《食品卫生微生物》PPT课件.ppt

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1、第九章 食品卫生微生物,第一节 食物中毒性微生物及其引起的食物中毒第二节 污染食品引起的常见疫病的病原学,第一节 食物中毒性微生物,一、食物中毒的概念及其类型关于食物中毒的定义和概念，虽然还没有一致的意见，这里仅谈由于微生物引起的食物中毒:指人体因吃了含有有害微生物或微生物毒素的食物而引起的一切中毒性疾患。根据引起食物中毒的微生物类群不同，主要包括细菌性食物中毒和霉菌性食物中毒两大类。根据引起食物中毒的机理不同可分为感染型及毒素型。感染型食物中毒：病原细菌污染食物，并在食物中大量繁殖，这种含有大量活菌的食物被摄入人体，会引起人体消化道的感染而造成的中毒。毒素型食物中毒：食物中污染某些产毒微生物

2、后，在适宜的条件下，这些微生物在食物中繁殖并产生毒素，由于毒素的作用而引起的中毒，即称为毒素型食物中毒。,二、食物中毒的细菌,1沙门氏菌:(1)形态与染色特性。沙门氏菌是革兰氏阴性、两端钝圆的短杆菌，大小约为130.40.9m，不产生荚膜和芽孢，除鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌外，均具有周身鞭毛，能运动，多数细菌具有菌毛，能吸附于细胞表面或凝集豚鼠的红细胞。形态上均与大肠杆菌相似。(2)培养特性。本菌为需氧及兼性厌氧菌。生长的温度范围6.745.6，最适生长温度37oC。生长的pH值范围4.19.0，最适生长pH值6.87.8。营养要求不高，在普通琼脂培养基上均能生长良好，培养24h后，形成中等大小、

3、圆形、表面光滑、无色、半透明、边缘整齐的菌落。(3)中毒症状 沙门氏菌食物中毒的临床症状一般在进食染菌食物1224h后出现。主要表现为急性胃肠炎症状，如呕吐、腹痛、腹泻等。另外，由于细菌毒素作用于中枢神经，还可引起头痛、发热，严重的会出现寒战、抽搐和昏迷等症状。病程为37d，一般预后良好，但老人、儿童和体弱者如不及时进行急救处理也可致死。沙门氏菌食物中毒的病死率通常低于1。,2.金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）(1)形态与染色特性。金黄色葡萄球菌为革兰氏染色阳性球菌，直径为0.51.0m，呈葡萄状排列。无芽孢，无鞭毛，无荚膜，不能运动。(2)培养特性。金黄色葡萄球菌

4、为兼性厌氧菌，营养要求不高，在普通琼脂培养基上培养1824h，形成圆形隆起、边缘整齐、光滑湿润、不透明的菌落，直径12mm，颜色呈金黄色。最适生长温度为3537oC，最适pH值7.4。(3)毒素。金黄色葡萄球菌主要产生肠毒素。肠毒素是金黄色葡萄球菌产生的一种毒性蛋白，目前根据抗原性的不同，发现有6种肠毒素，即A、B、C、D、E、F型，其中A型肠毒素引起的食物中毒最多，B和C型次之。食品经煮沸、巴氏灭菌、烹调及其它热处理不能完全破坏食品中的肠毒素。(3)中毒症状。中毒的潜伏期一般为15h，最短为15min，最长不超过8h。中毒症状为急性胃肠炎症状，恶心、反复呕吐，并伴有腹痛、头晕、头痛、腹泻等。

5、儿童对肠毒素比成人更敏感，病情也较成人重。但金黄色葡萄球菌食物中毒一般不导致死亡，只要及时补充吐泻的失水，12d内就能恢复正常。,3.致病性大肠杆菌（Pothogenic E.coli）(1)形态与染色特性。大肠杆菌是肠杆菌科埃希氏菌属的细菌，它为革兰氏阴性、两端钝圆的小杆菌，长为13m，宽约0.6m，本菌为周毛菌，能运动，不产生荚膜，有时两端浓染，要注意与巴氏杆菌区别。(2)培养特性。本菌为需氧及兼性厌氧菌，对营养要求不高，在普通琼脂培养基上即可生长良好，最适生长温度为37oC，最适pH为7.27.4。新分离出来的大肠杆菌一般是光滑型（S）菌株；在普通琼脂平板上培养24h，可形成圆形、凸起、

