第十三章食品中农药残留分析.ppt

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1、第十三 章食品中农药残留分析,农药残留的测定,0 概述1 磷化物的测定2 马拉硫磷的测定3 有机氯农药的测定4 有机磷农药的测定5 氨基甲酸酯农药的测定6 拟除虫菊酯农药的测定,0 概述,一、食品中的农药残留途径 1 施用农药后对作物或食品的直接污染；2 空气、水、土壤的污染造成动植物体内含有农药残留，而间接污染食品；3 来自食物链和生物富集作用如：水中农药 浮游生物 水产动物 高浓度农药残留食品；4 运输及贮存中由于和农药混放而造成食品污染。,二、食品中农药残留量美国：19861991年，美国膳食调查结果：4049、DDT等17种农药经常检出，p,p-DDE检出率为16%（1991年为10%

2、）；1992年FDA对监测的313种农药中检出99种，其中4049、甲基毒死蜱、地亚农、毒死蜱占检出农药的81%;水产品、奶及奶制品中有机氯农药检出率较高，水产品中DDT等残留量0.1mg/kg，奶及奶制品中p,p-DDE为0.04mg/kg。从http:/vm.cfsan.fda.gov/1rd/pestadd.htm1网站上可以获得最新报告。,美国目前已经有316种不同的农药（其中的活性成分）建立了作物在收获时的最大允许残留量。其它农药则分别：具有临时的或正在审理中的允许残留量；以前注册已经失效的，没有建立允许残留量的但在其它国家能用于食品产品；在制造农药活性成分的过程中能生成代谢产物、转

3、化产物及有毒杂质的农药。美国已建立了超过8000个作物允许残留量指标。,我国出口食品中农药超标问题,农民滥用、乱用农药现象普遍存在，在蔬菜种植中经常使用剧毒农药，有些地方将当日喷施甲胺磷的蔬菜上市，造成食品蔬菜中毒事件。90年代初，由于菜农违规使用甲胺磷，在供港蔬菜中发生甲胺磷残留量严重超标事件，引发200多人食用后中毒事故，造成震惊港区的毒菜时间。我国出口美国的浓缩苹果汁，由于美方FDA检出甲胺磷残留量超标，而发生退货事故。在蔬菜中还经常分析出对硫磷、甲基对硫磷、倍硫磷、毒死蜱、乐果、氧乐果、敌敌畏和氯氰菊酯在大米中分析出马拉硫磷和异丙威等农药。在花生中分析出丁酰肼等农药。,我国90年代开始

4、重视食品中农药残留。80年代末规定了农药安全使用标准、农药合理使用准则等。1990年国内首次膳食调查研究：12省的食品样品中均检出666、DDT，12种有机磷农药中检出5种有机磷，其中甲胺磷农药检出率最高，膳食中甲胺磷农药总摄入量占有71.3%。1994年北京蔬菜市场抽样81份，41件超标（50.6%），其中：韭菜100%，小白菜80%，油菜50%，其中还检出3911、氧化乐果等蔬菜禁用农药。19941996年，有机磷农药严重超标，DDT、666还可以检出。近年来，有机磷农药残留仍较为严重。,（一）、有机氯农药我国使用DDT、666（BHC）历史达30多年，1983年停用。目前有机氯农药残留量

5、正逐渐降低。工业品中666由四种异构体组成：-666，-666，-666，-666，植物食品中以-666为主；其次为-666，-666，-666动物性食品中以-666为主，其次为-666，-666；水产品中以-666为主。p,p-DDE是各类膳食中DDT的主要形式，在未加工的食物中DDT主要以p,p-DDT、p,p-DDE形式存在。,近年来，杀虫脒在我国曾广泛使用。杀虫脒主要作为杀虫剂和杀螨剂代替DDT和BHC在棉花中大量使用。在蜂蜜中检出杀虫脒残留，美国、日本、德国等对我国出口蜂蜜规定了杀虫脒残留限量：美国要求20g/kg 德国要求10g/kg,（二）有机磷农药 有机磷农药是目前我国广泛使用

6、的农药 有机磷农药残留化学性质不稳定、分解快、残留时间短。污染食品主要表现为在植物性食物中残留，尤其是含有芳香物质的植物，如：水果、蔬菜等作物 蔬菜具有从土壤中吸收农药的能力，根菜类叶菜类果实类 从土壤中吸收量远远低于直接喷洒在作物上的量。,美国FDA 19911992膳食调查结果：马拉硫磷、甲基毒死蜱、地亚农、毒死蜱最常见，有机磷农药残留占检出农药残留的81%。我国1990年左右食品中以甲胺磷最常检出。甲基对硫磷、甲胺磷、辛硫磷曾出现超标较为严重的现象。如湖北（1996）甲胺磷检出率为16.1%，超标率16.1%；辛硫磷检出率47.4%,超标率23.6%叶菜、根菜的有机磷农药残留量相对于果实

7、和花菜类。萝卜：甲胺磷189.0g/kg,辛硫磷554.6 g/kg 大白菜：甲胺磷231.0（平均36.52）,辛硫磷89.9,甲基对硫磷0.83,敌敌畏1.0 甲胺磷全国水平：14.6 g/kg,（三）氨基甲酸酯类农药 氨基甲酸酯类农药由美国加州大学（1940）从研究毒扁豆生物碱中首先发现，具有高效、低毒、低残留的特点，目前已研究开发出1000多种，其中登记使用的有上百种。农业上使用的氨基甲酸酯类农药分为：N-烷基化合物，用作杀虫剂 N-芳香基化合物，用作除虫剂 在植物性食品中可以检出呋喃丹、西维因等,（四）拟除虫菊酯类农药 拟除虫菊酯类农药是近年来发展较快的一种农药，主要有：氰戊菊酯、溴

