）测定波长：280nm,鉴别水杨酸及其盐类，最常用的试液是（）

16、A.碘化钾 B.碘化汞钾C.三氯化铁 D.硫酸亚铁E.亚铁氰化钾,自测题,阿司匹林片片剂可采用的测定方法为（）A.非水滴定法B.水解后剩余滴定法C.两步滴定法D.柱色谱法E.双相滴定法,两步滴定法测定阿司匹林片的含量时，每1ml氢氧化钠溶液（0.1mol/L）相当于阿司匹林（分子量=180.16）的量是（）18.02mg 180.2mg90.08mg 45.04mg450.0mg,反应摩尔比为1:1,T：滴定度，每1ml滴定液相当于被测组分的mg数C：滴定液浓度，mol/LM：被测物的摩尔质量，g/molN：1mol样品消耗滴定液的摩尔数,采用双相滴定测定法苯甲酸钠的含量，其所用的溶剂体系为（

17、）水-乙醇 水-冰醋酸C.水-氯仿 D.水-乙醚E.水-丙酮,双相滴定法可适用的药物为（）A.阿司匹林B.对乙酰氨基酚C.水杨酸D.苯甲酸E.苯甲酸钠,阿司匹林加碳酸钠试液加热后，再加稀硫酸酸化，此时产生的白色沉淀应是（）苯酚 乙酰水杨酸C.水杨酸 D.醋酸钠E.醋酸苯酯,水杨酸与三氯化铁试液生成紫堇色产物的反应，要求溶液的pH值是（）pH10.0 pH2.0C.pH78 D.pH46E.pH2.00.1,两步滴定法测定阿司匹林片或阿司匹林肠溶片时，第一步滴定反应的作用是（）测定阿司匹林含量消除共存酸性物质的干扰使阿司匹林反应完全便于观测终点有利于第二步滴定,对氨基水杨酸钠中的特殊杂质是（）水

18、杨酸间氨基酚氨基酚苯酚苯胺,能用与FeC13试液反应产生现象鉴别的药物有（）苯甲酸钠水杨酸对乙酰氨基酚氢化可的松丙酸睾酮,采用双相滴定法测定苯甲酸钠含量时，加入乙醚的目的是（）防止反应产物的干扰乙醚层在水上面，防止样品被氧化消除酸碱性杂质的干扰防止样品水解以上都不对,采用双步滴定法测定阿司匹林制剂含量时，被测组分与NaOH的反应摩尔比为（）A.2:1 B.1:2C.1:1 D.3:1E.以上都不对,阿司匹林中含量最高的杂质为（）乙酰水杨酸酐乙酰水杨酸水杨酸水杨酰水杨酸以上都不对,下列试液中，最常用于区别水杨酸和苯甲酸钠的试液是()碘化钾碘化汞钾三氯化铁 硫酸亚铁亚铁氰化钾,在中性条件下，可与三氯化铁试液反应，生成赭色沉淀的药物是（）A.水杨酸钠B.对氨基水杨酸钠C.乙酰水杨酸D.苯甲酸钠E.扑热息痛,用直接滴定法测定阿司匹林含量时，下列说法正确的是（）与NaOH的反应摩尔比为1:1在中性乙醇溶液中滴定用盐酸滴定液滴定以中性红为指示剂滴定时应在不断振摇下稍快进行,胺,芳胺芳伯氨基,羧酸,芳酸,氨甲苯酸,羟苯乙酯,布美他尼,酚磺乙胺,