【教学课件】第18章立克次体.ppt

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1、第18章 立克次体,立克次体是与节肢动物有密切关系的严格细胞内寄生的原核细胞型微生物 第一个被发现的立克次体病是斑疹伤寒。为了纪念因研究斑疹伤寒被感染而牺牲的年仅39岁的立克次医师，将这类微生物统称为立克次体,立克次体具有下列共同征 用光学显微镜可以见到，大小介于病毒和细菌之间；都以节肢动物为媒介，引起人类发热出疹性疾病；专性细胞内寄生，以二分裂方式增殖 于宿主细胞浆内增殖；有多种形态，主要为球杆状 大多是人畜共患病的病原体；对抗生素敏感,立克次体病多为自然疫源性疾病，呈世界性或地方性流行。人类多因节支动物吸血时而受到感染。历史上历次大规模战争都有斑疹伤寒大流行，死亡数以百万计。我国发现的立克

2、次体病主要有 斑疹伤寒、Q热和恙虫病等,一.生物学性状（一）形态与染色m，呈多形性，在不同的发育阶段和不同的宿主内可出现球形、哑铃形、长杆状或丝状等不同形态。常用Giemsa或马氏染色法染色，前者可将立克次体染成紫色或蓝色，后者将立克次体染成红色。普氏立克次体常散在于细胞浆中、恙虫病立克次体多在核旁成堆排列；而斑点热立克次体则在胞浆或核内均可见到,(二)培养 立克次体为专性细胞内寄生，只在活细胞内增殖。繁殖一代需要6-10h常用的培养方法有：鸡胚卵黄囊内接种 组织细胞培养：鸡胚成纤维细胞、L929细 胞、Vero单层细胞 动物接种：常采用豚鼠、小鼠腹腔接种 是最常用的方法,(三)抵抗力 除贝纳

3、柯克斯体外，对热、消毒剂抵抗力较弱。一般在56数分钟内即可被灭活，在0.5%石碳酸、0.5%来苏及75%酒精中数分钟即可杀死。对氯霉素和四环素等抗生素敏感，对磺胺类药物不敏感。对低温及干燥的抵抗较强，20或冷冻干燥可保存半年以上，在干燥虱粪中能保留传染性一年半以上,(四)抗原构造 群特异的可溶性抗原：为脂多糖 种特异的外膜抗原：与外膜蛋白有关 斑疹伤寒等立克次体还有与变形杆菌某些菌株（OX2、OX2、OX19）有共同的耐热多糖类抗原。因而可利用这些变形杆菌菌株代替立克次体抗原，进行定量凝集反应，以检测病人 血清中有无相应的抗体及其含量。此种交叉凝集反应称为外-斐反应。供立克次体病的辅助诊断,二

4、 致病性和免疫性(一)传播方式 人是普氏立克次体的唯一宿主，经虱在人群间传播。斑点热立克次体在蜱唾液腺中增殖，普氏立克次体在虱、蚤的肠上皮细胞中增殖。故以蜱为媒介的立克次体是于蜱叮咬处直接侵入人体；以虱、蚤为媒介的，是虱、蚤于其叮咬处排出含有大量立克次体的粪便，经伤口侵入人体。此外，偶有经呼吸道或眼结膜感染者,（二)致病机理 致病物质主要是内毒素和磷脂酶A 立克次体的内毒素是LPS，引起发烧、损害血管内皮细胞，致微循环障碍和中毒性休克、出现DIC等 磷脂酶A能溶解宿主细胞膜或细胞内吞吞噬体膜，有利于立克次体穿入宿主细胞膜并在其生长繁殖 立克次体表面结构有利于粘附到宿主细胞表面和抗吞噬作用,人被

5、感染后，经5-21d潜伏期，骤然发病，表现有高热(达39-40)、头痛、肌肉痛等，4-5d后出现皮疹，先躯干、后扩展至四肢，有的伴有神经系统、心血管系统的症状和其他实质器官的损害。病后可获得持久免疫，与地方性斑疹伤寒有交叉免疫,致病过程：立克次体局部淋巴组织或血管内皮细胞增殖，引起第一次立克次体血症，经血流扩散到全身血管内皮细胞增殖后，大量立克次体入血引起第二次立克次体血症，内毒素释放入血，引起一系列症状此外，还伴有全身实质性脏器的血管周围广泛性病变，常见于皮肤、心、肺和脑,所致疾病立克次体所引起的疾病及特点疾 病 病 原 体 媒介 主要临床表现斑疹伤寒 普氏立克次体 人虱 发烧、头痛、皮疹恙