8、氰菊酯、氯氰菊酯、杀灭菊酯、苄菊酯、甲醚菊酯等。这类农药降解快（如在番茄上氰戊菊酯半衰期为23天），但对多次性采收的蔬菜仍有严重污染的危险性。（五）杀菌剂 多菌灵杀菌剂在蔬菜水果中常用。如出口柑橘的柑橘皮中多菌灵残留量在 0.10.5mg/kg,全果为0.020.1mg/kg,三、农药残留的危害,（一）有机氯农药的危害 随食物摄入人体内的有机氯农药，经过肠道吸收，主要在脂肪含量较高的组织和脏器中蓄积。对人体可产生慢性毒性作用，当人体摄入量达到10mgkg体重时，即可出现中毒症状。对人体的损害主要在肝、肾和神经中枢，它不仅引起肝脏和神经细胞的变性，而且常伴有不同程度的贫血、白细胞增多等病变。人若

9、长期接触可出现体重下降、恶心、头痛、易疲劳等症状。,目前对有机氯是否对人类致癌问题看法不一。动物实验表明有机氯农药对动物有诱发肝癌的作用。近几年来，我国医学科研工作者也在研究人体内有机氯农药积累与肿瘤发病率的相关性，研究结果初步表明二者间并无显著的联系。由于DDT作为明显的化学致癌物，其潜伏期可达3040年以上，因此研究这一总是需要克服观察年代长，影响因素多的困难。FAO/WHO（1986）推荐的ADI值为：-666为0.008 mg/（kg体重天）DDT0.02mg/（kg体重天）,（二）有机磷农药的危害 各种有机磷农药毒性差异较大，可分为剧毒、中毒、低毒三类。剧毒农药：3911、1605、

10、甲基1605、久效磷、磷胺、甲胺磷、异丙磷、三硫磷、氧化乐果、杀虫脒等 中等毒性农药：乐果、杀螟松、乙硫磷、皮蝇磷等 低毒性农药：敌百虫、马拉硫磷、敌敌畏、乙酰甲胺磷、辛硫磷等。,有机磷农药经皮肤、呼吸和胃肠中毒，特别是脂溶性溶液经皮肤吸收更快，对人、畜毒性主要表现为血液中胆碱酯酶受抑，活力下降，使分解乙酰胆碱的能力丧失，从而引起一系列的中毒表现，如出汗、肌肉颤动、心跳加快、瞳孔缩小等，严重的可导致中枢神经系统功能失常.长期摄入有机磷农药可表现出一系列病理变化，如:肝功能下降、血糖升高、白细胞吞噬功能减退等，并具有致畸、致癌、致突变作用。另外，有机磷农药在生物体内可氧化成比原来毒性更大的化合物

11、，如甲拌磷等农药代谢为亚砜、砜型。,有机磷农药对哺乳动物的毒性,FAO/WHO规定的ADI值为：甲胺磷：0.004甲基对硫磷：0.02敌敌畏：0.004马拉硫磷：0.02辛硫磷：0.001,（三）氨基甲酸酯类农药的危害 氨基甲酸酯类农药是一种抑制胆碱酯酶的神经毒物，但氨基甲酸酯类和胆碱酯酶作用不形成氨基甲酰酯。它是一种可逆性抑制剂，水解后可复原成酯酶和氨基甲酸酯，因此它的中毒症状消失快，并且没有迟发性神经毒性。毒性特点：速效性好、残效期短、选择性强 剧毒类：呋喃丹、涕灭威 中毒类：西维因、叶蝉散、速灭威 低毒类：大多数 氨基甲酸酯类农药可使人发生急性中毒和慢性毒害。发生急性中毒可出现流泪、颤动

12、、瞳孔缩小等胆碱酯酶抑制症状。,氨基甲酸酯类杀虫剂进入人体内，在胃中酸性条件下可与食物中的亚硝基化合物的前体物质亚硝酸盐和硝酸盐反应生成强致癌性的亚硝基化合物(NOC)，因此认为氨基甲酸酯类杀虫剂可能具有致畸、致突变、致癌，并推断氨基甲酸酯类杀虫剂本身在环境中也能形成亚硝胺。但目前还没有氨基甲酸酯类农药引起癌症的有关流行病学报告。其慢性毒害有待进一步研究。WHO规定：西维因的ADI为0.01mg 涕灭威的ADI为0.05mg 呋喃丹的ADI为0.01mg 抗芽威的ADI为0.02mg,（四）拟除虫菊酯类农药的危害 拟除虫菊酯类农药在我国已广泛使用，登记品种19个，其中氰戊菊酯产量达1000吨以

