GB∕T 19557.5-2017 植物品种特异性、一致性和稳定性测试指南 大白菜.docx

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1、ICS 65.020.20B 05OB中华人民共和国家标准GB/T19557.52017代替GB/T19557.52004植物品种特异性、一致性和稳定性测试指南大白菜Guidelinesfortheconductoftestsfordistinctness,uniformityandstabilityChinesecabbage(BrassicaCampestrisL.ssp.pekinensis(Lour)Olsson)2018-05-01 实施2017-11-01发布中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会目次前言III1范围12规范性引用文件13术语和定义14符号1

2、5繁殖材料要求26测试方法27特异性、一致性和稳定性的判定38性状表39分组性状410技术问卷4附录A（规范性附录）大白菜性状表5附录B（规范性附录）大白菜性状表的解释17附录C（规范性附录）大白菜技术问卷30-XX.I刖百本部分按照GBT1.12009给出的规则起草。本部分代替GB/T19557.5-2004植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南大白菜。本部分与GB/T19557.52004相比，除编辑性修改外主要技术差异如下：一将繁殖材料的要求中繁殖材料修改为种子（见5.3,5.4和5.5,2004年版的第4章）；一修改田间试验和一致性的判定中样本数量（见6.3.1和7.3,2004年版

3、的5.3和6.3）;修改部分性状的表达状态或标准品种（见A.1和A.2,2004年版的A.1和A.2）;增加或更换部分性状的标准品种图片（见附录B,2004年版的附录B）;一一修改品种类型（见附录C四，2004年版的附录C五）。本部分由中华人民共和国农业部提出。本部分由全国植物新品种测试标准化技术委员会（SAC/TC277）归口。本部分起草单位：山东省农业科学院作物研究所、农业部科技发展中心本部分主要起草人：王东建、郑永胜、李汝玉、张哈、堵苑苑、王玮、段丽丽、王雪梅、李华、仙丽娜、王秀娟、王穆穆。本部分所代替标准的历次版本发布情况为：GB/T19557.52004O植物品种特异性、一致性和稳定

4、性测试指南大白菜1范围GB/T19557的本部分规定了大白菜BrassicacampestrisL.ssp.PekinenSiS(LOUr)OlSSOn品种特异性、一致性和稳定性测试的技术要求和结果判定的一般原则。本部分适用于大白菜品种特异性、一致性和稳定性测试和结果判定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T3543.3农作物种子检验规程净度分析GB/T3543.4农作物种子检验规程发芽试验GB/T3543.6农作物种子检验规程水分测定GB16715.

5、2瓜菜作物种子第2部分：白菜类GB/T19557.1植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南总则TG/105/4植物品种特异性、一致性和稳定性测试指南大白菜(GUidelineSfortheconductoftestsfordistinctness,uniformityandstabilityChinesecabbage)3术语和定义GB/T19557.1界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1群体测量singlemeasurementofagroupofplantsorpartsofplants对一批植株或植株的某器官或部位进行测量，获得一个群体记录。3.2个体量measuremento

6、fanumberofindividualplantsorpartsofplants对一批植株或植株的某器官或部位进行逐个测量，获得一组个体记录。3.3群体目测visualassessmentbyasingleobservationofagroupofplantsorpartsofplants对一批植株或植株的某器官或部位进行目测，获得一个群体记录。3.4个体目测visualassessmentbyobservatiofindividualplantsorpartsofplants对一批植株或植株的某器官或部位进行逐个目测，获得一组个体记录。4符号下列符号适用于本文件。MG:群体测量。MS:个体

7、测量。PQ：假质量性状。QL:质量性状。QN:数量性状。VG:群体目测。VS:个体目测。*:标注性状为国际植物新品种保护联盟(UPOV)用于统一品种描述所需要的.重要性状，除非受环境条件限制性状的表达状态无法测试，所有UPoV成员都应使用这些性状。:本文件中下划线是特别提示测试性状的适用范围。5繁殖材料要求5.1 繁殖材料以种子形式提供。5.2 提交的种子数量至少为50g。5.3 提交的种子应外观健康，活力高，无病虫侵害，质量应达到GB16715.2的要求，即：净度298%,发芽率285乳水分W7%,检测方法按照GB/T3543.3,GB/T3543.4和GB/T3543.6执行。5.4 提交

