苦参素抗病毒和临床应用的若干问题探讨.ppt
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1、苦参素抗病毒和临床应用的若干问题探讨,第二军医大学长征医院缪晓辉2005.9.25,对当前抗HBV药物的评价,干扰素核苷类似药苦参素(我国自主研发)其他:膦甲酸钠、胸腺肽、中医中药,第一部分初步认识苦参素,苦豆子,认识苦参素,苦豆子,认识苦参素,我们的国宝丰富的资源高纯度的产品抗病毒和抗肝纤维化的疗效确 实,认识苦参素,苦参素,即氧化苦参碱,是由中药苦豆子中提取的一种生物碱,苦参素注射液及其胶囊中含有氧化苦参碱98%以上。是我国草药中有效成分被纯化的“三素”(另有黄连素、青蒿素)之一。,认识苦参素,氧化苦参碱(Oxymatrine,OM)的分子量282,分子式为C15H22O2N2,结构式为:
2、,O,N,O,N,认识苦参素,羰基的作用,以芳香族苯环结构为主,氧化后,与苦参碱的区别,苦参素的分子结构给我们的提示,认识苦参素,芳香族苯环的分子结构,进入细胞内的过程以 及入胞后作用机制可能比较复杂,有必要进一步 研究有必要也有可能对该药的抗病毒分子机制进行 进一步研究作用于病毒分子结构的什么部位?有可能通过改变分子结构,比如引入某些化学 基团以期增加水溶性或脂溶性,达到提高进入细 胞内的浓度和肠道吸收利用度(胶囊)的目的,第二部分苦参素的作用机制,作用机制,一、细胞模型实验结果 苦参素能抑制含有HBV全基因的HepG2.2.15细胞分泌HBeAg和HBsAg,对二者的抑制率分别达93%和6
3、3%,并且细胞毒性低。结果表明其抗病毒效应不需要免疫细胞的介入,可能为“直接”作用。,作用机制,如何理解直接效应?直接作用于病毒,杀灭或抑制病毒,与 抗菌药物有何不同?通过受感染细胞发挥作用,不需要免疫 系统参与从上述意义上讲,干扰素通过双重机制 发挥抗病毒作用。干扰素活性测定方法 能够解释这个问题。苦参素直接发挥效应的依据,作用机制,作用机制,作用机制,二、转基因小鼠模型实验结果 我们采用乙型肝炎病毒全基因组转基因小鼠为动物模型,进行了苦参素对乙型肝炎病毒作用的研究。,作用机制,不同剂量氧化苦参碱作用30天后小鼠肝组织内HBeAg的ELISA定量(?)检测结果,作用机制,苦参素治疗前肝脏内H
4、BsAg的免疫组化照片(400),作用机制,苦参素治疗后肝脏内HBsAg的免疫组化照片(400),作用机制,苦参素治疗前肝脏内HBeAg的免疫组化照片(400),作用机制,苦参素治疗后肝脏内HBeAg的免疫组化照片(400),作用机制,三、苦参素对HBV cccDNA的作用 我们实验室于2003年成功建立了HBV cccDNA定量检测技术,并对HepG2.2.15细胞和HBV DNA阳性患者外周血单个核细胞(PBMCs)进行检测。结果发现,HepG2.2.15细胞核内有较高水平的HBV cccDNA,苦参素作用于细胞后可以显著降低其水平,但不能完全清除。另外,无论乙肝患者血清中HBV DNA含
5、量高低,PBMCs中不能检出HBV cccDNA。,作用机制,关于HepG2.2.15能否作为检测cccDNA细胞模型的问题HepG2和 HepG2.2.15细胞转染的细胞,目的基因或基因组一定是在染色体 上成功转入后的目的基因组一定是能够自身复制和 形成功能蛋白,就HBV而言,还应该产生完整的 病毒颗粒(Dane颗粒)病毒颗粒能否产生rcDNA?如果能,rcDNA为什么 不能进入细胞核形成cccDNA?,作用机制,清除细胞核内HBV cccDNA,是评判抗乙肝病毒药物的关键指标。由此引出两个值得思考和探讨的热门话题:1.现有的抗病毒药物,有清除cccDNA的作用吗?有:如何证实?无:“长期应