13、上。氰酸酯类：氯氰菊酯、溴氰菊酯（二者又称敌杀死）氰戊菊酯（又称速杀死）二氯苯醚菊酯 毒性：与人体细胞色素氧化酶结合，造成组织细胞内窒息 中毒症状：神经系统症状及皮肤刺激症状 对鱼类有很高的蓄积性，有“三致”作用,四、允许量标准,农药残留物是指由于喷施农药存留在环境和农产品、食品、饲料、药材中的农药及其降解代谢产物、杂质，还包括环境背景中存有的污染物或持久性农药的残留物再次在商品中形成的残留。（一）有机氯农药限量（二）有机磷农药限量（三）氨基甲酸酯类农药限量（四）食品中拟除虫菊酯的限量,（一）有机氯农药限量 FAO/WHO 规定原粮中666 0.05 mg/kg；粉状粮0.01 mg/kg,（

14、二）有机磷农药限量,续上表,（三）氨基甲酸酯类农药限量,CAC规定的氨基甲酸酯类农药限量(mg/kg),西维因的允许限量（mg/kg),WHO规定ADI为0.01mg/kg体重,涕灭威的允许限量,WHO规定ADI为0.05mg/kg体重,呋喃丹允许限量,WHO规定ADI为0.01mg/kg体重,（四）食品中拟除虫菊酯的限量,CAC规定的食品中拟除虫菊酯的限量,部分国家制定的限量标准,五、测定方法,由于农药分析的目的各不相同，所以必须采用适合于所要解决问题的具体分析方法。如：特定活性成分残留检测或同一批次产品中任一农药的残留水平。多残留分析方法（MRMs）用来检测和测定系列食品中的多种农药残留，

15、可对多种农药残留量进行评估以确定其是否处于或低于规定的允许残留水平；单一残留分析方法（SRMs）是用于测定单一残留物，而且测定的残留物的主要代谢物和转化产物 半定量和定性方法（筛选法）能够估算样品中某种农药的残留水平。,农药残留定量分析方法的基本步骤：样品制备萃取提纯（分离）柱层析 替代技术（固相萃取、固相微萃取、微波萃取、加速溶剂萃取等）色谱分离检测与定量GC、HPLC、IAs（ELISA）、TLC,第一节 磷化物的测定,一、概述 磷化物包括磷化铝、磷化钙、磷化锌 Zn3P2+3H2SO4 3ZnSO4+2PH3 磷化氢的性质 无色气体，有芥子气味，分子量小、易挥发、扩散性及渗透性强；不稳定

16、，加热易分解。磷化氢的毒性与卫生标准 剧毒气体，主要作用于神经系统，抑制中枢神经，刺激肺部引起肺水肿，并使心脏扩大。,污染：物理吸附、化学吸附 在熏蒸处理时，磷化钙只限用于原粮，磷化锌又是杀鼠剂。在熏蒸处理虫粮过程中，粮食对磷化氢有一定的吸附作用，但经充分通风散气后，粮食中残留量能降低至食品中卫生标准规定以下。GB2715-81规定原粮中磷化物允许量0.05mg/kg(以PH3 计）FAO/WHO规定：原粮0.1mg/kg,粉状粮0.01mg/kg 美国：原粮 0.1mg/kg,；德国：原粮 0.05mg/kg,二、测定方法,定性分析、定量分析 定性分析 1.原理 AlP+H2OAl(OH)3

17、+PH3 PH3+AgNO3 Ag3P(黑色）+HNO3 H2S+AgNO3 Ag2S(黑色）+HNO3 H2S+Pb(CH3COO)2 PbS(黑色）+CH3COOH,2.试剂与仪器试剂：酒石酸 10%硝酸银溶液 10%乙酸铅溶液 10%乙酸镉溶液仪器：锥形瓶（200250ml）双孔软木塞（0.40.5cm）玻璃管（L 5cm）滤纸条（7cm0.30.5cm）,3.操作与结果判断（1）称样置于锥形瓶中 加水加酒石酸 塞好双孔塞水浴加热（4050，暗处）观察。（2）结果判断 a.AgNO3试纸不变色 Pb(CH3COO)2不变色 b.AgNO3试纸变色 Pb(CH3COO)2不变色 c.AgN

18、O3试纸变色 Pb(CH3COO)2变色,磷化物呈阴性,有磷化物，需定量,可能有磷化物和硫化物同时存在，或仅有硫化物存在,重新取样 加水加乙酸镉溶液（使硫化物生产黄色硫化镉沉淀，以消除硫化物干扰）立即塞好塞子 放置10min 加酒石酸 以下操作同前 如硝酸银试纸变黑，乙酸铅试纸不变色，表示有磷化物存在，再定量试验。,磷化物定量分析,1.原理 5PH3+8KMnO4+12H2SO4 5H3PO4+8MnSO4+4K2SO4+12H2O2H3PO4+24(NH4)2MoO4+21H2SO4 2(NH4)3PO4.12MoO3+21(NH4)2SO4+24H2O2(NH4)3PO4.12MoO3+2

19、SnCl2+5H2SO4 2(Mo2O54MoO3)2HPO4+SnCl4+3(NH4)2SO4+Sn(SO4)2+4H2O,2、试剂 磷化物标准溶液 以KH2PO4为标准物，KH2PO4分子量为136，PH3分子量为34。配制标准使用液前需先配标准贮备液，中间液等 标准储备液（0.1mgPH3/ml）:0.0400g KH2PO4（干燥过）100ml容量瓶加水溶解定容。标准使用液（0.01mgPH3/ml）:10ml标准储备液100ml容量瓶加水稀释定容。3、仪器 蒸馏吸收装置、分光光度计,2-CO2发生器，7-水浴，8-反应瓶，9、10、11-气体吸收瓶（高锰酸钾溶液、硫酸溶液）3-洗气瓶