8、的种子一般不进行任何影响品种性状表达的处理。如果已处理，应提供处理的详细说明。5.5 提交的种子应符合中国植物检疫的有关规定。6测试方法6.1 测试周期测试周期一般至少为2个独立的生长周期。6.2 测试地点测试通常在一个地点进行。如果某些性状在该地点不能充分表达，可在其他符合条件的地点对其进行观测。6.3 田间试验6.3.1 试验设计待测品种和近似品种相邻种植。以穴播方式种植。每个小区不少于30株，小区设2行，行距60cm70cm,株距45cm50cm。共设2个重复。6.3.2 田间管理参照当地大田生产管理方式或根据测试品种的特殊要求进行。各小区田间管理应严格一致，同一管理措施应当日完成。6.

9、4 性状观测6.4.1 观测时期性状观测应按照表.1和表A.2列出的生育阶段进行。附录B对这些生育阶段进行了解释。6.4.2 观测方法性状观测应按照表A.1和表A.2规定的观测方法（MG、MS、VG.VS）进行。部分性状观测方法见B.2和B.3。6.4.3 观测数除非另有说明，个体观测性状（VS、MS）每个小区植株取样数量为20个，在观测植株的器官或部位时，每个植株取样数量应为1个。群体观测性状（VG、MG）应观测整个小区或规定大小的群体。6.5 附加测试必要时，可选用表A.2中的性状或本部分未列出的性状进行附加测试。7特异性、一致性和稳定性的判定7.1 总体原则特异性、一致性和稳定性的判定按

10、照GB/T19557.1确定的原则进行。7.2 特异性的判定待测品种应明显区别于所有已知品种。在测试中，当待测品种至少在一个性状上与最为近似的品种具有明显且可重现的差异时，即可判定待测品种具备特异性。7.3 一致性的判定采用1%的总体标准和至少95%的接受概率。当样本大小为6株35株时，最多允许有1个异型株；当样本大小为36株82株时，最多允许有2个异型株。7.4 稳定性的判定如果一个品种具备一致性，则可认为该品种具备稳定性。一般不对稳定性进行测试。必要时，可以种植品种的下一代种子（常规种）或新配制的种子（杂交种），与以前提供的繁殖材料相比，若性状表达无明显变化，则可判定该品种具备稳定性。对于

11、杂交种，除直接对杂交种本身进行测试外，还可以通过对其亲本系的一致性和稳定性鉴定的方法进行鉴定。8性状表8.1 侬根据测试需要，将性状分为基本性状、选测性状，基本性状是测试中需测试的性状。表A.1列出了大白菜基本性状，表A.2列出了大白菜可以选择测试的性状。性状表列出了性状名称、表达类型、表达状态及相应的代码和标准品种、观测时期和方法等内容。8.2 表达类型根据性状表达方式，将性状分为质量性状、假质量性状和数量性状三种类型。8.3 表达状态和相应代码每个性状划分为一系列表达状态，为便于定义性状和规范描述，每个表达状态赋予一个相应的数字代码，以便于数据记录、处理和品种描述的建立与交流。8.4 标准

12、品种性状表中列出了部分性状有关表达状态相应的标准品种，以助于确定相关性状的不同表达状态和校正年份、地点引起的差异。9分组性状本部分中，品种分组性状如下：a） *叶球：顶部闭合类型（表A.1中性状25）;b） *叶球：形状（表A.1中性状30）;c） *成熟期（表A.1中性状38）。10技术问卷申请人应按附录C填写大白菜技术问卷。附录A（规范性附录）大白菜性状表A.1大白菜基本性状大白菜基本性状见表A.Io表A.1大白菜基本性状表性状序号性状观测时期和方法表达状态标准品种代码1子叶：大小QN21VG小青研1号1中北京新三号2大潍白秋玉32子叶：颜色PQ21VG黄绿色快菜6号1浅绿色北京小杂562

13、中等绿色津绿603深绿色津绿754*外叶：颜色30VG黄绿色1浅绿色北京小杂562中等绿色北京新三号33PQ深绿色津绿604灰绿色54外叶：花青忒显色QL30VG无1有95外叶：光泽度QN30VG无或极弱1极弱到弱2弱青研1号3弱到中4中北京新三号5中到强6强津绿607强到极强8极强9表A.l（续）性状序号性状观测时期和方法表达状态标准品种代码无或极疏津绿601极疏到疏2疏青研春白2号3疏到中4中青研八号5外叶：背面茸毛30VG中到密66QN密7密到极密8极密9外叶：纵切面形状凹17QN30平津绿602（十）VG凸北京小杂563无或极小1极小到小2小青研1号3小到中4中北京新三号5外叶：叶缘波