6、光滑、湿润、半透明的或接近无色的中等大菌落，(3)中毒症状致病性大肠杆菌食物中毒的潜伏期较短，通常在摄食后410h突然发病。肠道致病性大肠杆菌和侵袭性大肠杆菌引起的症状与志贺氏菌引起的菌疾相似，表现为腹痛、腹泻、呕吐、发烧、大便呈水样，有时伴有脓血和粘液；产毒性大肠杆菌引起的症状与霍乱相似，表现为腹痛、腹泻、呕吐、发烧、大便呈米泔水样，但无脓血。,4.肉毒梭状芽孢杆菌（Clostridium bobulinm）(1)形态与染色特性。本菌是两端钝圆的粗大杆菌，大小为0.91.246m，多单生，偶见成双或短链，有周身鞭毛，无荚膜，能形成椭圆形芽孢，革兰氏染色阳性。(2)培养特性。本菌为严格厌氧菌，

7、对营养要求不高，在普通琼脂培养基上生长良好，生长最适温度为2837oC，生长最适pH值6.87.6，产毒最适pH值7.88.2。本菌在血清琼脂上培养4872h，形成中央隆起、边缘不整齐、灰白色、表面粗糙的绒球状菌落。本菌的繁殖体抵抗力一般，经加热80oC 30min或100oC 10min即可杀死，但其芽孢的抵抗力很大，可耐煮沸16h之久，于180oC干热515min、120oC高压蒸气灭菌1020min才能杀死。肉毒毒素抵抗力也较强，80oC 30min或100oC 10min才能完全破坏，正常胃液和消化酶于24h不能将其破坏，因此可在胃肠吸收而引起中毒。(3)中毒机理及症状 肉毒杆菌食物中

8、毒由肉毒素所引起，所以它属于毒素型食物中毒。主要作用于神经和肌肉的连接处及植物神经末稍，阻碍神经末稍乙酰胆碱的释放，导致肌肉收缩和神经功能不全。,三、霉菌毒素及其引起的食物中毒,(一)霉菌毒素引起食物中毒的特点1.发生中毒与某些食物有联系。2.霉菌毒素中毒症发生往往有季节性和地区性，但无感染性。3.霉菌毒素是小分子有机化合物，不是复杂的蛋白质分子，不 能刺激机体产生相应的抗体，无免疫性。4.人和家畜家禽一次性摄入含有大量霉菌毒素的食物，往往会 发生急性中毒，长期少量摄入会发生慢性中毒和致癌。5霉菌毒素食物中毒易并发维生素缺乏症，但补充维生素无效。,(二)常见的毒素及其食物中毒,1.黄曲霉毒素（

9、Aflatoxins）(1)黄曲霉毒素中毒病原菌 产生黄曲霉毒素的病原菌是黄曲霉（Aflavus）和寄生曲霉（Aparasiticus），两者均属于黄曲霉群。温特曲霉（Awentii）也能产生黄曲霉毒素，但产量较少。(2)黄曲霉毒素性质 它是蚕豆素的衍生物，共有10余种，其中B1毒力最强，也最常见，G1和B2次之。本毒素耐热，一般烹调加工温度不能破坏，裂解温度为280oC，它在水中溶解度很低，溶于油及氯仿、甲醇中，但不溶于乙醚、石油醚及乙烷中。(3)黄曲霉毒素的毒性 按其临床症状分为三型：急性和亚急性中毒 慢性中毒,2.镰刀菌毒素 镰刀菌（Fusarium）又叫镰孢霉，在自然界中分布极为广泛，

10、是食品中经常分离出的一种真菌。目前已发现有多种镰刀菌产生对人畜健康威胁极大的镰刀菌毒素。根据联合国粮农组织（FAO）和世界卫生组织（WHO）联合召开的第三次食品附加剂和污染物会议资料，镰刀菌毒素问题同黄曲霉毒素一样被看作是自然发生的最危险的食物污染物。镰刀菌毒素已发现有十几种，按其化学结构可分为三大类：单端孢霉烯族化合物(Trichothecenes)、玉米赤霉烯酮(Zearelenone)和丁烯酸内酯(Butenolide)。,3.杂色曲霉素（Versicolin）它是杂色曲霉、构巢曲霉、焦曲霉等的代谢产物。除异杂色曲霉外，化学结构中都有两个呋喃环，与黄曲霉毒素结构相似，为肝脏毒素，可以导致