20、（装饱和硝酸汞溶液）4-洗气瓶（装酸性高锰酸钾溶液）5-洗气瓶（装饱和硫酸肼溶液）,试剂作用：饱和硝酸汞溶液：除硫化物干扰酸性高锰酸钾溶液：除还原性气体、P等干扰饱和硫酸肼溶液：除氧化性气体干扰碱性焦性没食子酸溶液：除氧气等氧化性气体,1-洗气瓶（装酸性高锰酸钾溶液）2-洗气瓶（装碱性焦性没食子酸溶液）4-水浴，5-反应瓶，6、7、8-气体吸收瓶,4、操作方法（1）磷化氢产生与吸收 连接蒸馏吸收装置 称样50g 蒸馏吸收 转移至50ml比色管 褪色（2）标准曲线制备及样品测定,饱和亚硫酸钠,A,A,A,A,硫酸用量,SnCl2用量,钼酸铵用量,(nm),A,PH3量（g）,5、计算结果(m1-

21、m0)1000 X=m 1000 式中：X样品中磷化物的含量(以PH3计)，mg/kg m1测定样品中磷化物的含量，g；m0试剂空白中磷化物的含量，g；m 样品质量；g,一、概 述 马拉硫磷 又名4049、马拉松、马拉赛翁，化学名0,0-二甲基-S-(1,2-二乙酯基乙基)二硫代磷酸酯，分子式C10H19O6PS2，结构式：,它是一种有机磷杀虫剂,在粮食储藏中是一种优良的触杀剂，用于拌粮作防护剂使用，也可用于空仓器材消毒。,第二节 马拉硫磷的测定,1.性质 马拉硫磷纯品为无色油状液体，工业品为黄褐色，有轻微不愉快气味，比重1.23(25)，沸点156157；溶解性：难溶于水和脂肪烃，易溶于醇，

22、酮、脂、氯代 烃、芳香烃及植物油中稳定性：在中性和弱酸性介质中(PH57)较稳定，在 PH7时水解相当快，遇铜、铁、铝、铅均能促使其分解。,2.马拉硫磷的毒性 马拉硫磷对人、畜毒性较低，是高效低毒的有机磷杀虫剂，大白鼠口服急性中毒试验，LD5014001500mg/kg体重。马拉硫磷在动物体内代谢速度快，代谢产物毒性也较小。对人体引起中毒主要是抑制体内胆碱脂酶，使人体组织中乙酰胆碱增多，使神经处于过度兴奋状态，最后转入抑制和衰竭。,3.污染 4.卫生标准 我国食品卫生标准规定，原粮中马拉硫磷允许3mg/kg。WHO建议每人每日允许摄入量(ADI)为0.02mg/kg。,二、测定方法(一)铜络合

23、物比色法(最低检出量50ug马拉硫磷)1、原理,2.试剂、仪器马拉硫磷标准储备液：精密称量50ml容量瓶质量滴加约50mg 4049称量以CCl4稀释计算浓度马拉硫磷标准使用液：临用时量取一定体积的马拉硫磷标准储备液，以CCl4稀释至每毫升含1mg 4049分光光度计,3、操作方法(1)提取 称取20.00g样品（粉碎并全部通过20目筛），置于具塞锥形瓶，加40mlCCl4，盖塞、振荡2h、静置、过滤。(2)净化 吸取20ml滤液于分液漏斗中，加0.2mlCS2-CCl4混合液，10ml酸性Na2SO4溶液，振摇提取，静置分层，将CCl4层移入另一分液漏斗中弃去水层。(加入CS2的目的，除去样

24、品中可能存在的Cu2+，此时如存在Cu2+，将促使马拉硫磷分解，并可防止马拉硫磷氧化。加酸性NaSO4溶液的目的，洗去CCl4提取液中杂质。),（3）标准系列制备 吸取0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml马拉硫磷标准使用液(相当0、50、100、150、200、250ug马拉硫磷)，分别置于125ml分液漏斗中，加CCl4至20ml，再各加0.2mlCS2-CCl4混合液。(4)水解 于样液及标液中各加5ml乙醇，加0.4ml 6mol/L NaOH溶液，准确激烈振摇1min，立即加入10ml 45g/lNa2SO4溶液，混匀，加1滴酚酞，用6mol/L HCl中和至酚酞退色。(

25、水解时间应不少于1min或多于2min，否则水解不完全或被氧化均会使回收率降低，并且由于水解产物0，0-二甲基二硫代磷酸酯不稳定，测定时必须迅速，中途不得停顿。),再用1mol/L HCl 调PH至34(用PH试纸测试)。(显色时溶液呈酸性PH34，黄色络合物较稳定)再加0.5ml50g/L FeCl3溶液，振摇，静置分层；弃去CCl4层(加FeCl3目的，用以氧化能使Cu2+还原为Cu+的还原性杂质，因为Cu+能与0,0-二甲基二硫代磷酸酯反应生成无色络合物，它比Cu2+与0，0-二甲基二硫代磷酸酯作用生成的黄色络合物稳定，从而避免结果偏低。水解后0,0-二甲基硫代磷酸酯溶于水层，杂质留在C