14、状30VG中到大68QN(+)大7大到极大8极大9无1外叶：叶缘缺刻圆齿29QL(+)30VG锯齿3重齿410外叶：泡状突起大小QN(+)30VG无或极小1极小到小2小丰杭783小到中4中津绿755中到大6大7大到极大8极大9表A.l（续）性状序号性状观测时期和方法表达状态标准品种代码无或极少1极少到少2少青研春白2号3*外叶；泡状突起数量30VG少到中4中北京小杂565中到多611QN多津绿607多到极多8极多912外叶：叶脉粗细QN（十）30VG细1中2粗313*植株：生长习性QN（+）41VG直立津绿601半直立北京新3号2平展新乡小包233极矮夏白451极矮到矮2矮秦白2号314*植株

15、：高度QN43MS矮到中4中北京新三号5中到高6高津绿757高到极高8极高太原二青915植株：开展度QN43MS极小1极小到小2小津绿603小到中4中北京新三号5中到大6大丰抗787大到极大8极大9表A.l(续)性状序号性状观测时期和方法表达状态标准品种代码16植株：侧芽QL(+)43VG无1有917*外叶：形状PQ(+)43VG近圆形1宽倒卵形2倒卵形3长倒卵形4长圆形5极短1极短到短2短滩白秋玉3短到中4中北京新三号5外叶：长度43MS中到长618QN(a)长津绿607长到极长8极长9外叶：宽度QN43极窄1极窄到窄2窄北京小杂563窄到中4中北京新三号5中到宽6宽丰杭70719(a)(+

16、)MS宽到极宽8极宽920*外叶：中肋颜色PQ(+)43VG白色1绿白色2浅绿色3中等绿色421外叶：中肋横切面形状PQ(b)43VG凹吉研春白3号1平津绿602表A.l(续)性状序号性状观测时期和方法表达状态标准品种代码22外叶：中肋长度QN(a)43MS极短1极短到短2短漂白秋玉3短到中4中北京新三号5中到长6长巨龙秋宝7长到极长8极长923外叶：中肋宽度QN(a)(b)43MS极窄1极窄到窄2窄北京小杂563窄到中4中北京新三号5中到宽6宽青研八号7宽到极宽8极宽9外叶：中肋厚度极薄1极薄到薄2薄津绿753薄到中4中秦绿605中到厚624QN(a)(+)43MS厚青研八号7厚到极厚8极厚

17、925*叶球：顶部闭合类型QN(十)50VG开放津绿601半开放北京小杂562闭合北京新三号326*仅适用于闭合类型品种：叶球：抱合类型PQ(+)50VG拧抱太原二青1合抱青研春白2号2叠抱北京新三号3表A.l(续)性状序号性状观测时期和方法表达状态标准品种代码27仅适用于闭合类型品种：叶球顶部形状PQ(十)50VG尖1圆2平328仅适用于闭合类型品种：叶球上部颜色PQ(+)50VG白色1绿色2黄色3紫色429*仅适用于绿色类型品种：叶球：上部绿色程度QN(+)50VG极浅1极浅到浅2浅3浅到中4中胶白秋丰5中到深6深津青607深到极深8极深930*叶球：形状PQ(+)50VQ球形1头球形2筒

18、形3长筒形4炮弹形5极矮1IO31叶球：高度QN50MS极矮到矮2矮秦白二号3矮到中4中北京新三号5中到高6高津绿757高到极高8极高太原二青9表A.l(续)性状序号性状观测时期和方法表达状态标准品种代码极小1极小到小2小津绿603小到中4中北京小杂565中到大6叶球：宽度50大秦白二号732QNMS大到极大8极大9白色1浅黄色2*叶球：内叶颜色中等黄色333PQ50橙色4(+)VG紫色5极轻1极轻到轻2轻小杂563轻到中4中北京新三号5中到重6*叶球：重量50重丰抗78734QNMS/MG重到极重8极重935叶球：短缩茎形状PQ(+)50VG扁圆形1近圆形2近椭圆形3锥形4表A.l（续）性状

