美罗培南HPLC药物分析.ppt

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2、色谱专用）三乙胺（A.R.）浓磷酸（A.R.）美罗培南试样,3、HPLC分析条件,色谱柱:ZORBAX Eclipse XDB-C8 4.6150mm,5m(Agilent)柱温：室温流动相：0.3%三乙胺(用磷酸调节pH=5.0)的水溶液和乙腈(体积比1007)；也可以简化用纯水和乙腈(体积比1007)作流动相检测器：DAD 检测波长：220nm进样体积：20l定量环，实际每次注射40l,可不是件容易事啊！,实验仪器及工作条件,美罗培南简介,条件试验,方法学,有关物质检查与含量测定,方法学研究,1、空白试验2、美罗培南与BP及开环物的分离3、美罗培南检测限、定量限4、破坏性试验5、溶液稳定性

3、6、工作曲线7、样品的有关物质检测和含量测定,1、空白试验,空针进样：基线是否稳定流动相进样：是否有杂质影响,注意纵轴,色谱法中的信噪比,上：199nm N=4 mAU中：228nmN=0.35 mAU下：275nmN=0.02 mAU,DEP为例,典型UV吸收光谱,较小波长处：信号和噪声均大,常识大,色谱法中的信噪比,199nm S=58.8 mAUS/N=14.7 228nm S=18.3 mAUS/N=52.3 275nm S=2.18 mAUS/N=109,1.5 mg/L 的DEP,缓冲溶液对峰形的改善,原因分析：,2、美罗培南与BP及开环物的分离,美罗培南与中间产物BP分离,BP,

4、流动相改用50%乙腈：50%纯水,美罗培南与BP光谱比较,多波长检测+化学计量学,美罗培南与开环物分离,计算分离度，理论塔板数,3、美罗培南测出限、测定限,测出限(LOD:S/N=3)测定限(LOQ:S/N=10),稀释多次减少污染,4、破坏性试验(1),25mg美罗培南，加0.1mol/L HCl 5ml，室温振摇溶解后反应液用0.1mol/L NaOH中和至中性进样,主峰84%,酸破坏,4、破坏性试验(2),25mg美罗培南，加0.01mol/L NaOH 5ml，振摇溶解，室温放置34min后反应液用0.01mol/L HCl中和至中性进样。,主峰95.5%,碱破坏,4、破坏性试验(3)

5、,25mg美罗培南，加1双氧水1ml，振摇，室温放置14min，加热分解剩余的双氧水，加流动相至5ml过滤后进样。,主峰 83.33%,氧化破坏,4、破坏性试验(4，5，6),高温/光照/高湿,今天网络讨论：为什么要破坏性试验？,5、溶液稳定性,溶液室温放置6h，过程中取样测试稳定性,试验溶液要现配现做，尤其是浓溶液！,稀溶液较稳定,6、工作曲线,美罗培南（0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0）mg/ml主峰面积作图R要求0.999,7、样品有关物质检测和含量测定,有关物质检测粗品、040901-1、040901-2、040901-3、041001、041002、041003含量测定

6、041001、041002、041003先以USP对照品标定040901-3批 以后都以040901-3为对照品,美罗培南简介,条件试验,方法学,有关物质检查与含量测定,有关物质检查和含量测定,1、方法步骤 A 有关物质检测供试品溶液：5mg/ml，用流动相溶解。对照溶液：将供试品溶液用流动相稀释制成25g/ml（1：200）。记录色谱图至主成分峰保留时间的3.5倍 目的：相同坐标刻度范围看杂质含量,有关物质检测（040901-3批）,坐标刻度范围相同,峰高占满刻度20%-25%,B 含量测定,供试品溶液：0.5mg/ml，用流动相溶解 对照品溶液：0.5mg/ml，用流动相溶解 计算方法：外标法（单点校正）对照品均为：040901-3批 平行进样至少2针 目的：测试物质含量,含量测定（040901-3批）,2ndA：7612,2、工作内容,影响因素实验样品测定光照、高温、高湿度考核：5天，10天长期试验样品（25、RH60%）3月，6月，9月，12月加速试验样品（40、RH75%）1月，2月，3月，6月加速试验样品（30、RH60%）1月，2月，3月，6月,注意：以上试验分别测试041001、041002、041003批,后续工作展望,半成品、成品试剂等方法学研究及有关物质检测和含量测定,路漫漫兮其修远兮！,