26、Cl4层中而被除去)。,如CCl4层带黄色，再用CCl4洗涤水层。水层中准确加入4.0mlCCl4、0.5ml35g/L CuSO4溶液，准确振摇1min，进行络合反应，静置分层后将CCl4层通过脱脂棉滤入2cm比色皿中。(5)以CCl4调节零点，在20min内于波长415nm处测吸光度。绘制标准溶液，比较(铜络合物在CCl4中不稳定，应在20min内完成比色测定)。,4、计算 m 1000 X=mV21000 V1 式中:X样品中马拉硫磷的含量，mg/kg;m 测定用样液中马拉硫磷的质量，ug；m样品质量，kg;V1 样品提取加入CCl4总体积，ml；V2测定用样品CCl4提取液体积，ml。

27、,（二）气相色谱法 此法最低检出量为0.10.3ng，进样量相当于0.01g样品，最低检出浓度范围为0.010.03mg/kg。1、原理 样品中有机磷农药，分离净化后在富氢焰上燃烧，以HPO碎片的形式，放射出波长526nm的特征光，通过滤光片的选择后，由光电倍增光接收，转换成电信号，经微电流放大器放大后被记录下来。样品的峰高或峰面积与标准品的峰高或峰面积相比，进行定量。,2、操作方法(1)提取与净化 稻谷：脱壳，磨粉过20目筛，混匀；小麦、玉米磨粉过20目筛，混匀；称取10.00g置于具塞锥形瓶中，加入0.5g中性氧化铝(小麦、玉米再加0.2g活性炭)及20mlCH2Cl2，振摇0.5h，过滤

28、直接进样。如农药残留量过低，则加30mlCH2Cl2，振摇过滤，量取15ml滤液浓缩并定容至2.0ml。,植物油,分液漏斗,静置1h,振摇1min,上层,下层弃去,分液漏斗,丙酮,硫酸钠溶液,二氯甲烷,水,振摇1min,下层,上层,蒸发皿,二氯甲烷,蒸干,定容,二氯甲烷,脱水、脱油、脱色,无水硫酸钠,中性氧化铝、活性炭,(2)气相色谱测定 色谱条件 色谱柱内装涂以2.5%(m/m)SE30和3%(m/m)QF-1混合固定液的6080目Chromosorb W AW DNCS(W白色硅藻土，AW酸洗，ABW酸和碱洗)；气体流速：载气为氮气80ml/min；空气50ml/min；氢气180ml/m

29、in(N2空气H2比按各仪器型号不同选择各自的最佳条件）温度：进样口220，检测器240，柱温180。,测定 将不同浓度马拉硫磷标准溶液分别注入一定体积(25uL)注入气相色谱仪，测得峰高，绘制标准曲线。同时取样品溶液(25ul)注入气相色谱仪，测得峰高从标准曲线中查出相应的含量。,3、计算 m11000 X=m210001000 式中：X样品中马拉硫磷的含量，mg/kg；m1进样体积中马拉硫磷的质量，ng；m2进样体积（ul）相当于样品质量的质量，g。4、其它（1）乐果，马拉硫磷，对硫磷气相色谱图（2）13种有机磷农药的色谱图,图1,图2,第三节 食品中有机氯农药残留量测定,一、有机氯农药的

30、结构与性质 有机氯农药（简称为OCP）分为两类：DDT类，称为氯化苯及其衍生物，包括DDT、666等；氯化甲撑萘类，如艾氏剂、狄氏剂、异狄氏剂、七氯、氯丹、毒杀芬等。666（简称BHC）性质 白色或淡黄色固体 不溶于水，易溶于脂肪、丙酮、乙醚及环已烷等有机 溶剂 对光、热、空气、强酸 稳定，遇碱分解,DDT（简称二二三）白色或淡黄色固体不溶于水易溶于脂肪、丙酮、四氯化碳苯、氯苯、乙醚等有机试剂对光、酸稳定，对热较稳定遇碱分解,艾氏剂、狄氏剂、异狄氏剂、七氯、氯丹、毒杀芬,二、测定方法（一）气相色谱法（GB5009.19-2003）1原理 样品中666、DDT经有机溶剂（石油醚）提取，提取液经浓

31、硫酸磺化、净化处理液用GC法测定，与标准比较定量。GC法采用电子捕获检测器（ECD）出峰顺序：-666、-666、-666、-666、p,p-DDE、o,p-DDT、p,p-DDD、p,p-DDT2 试剂 标准溶液 固定液,三、操作方法（1）提取粮食：称取样品石油醚提取过滤到分液漏斗定至约100ml蔬菜：称取样品捣碎取匀浆丙酮提取过滤到分液漏斗石油醚提取加硫酸钠溶液分离石油醚层过滤至分液漏斗定至约100ml肉类及动物组织：称取绞碎样品加硫酸钠研磨加石油醚提取浓缩至约100ml,石油醚提取液,硫酸,（2）净化,振摇，分层,石油醚相,硫酸相,分液漏斗,硫酸钠溶液,振摇，分层,石油醚相,水相,经无水