11、试验动物的肝癌、肾癌、皮肤癌和肺癌，其致癌性仅次于黄曲霉毒素。,(三)防霉方式,物理防霉 干燥防霉，控制水份和湿度，保持食品和贮藏场所的干燥，做好食品贮藏地的防湿防潮，相对湿度不超过65%70%，保持食品干燥，控制温差，防止结露，粮食及食品可在阳光下晾晒，风干、烘干或加吸湿剂，密封。低温防霉，把食品储藏温度控制在霉菌生长的适宜温度以下，从而抑菌防霉，冷藏的食品温度界限应在4oC以下。气调防霉，就是控制气体成份，防止霉菌生长和毒素产生，通常采取除氧或加入CO2、N2等气体，运用密封技术控制和调节储藏环境中的气体成份，现已在食品储藏工作中广泛应用。化学防霉 使用防霉化学药剂，有熏蒸剂如溴甲烷、二氯

12、乙烷、环氧乙烷，有拌合剂如有机酸、漂白粉、多氧霉素。如用环氧乙烷熏蒸，用于粮食防霉效果很好。如食品中加入0.1%的山梨酸，防霉效果很好。,第二节 污染食品引起的常见疫病的病原学,一、炭疽杆菌（Bacillus anthracis）二、布鲁氏菌（Brucella）三、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis),第一节 致病性大肠埃希氏菌及其食物中毒,一、生物学特性（一）形态特征及培养特性此菌为两端钝圆的短小杆菌，一般大小为1.03.00.50.8m，革兰氏染色阴性。此菌多单独或成双存在，但不呈长链状排列。因生长条件不同，个别菌体可呈近似球状或长丝状。约有50%左右的菌株

13、具有周生鞭毛而能运动，但多数菌体只有14根，一般不超过10根，故菌体动力弱；多数菌株生长有比鞭毛细、短、直且数量多的菌毛，有的菌株具有荚膜或微荚膜；不形成芽胞，对普通碱性染料着色良好。在普通营养琼脂平板上培养24h生长表现3种菌落形态：光滑型 菌落边缘整齐，表面有光泽、湿润、光滑、呈灰色，有特殊的粪臭味，在生理盐水中容易分散。粗糙型 菌落扁平、干涩、边缘不整齐，易在生理盐水中自凝。粘液型 常为含有荚膜的菌株。在伊红美兰平板上，发酵乳糖形成带有金属光泽的紫黑色菌落。,第一节致病性大肠埃希氏菌及其食物中毒,（二）生化特性本菌数量大，菌型多，大多数菌的生化特性比较一致：可发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘

14、露醇，产酸产气，本菌不能在氯化钾培养基上生长，能产生靛基质，M.R试验阳性，吲哚试验阳性，V-P试验阴性，不利用枸掾酸盐。不分解尿素，不液化明胶，不产H2S。,（三）抗原结构大肠杆菌抗原结构较为复杂，主要有菌体（O）抗原、鞭毛（H）抗原和荚膜（K）抗原三部分组成。O抗原 指光滑大肠杆菌的菌体抗原，其组成是细胞壁上的糖、类脂、蛋白质复合物，也是细菌的内毒素，对热非常稳定，经高压蒸汽处理2h而不被破坏。每一种血清型只含有一种O抗原，已分出167个血清型，分别以阿拉伯数字表示。H抗原 指鞭毛抗原，为蛋白质构成，一种大肠杆菌只有一种H抗原。H抗原能被80热处理或酒精破坏，共有 64种抗原，K抗原 指包

15、于细胞外部的荚膜物质或包膜物质的表面抗原。新分离的大肠杆菌70具有K抗原。根据K抗原对热的敏感性，可将K抗原分为A、B、L三类，目前发现100多个血清型，致病性大肠杆菌的抗原主要为B抗原，少数为L抗原。B抗原于L抗原均可经煮沸所破坏。L抗原还可被酒精和当量盐酸所破坏。O抗原可将大肠杆菌分成若干血清群，然后在根据K抗原和H抗原进一步分为若干血清型或亚型，根据大肠杆菌抗原的鉴定，可确定其抗原式，O111:K58(B)H12,一般认为，H抗原与致病性无关。,第一节致病性大肠埃希氏菌及其食物中毒,第一节致病性大肠埃希氏菌及其食物中毒,（四）抵抗力该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，55经60min或60