19、序号性状观测时期和方法表达状态标准品种代码极短1极短到短2短津绿603短到中4中北京新三号536叶球：短缩茎长度QN50lSMG中到长6长北京大拧心7长到极长8极长937叶球：花蕾QL（卜）50VG无1有9极早1极早到早2早北京小杂563早到中438*成熟期QN50MG中北京新三号5中到晚6晚太原二青7晚到极晚8极晚9A. 2大白菜选测性状大白菜选测性状见表A.2。A.2大白菜选测性状表性状序号性状观测时期和方法表达状态标准品种代码39抗性：霜霉病QN(+)23VG高抗1高抗到抗2抗3抗到耐4耐5耐到感6表A.2（续）性状序性状观测时期和方法表达状态标准品种代码39抗性：霜需病QN(十)23V

20、G感7感到高感8高感9高抗1高抗到抗240抗性：病毒病QN(+)24VG抗3抗到耐4耐5耐到感6感7感到高感8高感941抗性：黑斑病QN(+)24VG高抗1高抗到抗2抗3抗到耐4耐5耐到感6感7感到高感8高感9高抗1高抗到抗242抗性：黑腐病QN(+)24VG抗3抗到耐4耐5耐到感6感7感到高感8高感9表A2(续)性状序号性状观测时期和方法表达状态标准品种代码极弱1极弱到弱2弱3弱到中4中543田间耐热性QN(+)42-43MG中到强6强7强到极强8极强9极少1极少到少2少北京小杂50号344外叶：数量ON43MS少到中4中北京小杂61号5中到多6多吉研八号7多到极多8极多945叶球：紧实度Q

21、N50VG松1中2紧3极少1极少到少2少北京小杂50号346叶球：叶片数量QN(+)50MS少到中4中北京小杂61号5中到多6多青研八号7多到极多8极多9表A.2（续）性状序号性状观测时期和方法表达状态标准品种代码极低1极低到低2低青研八号3低到中447叶球：软叶率QN(+)50MS中高抗一号5中到高6高郑白四号7高到极高8极高9极弱1极弱到弱2弱北京新一号3弱到中4中北京新四号548耐贮性QN(十)60MS中到强6强北京新三号7强到极强8极强9极弱1极弱到弱2弱北京小杂61号3弱到中4中京春王5中到强649冬性QN(+)70MG强春冠7强到极强8极强950花瓣：形状PQ82VG近圆形1倒卵形

22、2长倒卵形351花瓣:大小QN82VG小1中2大3表A.2（续）性状序号性状观测时期和方法表达状态标准品种代码52花瓣：颜色PQ82VG白色1浅黄色2中等黄色3深黄色4橙色5附录B（规范性附录）大白菜性状表的解释B. 1大白菜生育阶段表大白菜生育阶段见表B.1。B.1大白菜生育阶段表编号名称描述10发芽期从播种后种子萌动至第1片真叶吐心20幼苗期从第1片真叶展开至第710片真叶展开21一叶一心22二叶一心23三叶一心24八叶一心30莲座期幼苗期结束至外叶全部展开、心叶刚开始出现抱合40结球期从心叶开始抱合至叶球膨大充实41结球初期42结球中期43结球末期50收获期植株适宜收获60贮藏期70现蕾

23、期50%植株现蕾80开花期81开花始期50%植株开始开花82盛花期50%植株侧枝开始开花83末花期大部分植株已谢花90种子收获期种子成熟8. 2涉及多个性状的解释8.2. 1(a):观测最大外叶。B.2.2：观测中肋基部3Cm5cm处。B.3单个性状的解释注：性状分级和图中代码见表A.1。B.3.1性状7外叶：纵切面形状B.3.3性状9外叶：叶缘缺刻外叶：叶缘缺刻，见图B.2。圆齿重齿图B.2外叶：叶缘缺刻3锯齿图B.3外叶：泡状凸起大小B.3.5性状12外叶：叶脉粗细外叶：叶脉粗细，观测外叶正面叶脉,见图B.4。图B.4外叶：叶脉粗细B.3.6性状13植株：生长习性*植株：生长习性，见图B.