32、硫酸钠过滤,定容或浓缩,（3）测定1 色谱条件 电子捕获检测器（ECD）气化室温度：190（215）色谱柱温度：160（195）检测器温度：165（225）载气流速：60ml/min（90ml/min）色谱柱：固定液1.5%OV-17和2%QF-1 担体白色硅藻土（80100目）34mm2m2 标准曲线制备3 样品测定,（二）气相色谱法（GB/T 1462003）（食品中有机氯和拟除虫菊酯类农药多种残留的测定）1 原理样品中有机氯和拟除虫菊酯农药用有机溶剂提取，经液液分配及层析净化除去干扰物质，用电子捕获检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。2 试剂3 仪器4 样品制备取粮食样品经

33、粮食粉碎机粉碎，过20目筛制成粮食试样。取蔬菜样品擦净，去掉非可食部分后备用。,5 分析步骤（1）提取粮食样品：称取10g粮食试样，置于100mL具塞三角瓶中，加入20mL石油醚提取，于振荡器上振摇0.5h。蔬菜样品：称取20g蔬菜试样，置于组织捣碎杯中，加入30mL丙酮和30mL石油醚，于捣碎机上捣碎2min，捣碎液经抽滤，滤液移入250mL分液漏斗中，加入100mL 2%硫酸钠水溶液，充分摇匀，静置分层，将下层溶液转移到另一250mL分液漏斗中，用20mL2石油醚萃取，合并三次萃取的石油醚层，过无水硫酸钠层，于旋转蒸发仪上浓缩至10mL。,（2）净化层析柱的制备：玻璃层析柱中先加入1cm高

34、无水硫酸钠，再加入5g 5%脱活弗罗里硅土，最后加入1cm高无水硫酸钠，轻轻敲实，用20mL石油醚淋洗净化柱，弃去淋洗液，柱面要留有少量液体。,净化与浓缩：准确吸取样品提取液2mL，加入已淋洗过的净化柱中，用100mL石油醚乙酸乙酯(955)洗脱，收集洗脱液于蒸馏瓶中，于旋转蒸发仪上浓缩近干，用少量石油醚多次溶解残渣于刻度离心管中，最终定容至1.0mL，供气相色谱分析。,洗脱,（3）测定气相色谱参考条件色谱柱：石英弹性毛细管色谱柱，0.25mm(内径)15m，内涂有OV101固定液。气体流速：氮气40mL/min，尾吹气60mL/min，分流比150。温度：柱温自180230（5/min)保持

35、30 min；检测器、进样口温度250。色谱分析：吸取1L试样液注入气相色谱仪，记录色谱峰的保留时间和峰高。再吸取1L混标溶液进样，记录色谱峰的保留时间和峰高。根据组分在色谱上的出峰时间与标准组分比较定性；用外标法与标准组分比较定量。,（三）薄层色谱法1原理 样品中666、DDT经有机溶剂（石油醚）提取，提取液经浓硫酸磺化，净化处理液浓缩后点于薄层板上，经展开后，用硝酸银显色，经紫外线照射后生成黑色斑点，与标准比较定性、定量分析。2试剂、仪器3操作方法提取净化浓缩,薄层板制备点样展开丙酮:石=1+99显色 硝酸银显色剂（硝酸银+苯氧乙醇+过氧化氢）紫外线（254nm)5计算,第四节 食品中有机

36、磷农药残留量测定,一、有机磷农药的结构与性质 有机磷农药是指在组成上含有磷的有机杀虫剂、杀菌剂等。主要类型有：磷酸酯型，如久效磷、磷胺等二硫代磷酸酯型，如马拉硫磷、乐果、甲拌磷、亚胺硫磷等硫酮磷酸酯型，如对硫磷、甲基对硫磷、内吸磷、杀螟松等硫醇磷酸酯型，如氧化乐果、伏地松磷酰胺型，如甲胺磷、乙酰甲胺磷膦酸酯型，如敌百虫、苯脯磷,有机磷农药种类很多，按毒性分为高毒（剧毒）、中毒、低毒三类；溶解性：多数难溶于水，可溶于有机溶剂 水解性：在碱性介质中易水解 氧化性：硫代磷酸酯类在溴、紫外线等作用下其中的S可被O取代。酶抑制活性：可抑制羧酸酯酶、胆碱酯酶的活性,二、测定方法（一）气相色谱法（GB500

37、9.20-2003）1 水果、蔬菜、谷类中有机磷农药的多残留测定方法 本标准规定了水果、蔬菜、谷类中敌敌畏、速灭磷、久效磷、甲拌磷、巴胺磷、二嗪农、乙嘧硫磷、甲基嘧啶硫磷、甲基对硫磷、稻瘟净、水胺硫磷、氧化喹硫磷、稻丰散、甲喹硫磷、克线磷、乙硫磷、乐果、喹硫磷、对硫磷、杀螟硫磷的残留量分析方法。,1.1原理 样品经提取、净化后注入气相色谱仪测定。含有机磷的样品在富氢焰上燃烧，以HPO*碎片的形式，放射出波长526nm的特征光；这种光通过滤光片选择后，由光电倍增管接收，转换成电信号，经微电流放大器放大后被记录下来。样品的峰面积或峰高与标准品的峰面积或峰高进行比较定量。,1.2 试剂、仪器1.3试

