临床标本检验.ppt

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1、临床标本的细菌学检验,基本要求,认真核对：了解诊断：联系临床：,正确采集和处理标本,无菌操作：对无菌或有菌标本不同处理盛放容器：无菌容器采集时间、部位：送检时间、方法：及时送检、低温或保温保存安全防护：及时检验和报告：,选择合适的培基养和培养方法,血液和骨髓,采血时间与次数：采集血培养都应该在使用在使用抗生素之前进行；对间歇性寒战，应该估计寒战或体温高峰时间。采血部位：肘静脉或肘动脉骨髓采集：增菌培养：培养基中加入SPS,检测方法和报告,普通培养：分别做厌氧和需氧培养阳性表现：均匀浑浊，革兰阴性菌 浑浊有绿色，肺炎链球菌 表面有菌膜有绿色荧光，铜绿假单胞菌 下面沉淀，链球菌 溶血，溶血性链球菌

2、 浑浊有胶胨，葡萄球菌 灰白色菌膜，枯草芽孢杆菌涂片革兰染色镜检，直接药敏、分离培养报告临床阴性结果7天报告,检测方法和报告,特殊培养 脑膜炎奈瑟菌培养：37加5-10%CO2 伤寒或其它沙门菌：接种葡萄糖胆汁肉汤或胆盐肉汤 草绿色链球菌：胰酶酪蛋白大豆肉汤，同时做需要、CO2和厌氧培养 L型细菌：高渗液体培养基，“油煎蛋”菌落 厌氧培养：真菌培养：,临床意义,确诊菌血症和败血症金黄色葡萄球菌见疖、痈、脓肿引起的败血症革兰阴性菌见尿路、胆道、胃肠道引起的败血症草绿色链球菌引起亚急性心内膜炎铜绿、金葡引起烧伤后败血症,尿液的处理,标本采集：一般培养采用清洁中段尿。采样前，用肥皂水或清水清洗外阴，

3、排出尿液前段需丢弃，中段和后段尿液10-20ml盛装于无菌的容器。肾盂尿采集法 膀胱穿刺尿采集法 结核菌涂片或培养用24小时尿取沉淀。,检测方法和报告,直接镜检-离心沉淀涂片革兰染色-淋球菌镜检假丝酵母镜检结核分枝杆菌镜检,检测方法和报告,分离培养-普通培养：-淋球菌培养：-厌氧菌培养：-真菌培养：,检测方法和报告,菌落计数 倾注平皿法：尿液稀释成1：10、1：100、1：1000，取此液1ml放入直径9cm灭菌平皿内，同时加入已熔化并冷至50的培养基与尿混合，待凝固后置35 培养。定量接种环涂抹法：使用 1ul的定量接种环沾满尿液，在分离培养基分离培养。生长的菌落数乘以 1000，等于每毫升

4、尿中的菌数。报告：革兰阴性菌105cfu/ml，革兰阳性菌104cfu/ml有临床意义 阴性报告为“48h培养无菌生长”,患者徐某，男，26岁，因烧伤入住某院烧伤病房等待植皮手术。期间，患者烧伤创面有蓝绿色有甜腥气味的粘稠分泌物渗出，随后患者出现41高热、呼吸急促、血压下降、昏迷。临床诊断为败血症休克，立即给予广谱抗生素抗菌治疗与对症支持治疗，同时采集血标本送检验科微生物室检验并要求做药敏试验。请问，该患者可能为哪种细菌感染？血培养将会出现什么现象？该如何进一步鉴定？,患者周某，男，65岁，结肠癌术后化疗三日后出现高热，常规应用抗生素治疗无效，遂临床采集血标本送检验科微生物室，要求血培养鉴定病

5、原菌及药敏试验。微生物室工作人员血标本经18h培养后，出现均匀混浊，酚红指示剂变色。请问该病人可能是什么细菌感染？如何进一步鉴定？,患者李某，女，57岁，术后留置导尿3d后出现发热（38以上）、尿痛、排尿困难，查体有下腹触痛与肾区叩痛，临床初步判断为肾盂肾炎，病房要求检验科派人协助采集尿液标本送检。请问如何正确采集标本，并如何进行检验？,粪便标本,自然排便法：挑取脓血、黏液的粪便2-3g于无菌的纸盒中，或放置于增菌液中送检直肠肛拭子法：直接送检或放入运送培养基中送检,检测方法,直接镜检：针对特殊细菌，如霍乱弧菌、结核、真菌等-霍乱弧菌：鱼群样排列的革兰阴性菌，动力阳性-葡萄球菌：金葡菌引起的假

