《高速逆流色谱》PPT课件.ppt

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1、高速逆流色谱,一、概述高速逆流色谱（High-Speed Countercurrent Chromatography,HSCCC）是一种连续高效的液-液分配色谱分离技术。该技术不需要固体支撑体，主要依据物质在两相中分配系数的不同对物质进行分离，相对其他常用色谱（如柱色谱、高效液相色谱等）来说，具有无不可逆吸附和回收率高的特点，特别适合于天然活性成分的分离。,HSCCC技术最早是由美国国立卫生院Ito博士研制应用，我国对HSCCC技术应用较早，HSCCC技术发展十分迅速，在过去2030年中，出现了一系列新型的分离技术，积累了大量的科研成果，自1995年以来，国外已有5本英文专著出版，我国目前也有

2、两本中文专著出版。,二、HSCCC色谱工作原理,HSCCC色谱包括储液罐、泵、螺旋管分离柱、检测器、色谱工作站或数据采集软件或记录仪以及馏分收集器等部分。,选择溶剂体系,平衡,选择固定相,充满螺旋管柱,高速旋转螺旋管,泵入流动相,流动相流出，注入待分离的样品,收集馏分,分离效果,溶剂系统,固定相,流动相,洗脱方式、流动相的流速,仪器的旋转方向和转速,样品浓度和进样方式,柱温等,检测器,紫外-可见光检测器,蒸发光散射检测器,质谱检测器等,与其它色谱分离技术相比，高速逆流色谱具有如下特点：,分离效率高,制备量大,操作灵活,回收率高,应用范围广,分离成本低,三、溶剂体系的要求,1 溶剂体系的种类,弱

3、极性溶剂体系,中等极性溶剂体系,强极性溶剂体系,两相由正己烷和水组成，可用甲醇、乙醇、醋酸乙酯等来调节溶剂系统的极性。典型的溶剂体系有：正己烷-醋酸乙酯-乙醇-水 正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水,中等极性溶剂体系的两相由氯仿和水组成，可以加入甲醇、乙醇、醋酸乙酯等来调节溶剂系统的极性。适合于黄酮类、蒽醌类、香豆素和一些极性较大的木脂素和萜类的分离。典型的溶剂体系是氯仿-甲醇-水（4：3：2）,强极性溶剂体系的两相基本物质是正丁醇和水，可以加入甲醇、乙醇、醋酸乙酯等溶剂来调节溶剂系统的极性，也可以在氯仿水体系中调节pH值来增大极性,或在异丁基甲醚水体系中加入适量的酸和碱.适合于极性很强的生物碱类化合

4、物的分离。典型的溶剂体系:氯仿-甲醇-HCl异丁基甲醚-水（有机相加三乙胺，水相加盐酸）,2 溶剂体系选择的步骤,（1）预测要分离物质的极性，粗选一个溶剂体系；,（2）取少量样品于上下相各2毫升的溶剂体系中，用TLC进行检验，可加入甲醇、乙醇、醋酸乙酯等来调节溶剂体系的极性，直到样品在上下相中的分配比K为0.52为止；（3）用HPLC测定K值；（4）用分析型HSCCC进行预分离，再用制备型高速逆流色谱进行分离。,（1）溶剂不造成样品的分解或变性；（2）样品在溶剂中有足够高的溶解度；（3）样品在溶剂系统中有合适的分配系数 值；（固定相为管柱总体积的50%以上，分配系 数为0.52）（4）固定相能

5、实现足够高的保留。,3 选择溶剂时应注意,生物碱,氯仿-甲醇-NaH2PO4溶液(pH=4)溶剂体系,氯仿-甲醇-盐酸体系,异丁基甲醚-四氢呋喃-水体系,异丁基甲醚-水体系,正己烷-乙醇-水体系,正己烷-醋酸乙酯-水,正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水,4 不同物质的溶剂体系,黄酮类化合物,正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水,正丁醇-醋酸乙酯-水,氯仿-甲醇-水,正己烷-醋酸乙酯-正丁醇-甲醇-醋酸-水,正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水,萜类,异辛烷-乙酸乙酯-甲醇-水,异辛烷-甲醇-水,氯仿-甲醇-水,木脂素和香豆素,氯仿-甲醇-水,正己烷-乙睛-醋酸乙酯-水,正己烷-甲醇-水,氯仿-甲醇-水,四、应用,溶剂系统,两相溶剂系统：正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水（6：3：2：5），在分液漏斗中充分混合，临用前将其分开。,分离条件：室温下，上相为固定相，下相为流动相，流速为0.7ml/min；洗脱方式：由首端向尾端洗脱；主机：正转，流速为800r/min,进样:3.8mg/2ml；检测：紫外检测器，波长为220nm,实验结束时,用N2将固定相由首端向尾端推出,分别收集四份,色谱柱管用甲醇清洗两次.,