38、样的制备取粮食样品经粉碎机粉碎，过20目筛制成粮食试样；取水果、蔬菜样品洗净，晾干，去掉非可食部分后制成待分析试样。1.4 分析步骤1.4.1提取水果、蔬菜 称取50.00g试样，置于300mL烧杯中，加入50mL水和100mL丙酮(提取液总体积为150mL)，用组织捣碎机提取12min。匀浆液经铺有二层滤纸和约10gCelite545的布氏漏斗减压抽滤。从滤液中分取100mL移至500mL分液漏斗中。谷物 称取25.00g试样，置于300mL烧杯中，加入50mL水和100mL丙酮，以下步骤同上。,1.4.2净化向滤液中加入1015g氯化钠使溶液处于饱和状态。猛烈振摇23min，静置10min

39、，使丙酮从水相中盐析出来，水相用50mL二氯甲烷振摇2min，再静置分层。将丙酮与二氯甲烷提取液合并，经装有2030g无水硫酸钠的玻璃漏斗脱水滤入250mL圆底烧瓶中，再以约40mL二氯甲烷分数次洗涤容器和无水硫酸钠。洗涤液也并入烧瓶中，用旋转蒸发器浓缩至约2mL，浓缩液定量转移至525mL容量瓶中，加二氯甲烷定容至刻度。,1.4.3气相色谱测定 色谱参考条件色谱柱:a.玻璃柱2.6m3mm(i.d)，填装涂有 4.5%(m/m)DC2002.5%(m/m)OV17的 ChromosorbW/AW/DMCS(80100目)的担体。b.玻璃柱2.6m3mm(i.d)，填装涂有1.5%(m/m)D

40、COE1的ChromosorbW/AWDMCS(6080目)。气体速度氮气(N2)50mL/min、氢气(H2)100mL/min、空气50mL/min。温度：柱箱240、汽化室260、检测器270。,1.4.4测定吸取25L混合标准液及样品净化液注入色谱仪中，以保留时间定性。以试样的峰高或峰面积与标准比较定量。,2 粮、菜、油中有机磷农药残留量测定方法 本标准规定了粮、菜、油等食品中敌敌畏、乐果、马拉硫磷、对硫磷、甲拌磷、稻瘟净、杀螟硫磷、倍硫磷、虫螨磷的测定方法。原理、试剂、仪器同1分析步骤1 提取与净化蔬菜：将蔬菜切碎混匀。称取10.00g混匀的样品，置于250mL具塞锥形瓶中，加301

41、00g无水硫酸钠(根据蔬菜含水量)脱水,加0.20.8g活性炭(根据蔬菜色素含量)脱色。加70mL二氯甲烷，在振荡器上振摇0.5h，经滤纸过滤。量取35mL滤液，在通风柜中室温下自然挥至近干，用二氯甲烷少量多次研洗残渣，移入10mL(或5mL)具塞刻度试管中，并定容至2.0mL，备用。,稻谷：脱壳、磨粉、过20目筛、混匀。称取10.00g，置于具塞锥形瓶中，加入0.5g中性氧化铝及20mL二氯甲烷，振摇0.5h，过滤，滤液直接进样。如农药残留量过低，则加30mL二氯甲烷，振摇过滤，量取15mL滤液浓缩并定容至2.0mL进样。小麦、玉米：将样品磨碎过20目筛、混匀。称取10.00g置于具塞锥形瓶

42、中，加入0.5g中性氧化铝、0.2g活性炭及20mL二氯甲烷，振摇0.5h，过滤，滤液直接进样。如农药残留量过低，则加30mL二氯甲烷，振摇过滤，量取15mL滤液浓缩，并定容至2mL进样。,植物油,分液漏斗,静置1h,振摇1min,上层,下层弃去,分液漏斗,丙酮,硫酸钠溶液,二氯甲烷,水,振摇1min,下层,上层,蒸发皿,二氯甲烷,蒸干,定容,二氯甲烷,脱水、脱油、脱色,无水硫酸钠,中性氧化铝、活性炭,2 气相色谱测定色谱柱：玻璃柱，内径3mm，长1.52.0m。分离测定敌敌畏、乐果、马拉硫磷和对硫磷的色谱柱。a.内装涂以2.5%(m/m)SE30和3%(m/m)QF混合固定液的6080目Ch

43、romosorb W AW DMCS。b.内装涂以1.5%(m/m)OV7和2%(m/m)QF1混合固定液的6080目Chromosorb W AW DMCS。c.或内装涂以2%(m/m)OV101和2%(m/m)QF混合固定液的6080目Chromosorb W AW DMCS。分离测定甲拌磷、虫螨磷、稻瘟净、倍硫磷和杀螟硫磷的色谱柱。a.内装涂以3%(m/m)PEGA和5%(m/m)QF1混合固定液的6080目ChromosorbWAWDMCS。b.内装涂以2%(m/m)NPGA和3%(m/m)QF1混合固定液的6080目ChromosorbWAWDMCS。,气流速度：载气为氮气80mL/

44、min；空气50mL/min；氢气180mL/min(氮气、空气和氢气之比按各仪器型号不同选择各自的最佳比例条件)。温度：进样口为220；检测器为240；柱温为180，(测定敌敌畏为130),3 测定将混合农药标准使用液25L分别注入气相色谱仪中，可测得不同浓度有机磷标准溶液的峰高。分别绘制有机磷标准曲线。同时取样品溶液25L注入气相色谱仪中，测得的峰高从标准曲线图中查出相应的含量。,3肉类、鱼类中有机磷农药残留量的测定方法 本标准适用于肉类、鱼类中敌敌畏、乐果、马拉硫磷、对硫磷农药的残留分析。敌敌畏、乐果、马拉硫磷、对硫磷最低检出量为0.6，0.3，0.3，0.15ng，当进样量相当于0.0