24、5。半直立3平展*外叶：形状，见图B.6。近圆形宽倒卵形倒图B.6*外叶：形状长倒卵形s长圆形B.3.9性状19外叶：宽度外叶：宽度，测量外叶最宽处。B.3.10性状20*外叶：中肋颜色*外叶：中肋颜色，观测外叶中肋背面，见图B.7。白色2绿白色浅绿色中等绿色图B.7*外叶：中肋颜色B.3.11性状24外叶：中肋厚度外叶：中肋厚度，测量中肋最厚处。B.3.12性状25*叶球：顶部闭合类型*叶球：顶部闭合类型，见图B.8,包括以下几种类型:1）开放：叶球顶部介于翻心和包心之间，外而数层球叶叶尖端明显不到中轴线，顶视可见多层球叶；2）半开放：球叶叶片两侧和上部稍向内弯曲，叶尖端接近中轴线，顶视可见

25、2层以上球叶；3）闭合：球叶向对侧抱合严密、叶尖端明显超过中轴线，顶视不见内层球叶。开放半开放闭合图B8*叶球：顶部闭合类型B.3.13性状26*仅适用于闭合类型品种：叶球：抱合类型*仅适用于闭合类型品种：叶球：抱合类型，见图B.9,包括以下几种类型：1）拧抱：球叶叶片中肋向一恻旋拧；2）合抱：球叶叶片两侧和上部稍向内弯曲，叶尖端接近或稍超过中轴线;3）登抱：外球叶向内扣抱，远超过中轴线，把内球叶完全掩盖。B.3.15性状28仅适用于闭合类型品种:叶球；上部颜色仅适用于闭合类型品种:叶球：上部颜色，见图B.111白色2绿色3黄色4紫色8.3. 17性状30*叶球：形状*叶球：形状，见图B.13

26、。12345球形头球形筒形长筒形炮弹形图B.13*叶球：形状B. 3.18性状33*叶球：内叶颜色*叶球：内叶颜色，目测叶球纵剖面上部主要颜色，见图B.14。图B.14*叶球：内叶颜色24B.3.19性状35叶球：短缩茎形状叶球：短缩茎形状，目测短缩茎纵剖面形状，见图B.15。扁圆形2近圆形近椭圆形锥形图B.15叶球：短缩茎形状8.3.20 性状36叶球：短缩茎长度叶球：短缩茎长度，将叶球纵剖，测量短缩茎基部到顶点的距离。8.3.21 性状37叶球：花蕾叶球：花蕾，将叶球纵剖，观测中心柱顶部花蕾有无。8.3.22 性状39抗性：霜霉病8.3.22.1 测试材料播于室内8cm营养钵或育苗盘中。育

27、苗土按草炭：田园土1:2的比例配制。每钵播2粒3粒种子。1叶期定苗。保证苗齐、苗壮，整齐一致。每测试材料设3次重竟，每次重夏10株。8.3.22.2 苗期人工接种鉴定：当幼苗长至2片真叶时，用清水配成1X104个mL抱子囊悬液，用滴接法在每个叶片上滴一滴(约20L)霜霉菌悬液。接种后在20C左右黑暗中保湿24h,揭掉保湿物，保持在25C左右、夜间相对湿度在90%以上。到第7天，再在161C20C下保湿16h24h。至第8天调查病情。按式(BJ)计算病情指数。DI=100(BJ)式中：DI病情指数，%;X病级数；n发病株数；N鉴定总株数。8.3.22.3 病情分级标准如下：0级：无侵染症状： 1

28、级：接种叶上有稀疏的褐色斑点，不扩展；一一3级：叶片上有较多的病斑，多数凹陷，叶背无霉；5级：叶片病斑向四处扩展，叶背生少量的霉层； 7级：病斑扩展面积达叶片的1/2以上2/3以下，有较多的霉层; 9级：病斑扩展面积达2/3以上，有大量的霉层。8.3.22.4 性状分级标准见表B.2。表B.2抗霜霉病分级表达状态病情指数代码高抗0.OWO.001高抗到抗10.01-20.002抗20.0130.003抗到耐30.0140.004耐40.0150.005耐到感50.01-60.006感60.0170.007感到高感70.01-80.008高感80.0110098. 3.23性状40抗性：病毒病8