16、加热15min仍有部分细菌存活。在自然界的水中可存活数周至数月对化学药品的抵抗力较弱，如以5苯酚或1:500升汞处理，5min可杀死。对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感。来源与分布致泻性大肠杆菌是引起人体以腹泻症状为主的全球性疾病，其中尤以EPEC、ETEC所占比例为大。近来，EHEC O157:H7为世界卫生组织（WHO）定为新的食源性致病菌，其引发的出血性肠炎的暴发或散发病例常见。,第一节致病性大肠埃希氏菌及其食物中毒,（五）致病因子：1.定居因子（Colonization factor,CF）也称粘附素(Adhesin)，即大肠杆菌的菌毛。2.肠毒素 人体肠道内或培养液中主要产生两种毒素分为

17、耐热和不耐热两种。不耐热肠毒素（Heat labile enterotoxin，LT）对热不稳定，65经30min即失活。蛋白质，分子量大，具有免疫原性。耐热肠毒素（Heat stable enterotoxin,ST）：对热稳定，100经20min仍不被破坏，分子量小，免疫原性弱。ST可激活小肠上皮细胞的鸟苷酸环化酶，使胞内cGMP增加，在空肠部分改变液体的运转，使肠腔积液而引起腹泻。3.胞壁脂多糖的类脂A具有毒性，O特异多糖有抵抗宿主防御屏障的作用。大肠杆菌的K抗原有吞噬作用。,第一节致病性大肠埃希氏菌及其食物中毒,（六）症状此类食物中毒是摄入了大量致病性活菌体所致。其感染剂量为10710

18、8个/g.一类是毒素型大肠埃希氏菌引起的急性胃肠炎，主要症状表现为呕吐、腹泻，粪便呈水样，伴有粘液，无脓血。腹泻次数每日可达510次。患者体温升高，约为3840。另一类为急性菌痢，主要症状表现为腹痛、腹泻、发热，体温可达37.840，持续34d。大便为伴有粘液脓血的黄色水样便。,第二节 葡萄球菌及其胃肠炎,一、形态结构球形或稍呈椭园形，直径0.4um1.2 um左右，分裂面不规则，分裂后许多菌体无规则地堆积在一起，呈葡萄串状,如金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)。葡萄球菌无鞭毛，不能运动。无芽孢，除少数菌株外一般不形成荚膜。革兰氏染色为阳性。其衰老、死亡或被白细胞吞噬

19、后的某些菌株可被染成革兰氏阴性。,第二节 葡萄球菌及其胃肠炎,二、培养与生理生化特性葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，在含有血液和葡萄糖的培养基中生长更佳，需氧或兼性厌氧，少数专性厌氧。28-38均能生长，致病菌最适温度为37，PH为4.5-9.8，最适为7.4。耐盐性强,在含有10%15%的氯化钠培养基中能生长,在含有20%30%二氧化碳的环境中培养,可产生大量毒素。在琼脂平板上形成圆形凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润，不透明的菌落。不同种的菌株产生不同的色素，如金黄色、白色、柠檬色。色素为脂溶性。葡萄球菌在血琼脂平板上形成的菌落较大，有的菌株菌落周围形成明显的全透明溶血环（溶血）

20、，也有不发生溶血者。凡溶血性菌株大多具有致病性。多数葡萄球菌能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产气。致病性菌株能分解甘露醇。在一般非芽孢细菌中，葡萄球菌抗性较强，在干燥的脓汁、血液以及食品中可存活数月。在80的加热温度下，30分钟才能杀死，煮沸可使其迅速死亡。,第二节 葡萄球菌及其胃肠炎,三、抗原构造 葡萄球菌抗原构造复杂，已发现的在30种以上，其化学组成及生物学活性了解的仅少数几种。1葡萄球菌A蛋白（staphylococcal protein A,SPA）SPA是存在于 90%以上的金黄色葡萄球菌细胞壁表面的一种蛋白质，为完全抗原。SPA能抑制吞噬细胞的吞噬作用，对T、B细胞是良好的促分裂