6、膜性肠炎-结核分枝杆菌：-艰难梭菌：革兰阳性粗大杆菌，无荚膜、有芽孢-空肠弯曲杆菌：细小、弧形、S形或螺旋形革兰阴性,检测方法,分离培养-沙门菌及志贺菌：增菌培养或直接接种于SS和MAC、CB，3718-24h培养，挑取可疑菌落接种KIA/MIU，进一步做生化和血清凝集试验-霍乱弧菌：碱性蛋白胨水37增菌6h，挑取菌膜接种TCBS平板，37培养16-20h，挑选可疑菌落氧化酶阳性，多价“O”诊断血清凝集试验-大肠杆菌培养：挑取脓血、黏液的粪便接种于MAC或EMB，37培养18-24h，挑取可疑菌落接种KIA/MIU，进一步做生化和血清凝集试验-金黄色葡萄球菌培养：接种于高盐甘露醇琼脂，37培养

7、18-24小时-副溶血弧菌培养：增菌后接种与弧菌选择性培养基与SS培养基。,检测方法,分离培养-小肠耶尔森培养：接种NYE、MAC及SS，22-25及37培养，挑取可疑菌落接种KIA/MIU，进一步做生化鉴定。-空肠弯曲杆菌：接种弯曲菌培养基，43微需氧培养24-72h-艰难梭菌培养：取黄色伪膜状粪便，接种于CCFA平板，37厌氧培养48h，挑取可疑菌落检测毒素,临床意义,检测引起腹泻、食物中毒的肠道菌致病菌检测肠道正常菌群，预防菌群失调,患者杨某，女，24岁，2日前到某海滨城市旅游，并在街边小店食入大量海鲜。回家后出现腹痛、腹泻、呕吐、低热到医院就诊。临床采集粪便标本送检验科微生物室。标本性

8、状为糊状，常规接种SS平板与CB平板，培养18h后发现SS平板上除乳糖阳性菌落外有扁平、无色透明、蜡滴状小菌落生长，CB平板上未见乳糖阴性菌落生长。请问患者可能是何种细菌感染？如何进一步鉴定？,患者张某，男，24岁，因餐后2h出现恶性、呕吐、发热伴腹泻入院治疗，临床初步判断为食物中毒。采集粪便标本后送检验科微生物室检查。粪便性状为糊状。微生物室工作人员收到标本后直接接种于SS与MAC培养基分离培养，24小时后仅见乳糖阳性菌落生长，请问是何原因？该如何进一步进行检验？,某位病人因肺炎住院，经抗生素治疗7天后出现腹痛、腹泻、发热等症状。病房留粪便标本送检验科微生物室检查。观察粪便性状呈粘液血便，带

9、有条状伪膜。微生物室工作人员收到标本后直接接种于SS与MAC培养基分离培养，24小时后仅见乳糖阳性菌落生长，请问是何原因？该如何进一步进行检验？,呼吸道标本,标本采集：咽拭子采集法：自然咯痰法：小儿取痰法：气管镜采集法：胃内采痰法：气管穿刺法：,检测方法,显微镜检查 直接镜检：观察痰液质量 染色镜检：观察细菌或分枝杆菌,分离培养,培养前处理：均质化：净化：普通培养：接种于BA，10%CO237培养18-24小时，挑取可疑菌落涂片、染色，进一步做生化鉴定。结核杆菌培养：,分离培养,厌氧菌培养：接种两个BA，同时做厌氧与需氧培养真菌培养：接种SA，37或22培养48小时白喉棒状杆菌：接种亚碲酸盐培

10、养基上，37培养48小时，典型菌落做生化、毒力试验百日咳鲍特菌：接种BG培养基，37培养2-5天，挑取可疑菌落涂片、血清学试验,临床意义,呼吸道标本有正常菌群用于检测呼吸系统，鼻咽部的感染。与临床联系，找到病原菌。,患者王某，男，63岁，入院后经气管插管手术48h后出现发热、咳嗽、咯痰，X线检查显示有较新炎症病灶，初步判断为肺部感染。取病人痰液标本送检验科微生物室检验。病人痰液呈砖红色似果酱样，粘稠。请问该病人可能是何种病原菌感染？将如何鉴定？,某医院检验科微生物室收到一痰液标本，色黄、粘稠。该检验科工作人员收到标本登记后，将其用40g/L NaOH消化处理后，进行抗酸染色，镜检未见抗酸阳性杆