6、虫病 立克次体恙虫病 恙螨 发烧、头痛、皮疹 溃疡、焦痂淋巴结大猫挝热 汉赛巴通体-脓泡、发烧、厌 食、肌痛、脾肿大 Q热 Q热立克次体 蜱 发烧、头痛、腰痛 心内膜炎,（四)免疫性 立克次体是严格细胞内寄生的病原体，细胞免疫为主，体液免疫为辅机体产生群和种特异性抗体，有促进巨噬细胞的吞噬及中和毒性物质的作用。细胞免疫产生的细胞因子，有激活、增强巨噬细胞杀灭细胞内立克次体的作用，病后免疫力较强,三 诊断与防治（一）微生物学检查法 1 标本 血液、血块或组织悬液 2 分离鉴定 取血液、血块或组织悬液接种动物腹腔。恙虫病用小鼠，斑疹伤寒用雄性豚鼠。接种后观察发病情况。如豚鼠体温上升或阴囊红肿，表明

7、可能有立克次体感染。再剖取睾丸鞘膜、脑或脾作涂片，染色检查，或用免疫荧光技术进一步鉴定,3 血清学诊断 非特异性外斐反应是诊断立克次体和东方次体常用的方法，一般效价在1160 以上，或在病程中效价增长时有诊断意义。但需排除变形杆菌感染的可能性 此外，如有条件可开展免疫荧光技术和ELISA法除能检测抗体外，尚可检测立克次体抗原。,第二节 主要立克次体,一 普氏立克次体 是流行性斑疹伤寒的病原体 通过人虱为媒介在人与人之间传播，故又称虱型斑疹伤寒。未发现有动物宿主 常于冬春季节流行。虱子咬人后，立克次体进入虱肠管上皮细胞内繁殖叮咬健康人时，立克次体随粪便排泄于皮肤上，可从搔抓的皮肤损伤处侵入机体,

8、二 地方性斑疹伤寒 由斑疹伤寒立克次体引起。鼠是斑疹伤寒立克次体天然贮存宿主，借鼠蚤或鼠虱在鼠间传播。鼠蚤可把立克次体传给人而引起人的感染，故也称鼠型斑疹伤寒。若人群中有人虱寄生，也可再通过人虱在人群中传播。地方性斑疹伤寒病情较经，发病缓慢，皮疹持续时间短，很少侵害中枢神经系统。病后可获得持久免疫，并与流行性斑疹伤寒有交叉免疫。,三.恙虫病 由恙虫病东方次体引起。恙虫病东方次体以前称恙虫病立克次体，东方次体天然寄生于恙螨体内，并可经卵传代。恙螨的生活史中幼虫需吸一次人或动物的淋巴液或组织液，才能发育成稚虫。因此恙虫感染东方次体之后，往往在下一代幼虫才有传染性。恙螨生活于湿度较大的丛林边缘和河流

9、沿岸杂草丛生的地方。人若进入带有东方次体恙螨的孳生地，就可能受感染，所以恙虫病亦称为丛林热,恙虫病东方次体从叮咬处侵入人体，随血流扩散并在血管内皮细胞及单核吞噬细胞中增殖。经10-14d潜伏期，突然高热，被叮咬处由发红丘疹水疱最后溃疡，周围红晕，上盖有黑色痂皮，称为焦痂，是恙虫病特征之一。焦痂附近的淋巴结肿大，亦可出现发烧、皮疹。治疗如拖延可出现肺炎、脑炎等症状，甚至出现DIC而死亡。病死率随毒株不同而有差异,第19章 衣原体,衣原体 是一类能通过细菌滤器、有独特发育周期、专性细胞内寄生的原核细胞型微生物，过去曾被认为是大型病毒 现归属于广义细菌中的一类微生物,衣原体共同特征：G圆形或卵圆形