21、原。2多糖抗原 为半抗原，具有群特异性，存在于细胞壁，借此可以分群。其抗原决定簇为磷壁酸的核糖醇单位。3荚膜抗原 几乎所有金黄色葡萄球菌菌株的表面有荚膜多糖抗原的存在。表皮葡萄球菌仅个别菌株有此抗原。,第二节 葡萄球菌及其胃肠炎,四、金黄色葡萄球菌引起的胃肠炎及其预防 金黄色葡萄球菌能引起食物中毒，主要原因为其能产生肠毒素（Enterotoxin,简称SE）从临床分离的金黄色葡萄球菌，约1/3产生肠毒素。金黄色葡萄球菌肠毒素主是由血浆凝固酶或耐热酸酶阳性菌株所产生的一类结构相关、毒力相似、抗原性不同的胞外蛋白质，迄今从血清型上已被鉴定的SE有10种，A、B、C、D、E、G、H、I、J、K，其中

22、C型抗原又根据等电点的不同分为3个亚型（C1、C2、C3），各型肠毒素均能引起食物中毒，其中以A型和D型引起的食物中毒最多，B型和C型次之。肠毒素可引起急性胃肠炎，人吃了被产毒菌株污染了的牛奶、肉类、鱼虾、蛋类等食品就会引起食物中毒。肠毒素是一种可溶性蛋白质，耐热，经100煮沸30分钟不被破坏，也不受胰蛋白酶的影响，故误食污染肠毒素的食物后，在肠道作用于内脂神经受体，传入中枢，刺激呕吐中枢，引起呕吐，并产生急性胃肠炎症状。发病急，病程短，恢复快。一般潜伏期为16小时，出现头晕、呕吐、腹泻，发病12日可自行恢复，预后良好。,第三节 沙门氏菌及其沙门氏菌病,沙门氏菌（Salmonella）属是肠杆

23、菌科中的一个属，革兰氏阴性细菌，包括2324个血清型。美国沙门氏菌食物中毒占第二位，仅次于葡萄球菌食物中毒。日本沙门氏菌食物中毒占第三位，仅次于副溶血性弧菌和葡萄球菌食物中毒。一、生物学特性(一)、形态特征及培养特性沙门氏菌菌体呈直杆状，两端钝圆，直径130.40.9m，革兰氏染色阴性，无荚膜，无芽孢，除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外大多数有周生鞭毛，能运动。普通营养琼脂上经37 1824h培养，形成直径23m正圆形菌落，菌落表面湿润光滑，边缘整齐或不整齐，无色半透明。,第三节 沙门氏菌及其沙门氏菌病,(二)生理生化特性生化反应比较一致，但也有个别菌株的个别特性有差异。本菌发酵葡萄糖、麦芽糖

24、、甘露醇和梨醇产酸产气，不发酵乳糖、蔗糖和水杨苷，不生成吲哚，V-P反应阴性。不水解尿素和对苯丙氨酸不脱氨。除鸡白痢、猪伤寒、甲型副伤寒、伤寒和藓台等沙门氏菌外，均能作用枸掾酸盐。伤寒、鸡伤寒及部分鸡白痢沙门氏菌不发酵麦芽糖。培养时可以利用氨基酸作为氮源，但鼠伤寒沙门氏菌也可以利用硝酸盐、亚硝酸盐和NH3作为唯一氮源。一般不能利用乳糖发酵，但有些血清型能够利用这种糖。除牛流产等少数沙门氏菌外，凡第一亚属的菌型都不能液化明胶。,第三节 沙门氏菌及其沙门氏菌病,(三)培养特性 沙门氏菌的最适培养温度为37，最适pH值为7.27.4，不耐热，60 2030min即可杀死。沙门氏菌的最佳生长pH在中性

25、附近，在pH9.0以上和pH4.0以下会致死。沙门氏菌在pH为6.68.2的情况下能良好生长。在生长的水分活度方面，在中性pH环境下，当Aw值低于0.94时，沙门氏菌的生长受到了抑制，当pH下降至生长极限值时，所需的Aw值较高。与葡萄球菌不同的是，沙门氏菌不能耐受较高的盐浓度。盐浓度在9以上会致死沙门氏菌。汤普森沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌比森夫顿堡沙门氏菌更能耐受酸的作用。,第三节 沙门氏菌及其沙门氏菌病,三、沙门氏菌的血清型沙门氏菌的菌种和血清型可根据一种或多种O抗原的类似性归类于A、B、C等类型。O抗原存在于菌体表面，其化学性质为类脂多糖多肽复合物，由多糖决定其特异性。该抗原对热稳定。沙门氏