45、02g时，最低检出浓度分别为0.03，0.015，0.015，0.008mg/kg。原理、试剂、仪器 同前,分析步骤提取净化将有代表性的肉、鱼样品切碎混匀，称取20.00g于250mL具塞锥瓶中，加60mL丙酮，于振荡器上振摇0.5h，经滤纸过滤，取滤液30mL于125mL分液漏斗中，加60mL硫酸钠溶液(20g/L)和30mL二氯甲烷，振摇提取2min后，静置分层，将下层提取液放入另一个125mL分液漏斗中，再用20mL二氯甲烷于丙酮水溶液中同样提取后，合并二次提取液，在二氯甲烷提取液中加1g中性氧化铝(如为鱼肉加5.5g)，轻摇数次，加20g无水硫酸钠。振摇脱水，过滤于蒸发皿中，用20mL

46、二氯甲烷分二次洗涤分液漏斗，倒入蒸发皿中，在55水浴上蒸发浓缩至1mL左右，用丙酮少量多次将残液洗入具塞刻度小试管中，定容至25mL，如溶液含少量水，可在蒸发皿中加少量无水硫酸钠后，再用丙酮洗入具塞刻度小试管中，定容。,色谱条件色谱柱：内径3.2mm，长1.6m玻璃柱，内装涂以OV-17(1.5%m/m)和QF-1(2%m/m)的混合固定液的80100目Chromosorb W A W DMCS。流量：氮气60mL/min；氢气0.7kg/cm2；空气0.5kg/cm2。温度：检测器250，进样口250，柱温220(测定敌敌畏时为190)。如同时测定四种农药可用程序升温。测定将标准使用液或样品

47、液进样13，以保留时间定性；测量峰高，与标准比较进行定量。,（二）气相色谱法【GB/T 5009.1452003】食品中有机磷和氨基甲酸酯类农药多种残留的测定 本标准规定了粮食、蔬菜中敌敌畏、乙酰甲胺磷、甲基内吸磷、甲拌磷、久效磷、乐果、甲基对硫磷、马拉氧磷、毒死蜱、虫螨磷、倍硫磷、马拉硫磷、对硫磷、杀扑磷、克线磷、乙硫磷、速灭威、异丙威、仲丁威、甲萘威等农药残留量的测定方法。1 原理样品中有机磷和氨基甲酸酯农药用有机溶剂提取，再经液液分配、微型柱净化等步骤除去干扰物质，用氮磷检测器(FTD)检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。,2 分析步骤（1）试样的制备取粮食样品以粉碎机粉碎，过2

48、0目筛制成粮食试样。蔬菜擦去表层泥水，取可食部分匀浆制成分析试样。（2）提取蔬菜方法一：称取10g试样于三角瓶中，加入与样品含水量之和为10g的水和20mL丙酮。振荡30min，抽滤，取20mL滤液于分液漏斗中。方法二：称取5g试样(视样品中农药残留量而定)，置于50mL离心管中，加入与样品含水量之和为5g的水和10mL丙酮。置于超声波清洗器中，超声提取10min。在5000r/min离心转速下离心使蔬菜沉降，用移液管吸出上清液10mL至分液漏斗中。,粮食称取20g样品于三角瓶中，加入5g无水硫酸钠和100mL丙酮，振荡提取30min，过滤后取50mL滤液于分液漏斗中。净化 向方法一分液漏斗中

49、分别加入40mL凝结液和1g助滤剂celite545，或方法二的分液漏斗中分别加入20mL凝结液和1g助滤剂celite 545，轻摇后放置5min，经两层滤纸的布氏漏斗抽滤，并用少量凝结液洗涤分液漏斗和布氏漏斗。将滤液转移至分液漏斗中，加入3g氯化钠，依次用50，50，30mL二氯甲烷提取，合并三次二氯甲烷提取液，经无水硫酸钠漏斗过滤至浓缩瓶中，在35水浴的旋转蒸发仪上浓缩至少量，用氮气吹干。,取下浓缩瓶，加入少量正己烷。以少许棉花塞住5mL医用注射器出口，1g硅胶以正己烷湿法装柱，敲实，将浓缩瓶中液体倒入，再以少量正己烷：二氯甲烷(9+1)洗涤浓缩瓶，倒入柱中。依次以4mL正己烷：丙酮(7

50、+3)，4mL乙酸乙酯，8mL丙酮：乙酸乙酯(1+1)，4mL丙酮：甲醇(1+1)洗柱，汇集全部滤液经旋转蒸发仪45水浴浓缩近干，定容至1mL。向粮食提取的分液漏斗中加入50mL5%氯化钠溶液，再以50mL，50mL，30mL二氯甲烷提取三次，合并二氯甲烷层经无水硫酸钠过滤后，在旋转蒸发仪40水浴上浓缩近干，定容至1mL。,测定气相色谱参考条件色谱柱：BP5或OV101 25m0.32mm(内径)石英弹性毛细管柱。气体流速：氮气：50mL/min尾吹气(氮气)：30mL/min氢气：0.5kg/cm2空气：0.3kg/cm2 温度：柱温采用程序升温方式检测器：氮磷检测器(FTD)。色谱分析量取