10、具有类似于G细菌的细胞壁，组成与G相似 含有DNA和RNA两种类型的核酸；含有核糖体和较复杂的酶类 有独特的发育周期，以二分裂方式进行繁殖 对多种抗生素敏感,衣原体的分类 根据衣原体的抗原结构和DNA同源性的特点，将衣原体分四个种，即沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体和肺炎衣原体和兽衣原体 沙眼衣原体又可分为3个亚种，即沙眼生物变种，性病淋巴肉芽肿亚种及鼠亚种,一 生物学性状（一）发育周期与形态染色 衣原体有独特的发育周期，在普通光学显微镜下可观察到两种形态，小而致密的为原体；大而疏松的为始体 原体m，电镜下有致密的核，有细胞壁，是发育成熟的衣原体。原体存在于细胞外，具有很强的感染性。它吸附于易感细胞表

11、面，通过吞噬作用进入细胞内，胞膜在原体周围形成空泡。原体在空泡中逐渐增大、发育成始体,始体m，无致密核质，而有纤细网状结构，故始体也称为网状体。始体在细胞空泡内以二分裂方式繁殖并形成众多的子代原体，直到整个空泡充满原体，形成包涵体。成熟的原体从宿主细胞释放出来，再感染新的宿主细胞。始体是衣原体生活周期中的繁殖型,*发育周期 从原体进入宿主细胞，到有新原体从得宿主细胞释放出来的过程称为一个发育周期 一个发育周期大约24-48h*染色性 用Macchiavello或Giemsa法染色，原体为红色或紫色，始体染成深蓝色,原体与始体的比较 形态 大小 核 细胞壁 感染性 位置 G M原体 球 0.2-

12、0.4+细胞外 紫 红始体 球 0.5-1.0 细胞内 红 红*大小单位mG：Giemsa 染色 M：Macchiavello染色,（二）培养 大多数衣原体用鸡胚卵黄囊及各种传代细胞均可培养 一般培养48-72h后取卵黄囊膜或细胞可查到包涵体及原体和始体颗粒 此外，某些衣原体可使小鼠感染。例如，将鹦鹉热衣原体接种于小鼠腹腔、沙眼衣原体接种于小鼠脑内都可使其感染,（三）抗原构造 支原体抗原可分属、种型特异性抗原 1 属特异性抗原 位于细胞壁，是脂多糖为各种衣原体所共有。可用CF试验 2 种特异抗原 主要成分位于外膜蛋白上，用CF试验和中和试验来鉴别不同衣原体种 3 型特异抗原 根据外膜蛋白抗原不

13、同又将每种衣原体分成不同血清型或生物型,（四）抵抗力 衣原体对热敏感，6010min或3748h就能将其灭活 耐冷，50可保存数年 0.5%石炭酸24h可将其杀死 75%乙醇杀灭力很强，半分钟即有效 对利福平、四环素、红霉素和磺胺均敏感,二 致病性和免疫性（一）致病机理 衣原体有一种与内毒素相似的致病物质。衣原体入侵后在宿主细胞中大量繁殖，抑制细胞代谢，致使细胞溶解；衣原体尚可引起超敏反应与形成肉芽肿,（二）免疫性 衣原体感染后，能诱导机体产生细胞免疫和体液免疫。但这些免疫应答的保护性不强，因此常常造成持续、隐性和反复感染 细胞免疫和体液免疫也可造成免疫病理损伤。有些疾病如LGV和鹦鹉热等可出

14、现迟发型超敏反应,第二节 主要致病性衣原体 一 沙眼衣原体 沙眼衣原体有三个亚种：沙眼生物亚种，有18个血清型 性病淋巴肉芽肿亚种，有4个血清型 鼠亚种，一个血清型,（一）沙眼亚种 1 生物学性状 球形或卵圆形，原体中央有致密的核质，Giemsa染色呈紫色 始体核质分散，Giemsa染色呈兰色或暗紫色。沙眼衣原体包涵体因含有糖原，用碘染色法染成褐色 我国学者汤飞凡等1956年用鸡胚接种法在世界上首次分离出沙眼衣原体,（二）致病性和免疫性 沙眼亚种主要有下列几种引起的人类疾病 1.沙眼 是慢性传染性角结膜炎。由沙眼衣原体的A、B、Ba、C血清型引起。在发展中国家高度流行。居致盲病因的第一位 衣原