29、.1.1.1 测试材料播于室内8cm营养钵或育苗盘中。育苗土按草炭：田园土1:2的比例配制。田园土需经过高温消毒(12(TC,1h)。每钵播2粒3粒种子，2叶期定苗。应保证苗齐、苗壮，整齐一致。接种后20d观测叶。每测试材料设3次重复，每次重灵10株。8.1.1.2 苗期人工接种鉴定分为以下两步：1)病汁液的准备：取症状明显的病叶加pH=7的0.05mol/L的磷酸缓冲液2倍5倍，研碎，再加入病叶的2倍磷酸缓冲液供使用。或用含0.1%疏基乙醇的磷酸缓冲液，缓冲液与病叶比为20:lo2）接种：当幼苗的第3片真叶充分展开后，在叶上接种。接种时，先在被鉴定材料上喷38IInr48m（300目400目

30、）的金刚砂，取病汁液摩擦接种两个叶片。单株接种后立即用净水冲洗叶面，接种后遮阴24ho隔日再接一回。在25C28C下培养20d后调查病情。按式（B.1）计算病情指数。8.1.1.3 病情分级标准如下：- 0级：无侵染症状；- 0.1级：接种叶出现个别褪绿斑：- 0.5级：接种叶出现少数褪绿斑；一一1级：多数叶片有多数褪绿斑，或少数叶片轻微花叶；一3级：多数叶片至全株轻花叶：一一5级：全株重花叶，部分叶片皱缩，或叶柄局部坏死，少数叶片畸形：7级：全株重花叶，伴有枯斑，部分叶片枯死；或全部叶片皱缩畸形，植株严重矮化;9级：大部分叶片枯死以致整株坏死。B.3.23.4性状分级标准见表B.3。表B.3

31、抗病毒病分级表达状态病情指数代码高抗0.0l10.001高抗到抗10.0120.002抗20.0130.003抗到耐30.0140.004耐40.0150.005耐到感50.01-60.006感60.0170.007感到高感70.0180.008高感80.011009B.3.24性状41抗性：黑斑病8.3.24.1 测试材料播于室内8cm营养钵或育苗盘中。育苗土按草炭：田园1:2的比例配制。每钵播2粒3粒种子。1叶期定苗，保证苗齐、苗壮，整齐一致。每测试材料设3次重复，每次重复10株。8.3.24.2 苗期人工接种鉴定：当第2片真叶充分展开后接种黑斑病菌。将每滴含50个抱子（或1200个抱子n

32、L）左右的抱子悬液，滴在第2片真叶上，在20左右黑暗条件下保湿24h。正常管理3d三自第4天开始每天夜间保湿，白天给以光照。第7天保湿24h后调查病情。按式（B.1）计算病情指数。8.3.24.3 病情分级标准如下：0级：无侵染症状； 1级：接种叶生褐色小点，褪绿斑； 3级：接种叶生褐绿斑，无霉层；5级：接种叶生褐色轮纹斑，有较少霉层，病斑外无明显的坏死区； 7级：接种叶生褐色轮纹斑，斑上有较多的霉层，周围有明显的坏死区;-9级：接种叶病斑连成片，且大面积的枯死，霉层明显。B.3.24.4性状分级标准见表B.4。表B.4抗黑斑病分级表达状态病情指数代码高抗0.01-10.001高抗到抗10.0

33、1-20.002抗20.0130.003抗到耐30.01-40.004耐40.0150.005表B4（缴）表达状态病情指数代码耐到感50.01-60.006感60.0170.007感到高感70.01-80.008高感80.011009B.3.25性状42抗性：黑腐病B.3.25.1测试材料播于室内8cm营养钵或育苗盘中。育苗土按草炭：田园土1:2的比例配制。每钵播2粒3粒种子。2叶期定苗，保证苗齐、苗壮，整齐一致。每测试材料设3次重复，每次重复10株。8.3.25.2 苗期人工接种鉴定：在肉汁豚或PDA上培养供接种用的黑腐病菌，培养温度为27C,培养时间2d。使用前加入无菌水稀释。用比浊法或血球计数法调整细菌浓度，使其为108个/ml/100个/ml。当幼苗长至4片5片真叶时进行接种。接种前将测试材料在保湿箱中保湿一夜，使其叶缘出现水珠。第2天早晨将上述浓度的菌液喷到叶面上。接种后保湿24h,然后打开覆盖，在20C30C的环境下正常管理。接种后3周左右时进行调查。一般每株苗自下往上查5片叶。按如下