26、菌的O抗原共有65种，以阿拉伯数字1、2、3代表，有的O抗原是几个菌群共有的，如1、5、6、12等，这些被称为次要抗原，有些O抗原是某一菌群特有的，如2、3、4、7、8、9、10、11等，其它菌群不具有，这些抗原被称为主要抗原。H抗原存在于鞭毛中，其化学性质是蛋白质，由肽链中氨基酸的排列顺序及空间构型决定其特异性。该抗原不耐热，酒精也可破坏其抗原性。Vi抗原少数沙门氏菌如丙型副伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌、新分离出来的菌株，常具有一种包膜（Vi）抗原，经过几次传代、60加热处理或石炭酸处理易于消失，Vi 抗原可阻止O抗原与体结合，因此要进行O凝集反应，必须先洗掉Vi抗原。,第三节 沙门氏菌及其沙

27、门氏菌病,四、沙门氏菌食物中毒症状及致病因子 由沙门氏菌引起的食品中毒症状主要有恶心、呕吐、腹痛、头痛、畏寒和腹泻等，还伴有乏力、肌肉酸痛、视觉模糊、中等程度发热、躁动不安和嗜睡，延续时间23d。平均致死率为4.1。沙门氏菌病的诱发涉及到两种毒素肠毒素和细胞毒素。沙门氏菌肠毒素是一种与大肠杆菌肠毒素作用方式类似的肠毒素，即它可以提高肠道中的环状腺苷单磷酸(cAMP)水平。与大肠杆菌肠毒素不同的是，它的生成量要低得多，而且难以从产毒细胞中分离出来。研究者在沙门氏菌病发过程中，肠道黏膜上出现的细胞损伤是由细胞毒素引起的。一旦受到损伤之后，肠道黏膜更易于受到微生物的感染，这些感染的微生物又能导致其它

28、组织的损伤。,第四节 志贺氏菌及志贺氏菌病,志贺氏菌属（Shigella）的细菌（通称痢疾杆菌），是细菌性痢疾的病原菌。在我国广大农村地区由于卫生条件差，经常有食品或水源受到志贺氏菌污染而引起的痢疾、腹泻等疾病。志贺氏菌属包括四个亚群：A群 痢疾志贺氏菌，有10个抗原组成各不相同的血清型，其中包括最知名的志贺氏杆菌（型痢疾志贺氏菌）和舒密次杆菌（型痢疾志贺氏菌）。B群 福氏志贺氏菌，有6个血清型，其中的15又可分为两个亚型，还有x、y两个变种，这些型、亚型和变种之间通过大量的共同抗原联系在一起。C群 鲍氏志贺氏菌，有15个血清型，其中有的血清型有甘露醇阴性的变种。D群 宋内氏志贺氏菌，只有一个

29、血清型，它具有光滑型和粗糙型的变异。,第四节 志贺氏菌及志贺氏菌病,一、志贺氏菌的形态结构志贺氏菌属细菌的形态与一般肠道杆菌无明显区别，为革兰氏阴性杆菌，长约2-3m,m。不形成芽胞、无荚膜、无鞭毛、有菌毛。营养要求不高，能在普通培养基上生长，37培养1824h 后菌落呈圆形、微凸、光滑湿润、无色、半透明、边缘整齐，直径约2mm，在液体培养基中呈均匀浑浊生长，无菌膜形成。,第四节 志贺氏菌及志贺氏菌病,二、培养与生理生化特性需氧或兼性厌氧。营养要求不高，能在普通培养基上生长，最适温度为37，但在1040范围内亦可以生长，在pH 6.47.8时生长良好，最适pH约为7.2。本菌属都能分解葡萄糖，

30、产酸不产气。大多不发酵乳糖，靛基质产生不定，甲基红阳性，VP试验阴性，不分解尿素，不产生H2S。,三、抗原构造主要抗原有三种。型特异性抗原、群特异性抗原、表面抗原（K抗原）。型特异性抗原：型多糖抗原为菌体抗原的一种，是光滑型菌株所含有的重要抗原。当菌株变为粗糙型时，此抗原也常随之消失，各菌型所含的型抗原不同，可用于区别菌种的型别。群特异性抗原：为光滑型菌株的次要抗原，也是菌体抗原的一种。特异性较低，常在数种近似的菌内出现。表面抗原（K抗原）：在新分离的某些菌株菌体表面含有此种抗原。不耐热，加热100 1h即被破坏。具有此种抗原的菌株，可阻止菌体抗原与相应免疫血清发生凝集。,第四节 志贺氏菌及志