15、体主要经眼-眼或眼-手-眼直接或间接途径传播，,沙眼的发病过程及临床表现：感染后便在结膜上皮细胞中增殖，在胞浆中形包涵体。引起局部炎症 感染后经5-7d潜伏期，开始出现流泪、粘液脓性分泌物、结膜充血及滤泡增生，1个月后移行为慢性炎症，表现为滤泡增生、乳头肥大、血管翳及瘢痕形成等 严重者并发睑内翻、倒睫等导致角膜损伤，造成失明。,2.包涵体结膜炎 由沙眼衣原体D-K血清型引起。包涵体结膜炎发生在新生儿，也可发生在成人。新生儿是出生时通过产道被感染，多发病于产后5-12d，引起急性化脓性结膜炎(也称脓漏眼)，一般不侵犯角膜，能自愈 成人感染可因性接触或经手至眼，可因游泳池水污染而感染。病原体主要侵

16、犯下眼睑，急性症状有滤泡和大量渗出物，但不出现角膜血管翳，亦无结膜瘢痕形成。一般数日至数月痊愈，无后遗症,3.泌尿生殖道感染 是由沙眼衣原体D-K血清型引起的性传播疾病（STD)男性感染主要是非淋菌性尿道炎(NGU)，不经治疗虽可缓解，但多数转为慢性，呈周期性加重，常合并副睾炎、直肠炎等 在女性引起NGU、宫颈炎、盆腔炎等。患者常继发不育 婴儿可由于产道感染而发生肺炎。,免疫性 衣原体感染后，能诱导机体产生细胞免疫和体液免疫。但这些免疫应答的保护性不强，因此常常造成持续、隐性和反复感染 细胞免疫和体液免疫也可造成免疫病理损伤。有些疾病如LGV和鹦鹉热等可出现迟发型超敏反应,(三）微生物学检查法

17、 多数衣原体引起的疾病一般根据临床症状即可确诊，早期或轻型感染者不易确诊时，可进行微生物学检查以辅助诊断 1.直接涂片镜检 根据疾病不同，可取痰或呼吸道粘膜、眼、尿道、宫颈等刮取物或分泌物作涂片，进行Giemsa染色，沙眼还要做Lugol碘液染色，检查包涵体,2.分离衣原体 检查沙眼衣原体取眼、尿道、子宫颈管分泌物；检查鹦鹉热衣原体取痰、血液，尸解取肺组织制成悬液，用链霉素等处理后，接种小鼠腹腔、鸡胚卵黄囊或培养细胞分离衣原体 3.检查核酸 用DNA探针（如PCR）检查标本中衣原体核酸，诊断衣原体感染,（二）性病淋巴肉芽肿亚种 生物学性状似沙眼衣原体，主要引起性病淋巴肉芽肿 性病淋巴肉芽肿(L

18、GV)是STD之一，由沙眼衣原体L1-L3血清型引起 男性侵犯腹股沟淋巴结，引起化脓性淋巴结炎和慢性淋巴肉芽肿，常形成瘘管 女性可侵犯会阴、直肠及盆腔的淋巴结，导致会阴-肛门-直肠瘘及狭窄 LGV也可引起伴有耳前、颌下及颈部淋巴结肿大的结膜炎,衣原体感染的防治原则 预防衣原体感染，特别是沙眼，主要是改善卫生状况和普及卫生知识 生殖道衣原体感染的预防原则同其他STD。广泛开展性病知识的宣传，提倡健康的性行为 积极治疗病人和带菌者。衣原体感染的治疗一般用利福平、强力霉素等,二 肺炎衣原体 肺炎衣原体是衣原体属中的一个新种，只有一个血清型 肺炎衣原体寄生于人类，引起的疾病只限于人群间传播 主要引起青