11、菌，遂发出初步报告：“标本经抗酸后未见结核分枝杆菌”。请问该工作人员的做法是否存在问题？如果是你将如何进行检验？,脑脊液,标本采集 医师以最严格的无菌技术做腰椎穿刺。气温较低时，应保温送检或床边接种后，立即孵育,检验方法,显微镜检查：-脑脊液外观：结核性膜炎常为毛玻璃样。其它细菌引起化脓性脑膜炎，脑脊液都明显浑浊。-涂片镜检：混浊或脓样脑脊液可直接涂片,革兰染色，镜检。无色透明的脑脊液,应以3000r/min离心10-15分钟,取沉淀物涂片,革兰染色镜检，根据染色反应及形态特征，可初步提出感染细菌的种类。,检测方法,显微镜检查：革兰阴性双球菌 革兰阳性双球菌 革兰阴性小杆菌 革兰阳性小杆菌,分

12、离培养,用接种环挑取混浊脑脊液或离心沉淀物，分别接种于BA或CA平皿上，置355%CO2环境中培养18-24小时，检视有无细菌生长。根据菌落特点及染色后镜检的特征，初步判断细菌种类，并进一步做生化鉴定及血清学检查加以鉴定，并作出报告。,临床意义,细菌性脑膜炎的病原学诊断鉴别诊断病毒性脑膜炎治疗疗效评估,脓液及创伤分泌物,标本采集 封闭性脓肿：注射器抽取 开放性脓肿：烧伤创面：,检验方法,涂片：革兰染色镜检 放线菌挑取硫磺颗粒镜检,检验方法,分离培养-普通细菌培养：分别接种于BA或EMB平皿上，置37培养18-24小时，检视有无细菌生长。根据菌落特点及染色镜检特征，初步判断细菌种类，并进一步做生

13、化鉴定-厌氧培养：接种BA，或增菌后8020分钟加热后移种BA，37培养18-24小时，挑取可疑菌落染色镜检，并进一步做生化试验、动物试验。,临床意义,检测细菌性创伤感染检测气性坏疽检测烧伤的创面感染,患者黄某，男，48岁，为北方某林区管理员，在一次例行林区巡视时发现有大量老鼠死亡，回家2日后出现发热、头痛、淋巴结肿大伴疼痛，立即到当地县城医院就诊，后转送市中心医院ICU隔离病房。对患者淋巴结穿刺液涂片染色镜检，查见革兰阴性两端浓染的短小杆菌。请问该患者可能为何种细菌感染？如何进一步进行检验？,患者赵某，女，63岁，患有糖尿病，晚期伴毛细血管病变。一日因足部不慎被玻璃划伤到社区医院进行了常规伤

14、口处理，但伤口经久不愈，并出现化脓性感染。遂到社区医院复诊，医生进行了伤口清洗处理，并给予口服抗生素治疗。两周后伤口仍不愈合，并出现发黑、发臭，有黑色脓血渗出，又到某三级医院治疗。临床采集了伤口附近坏死组织，并送检验科微生物室检验，请判断可能是由何种细菌感染，并说明该如何进行检验。,生殖道标本,标本采集 医师采集，女性采集尿道口、阴道、子宫颈或直肠的（怀疑淋球菌感染）男性采集尿道口分泌物及前列腺等分泌物标本。用棉花拭子采集标本，收集于无菌试管内送检。,检验方法,显微镜检查 一般细菌及淋病奈瑟氏菌涂片检查：制成涂片，干后进行革兰氏染色，镜检发现有革兰氏阳性或阴性细菌，即可根据形态做出报告。梅毒螺

15、旋体做暗视野或镀银染色检查 假丝酵母：,检验方法,分离培养 一般细菌及淋病奈瑟氏菌培养：一般情况下可用BA，35孵育。若培养淋病奈瑟氏菌则应增加1个CA，置510%CO2环境孵育。厌氧培养 支原体培养：,临床意义,诊断泌尿生殖系统炎症性病的诊断,眼、耳、口腔标本,标本采集-采取标本时,耳,鼻,咽拭子会被皮肤或粘膜上正常菌群污染,采取和分离时应注意。-采取眼分泌物时,应先用无菌生理盐水冲洗眼部,然后用棉拭子拭干,再以无菌棉拭子采集。-沙眼衣原体用无菌小刀刮取穹隆部或眼结膜上皮细胞。,检验方法,显微镜检查 一般细菌及淋病奈瑟氏菌涂片检查：制成涂片，干后进行革兰氏染色，镜检发现有革兰氏阴性双球菌。沙眼衣原体：真菌,检验方法,普通培养真菌培养其它,临床意义,诊断细菌性眼炎、结膜炎、泪囊炎、角膜炎新生儿眼炎,谢谢,