31、贺氏菌病,第四节 志贺氏菌及志贺氏菌病,四、志贺氏菌引起的疾病及致病因子1.侵袭力 志贺氏菌进入大肠后，由于菌毛的作用粘附于大肠粘膜的上皮细胞上，继而进入上皮细胞并在内繁殖，扩散至邻近细胞及上皮下层。由于毒素的作用，上皮细胞死亡，粘膜下发炎，并有毛细吸管血栓形成以至坏死、脱落，形成溃疡。志贺氏菌一般不侵犯其他组织，偶尔可引起败血症。目前认为不论是产生外毒素的还是只有内毒素的志贺氏菌，必须侵入肠壁才能致病。因此，对粘膜组织的侵袭力是决定致病力的主要因素。2.内毒素 志贺氏菌属中各菌株都有强烈的内毒素，作用于肠壁，使通透性增高，从而促进毒素的吸收。继而作用于中枢神经系统及心血管系统，引起临床上一系

32、列毒血症症状，如发热、神志障碍，甚至中毒性休克。3.外毒素 志贺氏菌1型及部分2型（斯密兹痢疾杆菌）菌株能产生强烈的外毒素。为蛋白质，不耐热，7580 1h即可破坏。其作用是使肠粘膜通透性增加，并导致血管内皮细胞损害。,第五节 副溶血性弧菌,副溶血性弧菌又称致病性嗜盐菌(Vibrio Parahaemolyticus)也是常见的引起食物中毒的病原菌。中毒常表现为三种类型，即由肠毒素引起的毒素型；活菌侵入肠粘膜引起的感染型以及两者共同引起的混合型。本菌引起的食物中毒，一般发病急，潜伏期为124h，多为610h。初期临床表现：上腹部疼痛、恶心、呕吐、发热、腹泻。随后剧烈腹痛，约持续12d，拉水样便

33、，便中有粘液和脓血。少数病人可出现意识不清、痉挛、脸色苍白、血压下降及休克等症状。,第五节 副溶血性弧菌,一、生物学特性（一）形态和染色特性本菌为多形态，表现为杆状、稍弯曲的弧状，有时呈棒状、球状或球杆状等。本菌无芽孢，有单鞭毛，能活泼运动，革兰氏染色阴性。（二）培养特性本菌为需氧或兼性厌氧菌，但在厌氧时生长非常缓慢。生长的温度范围在844，最适生长温度为37，生长的pH范围4.811.0，最适pH为7.78.0。（三）（四）抵抗力本菌的抵抗力不强，不耐热，经56 30min、75 5min、90 1min加热即可杀死。对醋酸更为敏感，在食醋中经5min即死亡，1醋酸1min可致死。在淡水中生

34、存不超过2d，在盐渍酱菜中存活30d以上，在海水中能存活47d以上。本菌对四环素、氯霉素、金霉素敏感。,（五）抗原结构本菌具有耐热的O抗原，不耐热的K抗原和H抗原三种。经过凝集试验分为12个O群和70个K型。多数均具有相同的H抗原。H抗原又称不耐热抗原，其稳定性和特异性均不理想。经加热100 30min就被破坏，因此不用H抗原进行分类。在O3群中，O3:K6血清型副溶血性弧菌被报道可能比其它血清型更能导致腹泻和感染。Calcultta通过实验证实O3：K6菌株能产生较高水平的耐热溶血素（TDH）。（六）致病因子 耐热型直接溶血素(TDH)相对分子量为42000，由2条相同的氨基酸链组成，每条氨

35、基酸链由567个氨基编码成189个氨基酸，其中前24个氨基酸为信号肽，后165个氨基酸为功能区。TDH是一种致毒心脏的细胞毒蛋白，可以致死老鼠，在兔回肠循环试验中诱导一种阳性反应。在用PCR技术扩增目的基因时，根据tdh基因序列设计引物，在其5，端加上合适的限制性酶切位点和保护性序列，序列如下：P1：5，-CGGAATTCATGAAACACCAATATTTTGC-3，；P2：5，-CGCGGATCCTTATTTTTATTGTTGATGT-3，。采用ELISA方法分析时，所有的基因阳性菌株都能产生耐热型直接溶血素。,第六节 单核增生李斯特氏菌及其食物中毒,单核细胞增生李斯特氏菌，是一种能在冷藏温