19、少年急性呼吸道感染，可引起肺炎、支气管炎、咽炎和鼻窦炎等。也可能是冠心病发病的一个重要的因素，但还需进一步研究 肺炎衣原体感染可用血清学检查和核酸检测进行诊断,第二十章 螺旋体,螺旋体是一类细长、柔软、螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物其基本结构与细菌相似例如有细胞壁和质，以二分裂方式繁殖、对抗生敏感等，所以分类学划归为广义的细菌范畴根据螺旋的数目规则程度及螺旋间距等将螺旋体目分个科、七个属对人致病的主要有密螺旋体属、疏螺旋体属和钩端螺旋体属,第一节 密螺旋体属 密螺旋体属 螺旋体有致病性与非致病性两类。其中对人有致病性的主要有苍白螺旋体和品他螺旋体 两个种。苍白螺旋体又分三个亚种：苍白亚种、

20、地方亚种和极细亚种,一、生物学性状 1.形态与染色 梅毒螺旋体细长两端尖直，有8-14个致密而规则的螺旋，运动活泼 一般染色不易着色，用Giemsa法染成红色，通过Fontana 镀银染色法染成棕褐色。常用暗视野显微镜观察其形态和运动,2.培养 在家兔睾丸或眼前房内接种可获得传代有毒力的 Nichol株；若将其转种于含有多种氨基酸的兔睾丸组织碎片中，在厌氧条件下培养，则失去其致病力，该菌株称为Reiter株。Nichols株和Reiter株被广泛用作多种梅毒血清诊断的抗原。1981年Fieldsteel等采用棉尾兔单层上皮细胞培养获得成功，但尚未实际应用。估计其分裂一代约需30h,梅毒螺旋体形

21、态1000,暗视显微镜下观察,镀银染色法染色,3.抵抗力 梅毒螺旋体抵抗力极弱。对湿热和干燥特别敏感，在体外迅速死亡。血液中4放置1d仍具活性，但3d可失去感染力。因此输血库4保存3d以上的血液无感染梅毒的危险。梅素螺旋体于78保存一年仍有感染力。对砷、铋、汞制剂和青霉素、红霉素、庆大霉素等敏感,二、致病性与免疫性 1.致病因素 梅毒螺旋体不产生内毒素和外毒素，下列因素与致病性有关（1）降低免疫因素的物质 梅毒螺旋体表面的粘多糖和唾酸可阻止补体的激活，干扰补体的杀菌作用（2）粘附性 梅毒螺旋体能产生与宿主细胞粘附的外膜蛋；产生透明质酸酶有利于螺旋体扩散至各种组织和血管,（3）免疫病理损伤 例如

22、在二期梅毒患者血液中常检出免疫复合物和在三期梅毒可出现树胶肿。这提示梅毒的某些损伤与机体的体液和细胞免疫应答有关。,2.所致疾病 梅毒螺旋体引起梅毒。人是梅毒的唯一传染源。主要是通过性接触传染，也能通过母体胎盘传给胎儿。梅毒的病程可分为3期 第一期 螺旋体经皮肤、粘膜侵入后3w左右局部出现无痛性硬性下疳。硬疳多见于外生殖器，亦可见于直肠、肛门或口腔。溃疡渗出物中有大量螺旋体存在，此时传染性极强。约1个月后硬下疳常自然愈合。但进入血液中的梅毒螺旋体经2-3个月无症状的潜伏期后进入第二期,第三期 又称晚期梅毒。第二期梅毒后5年或更长时间出现皮肤粘膜溃疡性坏死病灶，并侵犯内脏器官或组织出现肉芽肿样病

23、变。严重者经10-15年后，可引起心血管系统与中枢神经系统损害，导致主动脉炎、主动脉瘤、主动脉瓣闭锁不全、脊髓痨和全身麻痹等。此期病灶中不易检测到梅毒螺旋体，传染性小，但病程长，破坏性大，可危及生命,先天性梅毒 是梅毒螺旋体从母体通过胎盘进入胎儿血流，并扩散至肝、脾、肾上腺等脏器中大量繁殖，引起胎儿全身感染，导致流产、早产和死胎；或出生后表现有皮肤病变、锯齿形牙齿、间质性角膜炎、先天性耳聋等特有症状 输血后梅毒 输入含有梅毒螺旋体的血液，可引起发热、发疹等第二期梅毒的症状。为预防万,3.免疫性 梅毒螺旋体感染后引起传染免疫，即当机体内有螺旋体感染时才有免疫力。主要是细胞免疫，但抗体也有一定的作