6、答者”如何解释?2.HBV究竟能否在肝外组织细胞中复制?能:如何解释PBMCs中不含HBV cccDNA的现象?否:如何解释乙肝相关性肾病等肝外组织HBV感 染的事实?如何解释肝移植术后肝炎复发 的现象?,作用机制,结 论 苦参素通过某种机制,发挥细胞的作用,“直接”清除细胞内病毒或显著抑制病毒复制;可以显著降低乙型肝炎病毒转基因小鼠肝脏细胞内乙型肝炎病毒抗原表达。在作用机制上,苦参素对细胞核内HBV cccDNA有一定的清除作用。,作用机制,四、抗肝脏纤维化作用的动物试验 我们研究了氧化苦参碱对大鼠实验性肝损伤及肝纤维化的影响。结果表明:OM不仅可明显降低大鼠血清ALT和TNF-水平,还可以
7、降低IV-C、HA水平及肝内纤维组织含量,在一定范围内增加剂量可明显提高疗效。,作用机制,大鼠血清-C、HA及纤维组织含量变化,组别-C(ng/ml)HA(ng/ml)S-F正常对照组 15.33 6.22 98.67 19.95 0.91 0.64模型组 91.50 25.72 306.00 30.89 12.74 2.98 OM 30mg组 71.83 24.86 236.33 66.87*9.83 2.10*OM 60mg组 24.33 11.48*119.50 32.34*3.79 0.64*:p0.05,*:p0.01,治疗组 vs 模型组*:p0.05,*:p0.01,60 mg组
8、 vs 30 mg组S-F为肝内纤维组织含量(面积密度)各组6只大鼠,作用机制,五、苦参素的其他药理作用机制 苦参素有较好的保护肝细胞、稳定肝细胞膜的作用;显著降低四氯化碳、D-半乳糖胺盐所致小鼠中毒性肝损伤后血清ALT、AST水平,与临床上观察到的其具有降低ALT,AST,TBIL水平一致作用。研究表明其保肝作用与下述机制有关:,作用机制,1.抗肝脏炎症性损伤:苦参素可抑制炎性因子 TNF-、IL-1、IL-6的释放,减少肝组织炎性 细胞浸润,抑制肝组织内炎症活动,改善肝脏 组织学病理损害。2.抗脂质过氧化:苦参素能减少肝组织内丙二醛(MDA)的形成,提高肝组织内SOD、谷光甘肽过 氧化物酶
9、(GST-PX)的含量,从而可防止脂质 过氧化反应对肝细胞膜及亚细胞结构的损伤,尤其是减轻对线粒体的损伤,改善肝功能。,作用机制,3.诱导细胞色素P-450酶的合成:苦参素能提高小 鼠肝微粒体内某些细胞色素P-450含量,这些细 胞色素P-450对类固醇激素等物质以及进入人体 内某些的药物和毒物等具有解毒作用。4.抗肝细胞凋亡:苦参素对脂多糖(LPS)加氨基 半乳糖诱导的小鼠暴发性肝衰竭具有保护作用,研究结果显示苦参素预防组小鼠血清ALT、TNF水平明显低于模型组,肝组织Fas、FasL 表达强度及肝细胞坏死程度明显低于模型组。,作用机制,第三部分苦参素临床应用研究,我们应用苦参素注射液(60
10、0mg,6ml)肌肉注射治疗慢性乙型肝炎64例(CPH 13例,CAH 42例,CAH+LC 9例),同时与采用-干扰素治疗的慢性乙型肝炎52例(CPH 8例,CAH 38例,CAH+LC 6例)作对照。治疗时间为6个月,数据采集是在治疗结束后。证实苦参素有较好的抗病毒作用(第二军医大学学报,1997),应用研究,一、苦参素治疗慢性乙型肝炎,治疗后肝生化指标复常率(近期疗效,ETR),n ALT SB OM 64 40/49(81.6%)*23/34(69%)*IFN-52 28/38(73.7%)*16/25(64.0%)*P0.05*P0.05,应用研究,治疗后HBeAg和HBV DNA阴
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