36、度下存活的致病菌。因为其细胞的苯酚-水浸出物可以诱导单核细胞的生成,而获得了“单核增生细菌”这个种名。一、生物学特性（一）、形态与结构该菌为小的革兰氏阳性类球形杆菌，大小约为0.40.50.52.0m,圆端,直或稍弯，单个、呈V字型排列或成对排列，兼性厌氧、无芽孢，一般不形成荚膜。（二）、培养特性该菌生长需要B族维生素生长素、核黄素、硫胺素和硫辛酸和氨基酸半胱氨酸、谷氨酰胺、异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸。葡萄糖能促进所有李斯特菌的生长，并产生L(+)-乳酸。（三）、血清型根据菌体（O）抗原和鞭毛(H)抗原，将单增李斯特氏菌分成13个血清型，分别是1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a

37、、4b、4ab、4c、4d、4e 和“7”13 个血清型。致病菌株的血清型一般为1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、1/2a和4b,尤其是后两种。,第六节 单核增生李斯特氏菌及其食物中毒,1prfA基因簇 单增李斯特氏菌的染色体上存在一个特征性的prfA基因簇，起到控制李斯特氏菌在宿主细胞内复制和细胞间传播的作用。这个基因簇由六个基因组成：prfA、plcA、hly、mpl、actA和plcB，分为三个转录单元。hly单顺反子占据了中心位置，编码一种带有胆固醇的成孔毒素“李斯特菌溶血素O”(LLO),它与链球菌溶血素O(SLO)和肺炎链球菌溶血O(PLO)是高度同源性的物质。,2内化素

38、 李斯特氏菌中存在两大内化素家族，一个由7080Kda的大分子量蛋白组成，通过碳末端与细菌细胞壁相连。这一组以inlA和inlB为代表，包括至少六个其它成员（inlC2、inlD、inlE、inlF、inlG和inlH），这些成员都是在单核增生李斯特氏菌中发现。另外一组包括一些分子量较小的蛋白，大约为2530Kda，它们缺乏与细胞壁相连的碳末端锚定区域，从而被释放到胞外。其代表就是从单核增生李斯特氏菌中分离的inlC,还包括 i-inlC、i-inlD、i-inlE、i-inlF和i-inlG。它们都是从绵羊李斯特氏菌中发现的。这些已知的内化素通常两个或几个组合在一起形成侵袭单元，唯一特别的是

39、inlC和inlF，它们在单核增生李斯特氏菌的染色体上单独存在。由于存在高度保守的重复序列（LRR对所有的内化素都一样，B或C重复序列存在于与细胞壁相连的大分子量的内化素的碳末端区域），inl基因表现高的序列相似性。,第七节肉毒梭状芽孢杆菌（Clostridium bobulinm）,(1)形态与染色特性。本菌是两端钝圆的粗大杆菌，大小为0.91.246m，多单生，偶见成双或短链，有周身鞭毛，无荚膜，能形成椭圆形芽孢，革兰氏染色阳性。(2)培养特性。本菌为严格厌氧菌，对营养要求不高，在普通琼脂培养基上生长良好，生长最适温度为2837oC，生长最适pH值6.87.6，产毒最适pH值7.88.2。

40、本菌在血清琼脂上培养4872h，形成中央隆起、边缘不整齐、灰白色、表面粗糙的绒球状菌落。本菌的繁殖体抵抗力一般，经加热80oC 30min或100oC 10min即可杀死，但其芽孢的抵抗力很大，可耐煮沸16h之久，于180oC干热515min、120oC高压蒸气灭菌1020min才能杀死。肉毒毒素抵抗力也较强，80oC 30min或100oC 10min才能完全破坏，正常胃液和消化酶于24h不能将其破坏，因此可在胃肠吸收而引起中毒。(3)中毒机理及症状 肉毒杆菌食物中毒由肉毒素所引起，所以它属于毒素型食物中毒。主要作用于神经和肌肉的连接处及植物神经末稍，阻碍神经末稍乙酰胆碱的释放，导致肌肉收缩和神经功能不全。,