24、用 这种免疫不完全，多数病人不能完全清除体内螺旋体，常转为潜伏状态，进而发展成二、三期梅毒，反应素抗体无保护作用，仅供血清学诊断用,4.微生物学检查方法（1）检查螺旋体 取患者硬性下疳、梅毒疹渗出物或局部淋巴结抽出液。用暗视野显微镜观察运动活泼的梅毒螺旋体；亦可用直接免疫荧光或ELISA法检查。组织切片标本可镀银染色后镜检。,(2)血清学检查 有特异性与非特异性两类试验*非特异性试验 用正常牛心肌的心脂质作为抗原检测病人血清反应素 此试验方法包括：WHO推荐使用的VDRL 简易玻片沉淀试，不加热血清反应(USR)快速血浆反应素试验(RPR)国内较常用USR和RPR试验,上述各种方法测出的阳性率

25、为：一期梅毒53%-82.9%，二期梅毒可达100%，三期梅毒则较低。因这些试验抗原为非特异，所以一些非梅毒疾病也可出现阳性反应，如结核、麻风、红斑狼疮、类风湿关节炎、疟疾、肝炎及孕妇等。但是，反应素试验可作为判定疗效的指标，因为药物治疗后可转阴,特异性试验 用Nichols株梅毒螺旋体作抗原检测患者血清中相应抗体，其特异性高。包括荧光密螺旋体抗体吸收试验 是一种间接荧光抗体法。梅毒螺旋体制动试验,5.防治原则 梅毒是一种STD，预防应加强性安全教育，严格社会管理。梅毒确诊后，应尽早采用青霉素治疗。剂量要足，使血液中药物浓度达0.03单位ml，并持续维持7-10d，然后定期检测，在治疗3个月至

26、1年后血清学反应转阴者为治愈，否则需继续治疗,第二节 疏螺旋体属 在疏螺旋体属中，对有人致病性的包括伯氏疏螺旋体以及回归热疏螺旋体。前者为莱姆病病病原体，后者为回归热原体。一、伯氏疏螺旋体 伯氏疏螺旋体 是莱姆病病原体。该病于1977年在美国康涅狄格洲莱姆(Lyme)镇首先发现，故称莱姆病。我国已在10多个省区分离到伯氏疏螺旋体.,（一）生物学性状,1.形态与染色伯氏疏螺旋体细长，在暗视野显微镜下伯氏疏螺旋体呈现活泼运动。G，但不易着色。Giemsa染色呈淡紫色。用Fontana镀银染色法 为棕褐色,2.培养 营养要求高，常用含牛或兔血清的BSK培养基 培养，生长缓慢，分裂繁殖一代约需12h，

27、一般培养2-3w,（二）、致病性与免疫性 莱姆病是以硬蜱为传播媒介的自然疫源性传染病 1.致病物质 具有侵袭力和内毒素粘附素；粘附并侵入组织细胞内毒素：其细胞壁中有LPS组分，具有内毒素的作用,2 所致疾病 人被蜱叮咬后，伯氏疏螺旋体进入皮肤，在局部生长繁殖，数日或数周后经血液或淋巴扩散至全身许多器官。早期有慢性游走性红斑、发烧、头痛、肌痛、关节痛、轻度颈强、眼结膜炎、淋巴结炎等。数日内慢性游走性红斑向周围扩散，逐渐出现皮损，然后出现关节、心脏、神经系统及其他深部组织炎症。一般未经治疗者约2个月可缓解，但常复发。晚期一般在发病数月或数年后出现深部组织持续感染，并伴随关节畸形、慢性萎缩性皮肌炎、心内膜炎、心包炎、神经麻痹(以面神经麻痹为多见)等,3.免疫性 感染伯氏疏螺旋体患者可产生特异性抗体。对细胞介导的免疫保护作用尚有疑议。有毒力的菌株具有抗吞噬能力，但所有受害组织可见到淋巴细胞浸润。特异性抗体产生后，吞噬功能可增强。,4.防治原则 疫区工作人员和旅游者应加强个人防护，避免被蜱叮咬。用于家犬疫苗已经问世，用于人类的亚单位疫苗尚在研制中。伯氏疏螺旋体对四环素、青霉素等敏感。根据临床表现和病程不同而采用不同抗生素及给药方式。,