《自身抗体的检测》PPT课件.ppt
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1、自身抗体的检测 及应用,鄂尔多斯市中心医院检验科 曹青凤,抗核抗体(ANA)的检测与临床应用,抗核抗体的定义 传统定义:针对细胞核成分抗原总称。广义定义:针对细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。对ANA的理解不再局限于核成份,而是指核质和核蛋白的总称。,ANA测定原理和方法:,间接免疫荧光法(IIF):现多以Hep-2细胞(人喉癌上皮细胞)为底物(Ag),其以核质丰富而极大地提高了ANA检测的阳性率和滴度。是系统性红斑狼疮(SLE)的标准筛选试验。我们实验室采用欧蒙荧光检测系统,将1:100作为血清起始稀释度,所以如果是低滴度的1:100阳性,只能视为一个临界可疑值,临床意义不大。ANA作为自
2、身免疫性结缔组织病的筛选试验必须强调高滴度。,ANA的靶抗原分布,整个细胞,包括细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期蛋白等。,ANA检测的临床意义,ANA可见于多种自身免疫性疾病,特别是结缔组织疾病,常作为结缔组织疾病的诊断,病情判断和疗效观察的指标,已证实ANA对很多自身免疫性疾病有诊断价值。ANA的靶抗原为细胞核内的不同生化成份,包括核酸、细胞核蛋白和核糖体蛋白。在不同疾病中,特别是风湿性疾病,其抗体谱有一定的特意性。在炎症性风湿病中ANA阳性率在20%-100%之间,其中类风湿性关节炎中ANA阳性率最低,为20%-40%。所以,检测ANA对于不同类型风湿病意义重大。,SLE活动性:占9
3、5%-100%,非活动性:占80%-100%。(2)药物诱导的SLE:占100%。(3)混合性结缔组织疾病:占100%。(4)其它风湿性疾病:占20%-50%(5)进行性系统硬化症:占85%-95%。(6)多肌炎和皮肌炎:占30%-50%。(7)干燥综合征:占70%-80%。(8)慢性活动性肝炎:占30%-40%。(9)溃疡性结肠炎:占26%。,常见疾病,其它,还可见于:非结缔组织疾病中也可出现阳性;正常人(特别是老年人)也可出现阳性,但滴度低,并且常表现为IgM型;高滴度ANA则高度提示自身免疫性疾病。,ANA()的原因,风湿性疾病SLE多发性肌炎干燥综合征硬皮病血管炎RA正常的健康人女性男
4、性,出现率随年龄而增加风湿性疾病患者亲属?孕妇,药物诱导慢性肝脏疾病慢性肺部疾病慢性感染血液系统异常恶性肿瘤,SLE患者使用IIF法测定ANA阴性的一些解释,技术方面临床方面经皮质激素或免疫抑制剂治疗。终末期肾病。隐蔽ANA:与循环中免疫复合物结合,沉积于组织。由于大量蛋白尿而从肾脏丢失。,ANA的荧光染色型别,细胞核:核均质型(DNA、组蛋白和核小体等)核颗粒型(Sm、uRNP、SS-A、SS-B、Ku、I和型周期蛋白)核膜型(板层素、gp120等)核仁型(SCL-70、PM-SCL、RNA多聚酶、原纤维蛋白等)核浆点型(着丝点、核多点及核少点型)细胞浆:胞浆颗粒型(线粒体、Jo-1、核糖体
5、等)胞浆纤维型:波形蛋白、原肌球蛋白和肌动蛋白等分裂期细胞阳性:纺垂体、中间体、中心体等,根据产生的荧光模型、靶抗原的分布部位分类如下:,ANA筛查的方法,间接免疫荧光法(IIF)基质组合为:HEP-2细胞+灵长类肝(猴),核颗粒型:核粗颗粒型,抗核抗体染色类型 核仁型(nucleolar),均质性(homogeneous),ANA的 荧光类型,ANA试验的结果中一般会报告其分型,这些分型可能与某一特定的抗原反应活性相关。,抗双链DNA抗体(ds-DNA)的检测与临床应用,检测:测定抗ds-DNA以血鞭毛虫属的绿萤短膜虫为靶抗原基质,可联合使用HEp-2细胞及灵长类肝组织检测。自身抗原:位于D
6、NA脱氧核糖磷酸框架上。,抗dsDNA抗体,荧光模式:绿蝇短膜虫:动基体均质的或边缘亮度增强的荧光。Hep-2细胞:细胞核的均质型荧光。,临床应用,抗双链DNA抗体(ds-DNA)是系统性红斑狼疮的特异性抗体,其阳性率因检测方法而异,在40-90%。但抗ds-DNA阴性并不能排除患有SLE的可能性。抗ds-DNA抗体具有预测价值,85%的出现抗ds-DNA抗体的健康人在五年内发展为SLE。已证实抗ds-DNA抗体参与SLE的病理过程,在疾病形成过程中,抗ds-DNA和其抗体形成的免疫复合物沉积在皮下毛细血管、肾和其他器官内,激活补体系统,从而导致组织损伤。,抗体水平与疾病活动度相关,随着疾病活
7、动的控制,抗ds-DNA抗体滴度可以下降或消失。,ANA谱3检测及临床应用,抗RNP/Sm抗体,荧光模式:Hep-2片:细胞核粗颗粒,核仁阴性。肝组织切片:同上。荧光法不能区分抗RNP和抗体Sm。,抗RNP/Sm抗体,自身抗原:抗原RNP和Sm属于一组小核糖核蛋白(snRNP),由低分子量的RNA和多种蛋白质组成,RNA中尿苷(U-RNA)含量较高。临床意义:高滴度的抗RNP抗体为 混合结缔组织病(MCTD)的特征,发生率为95100%。也可出现于SLE,但总是与抗Sm抗体同时出现。抗Sm抗体对SLE具有高度特异性,发生率为2040%。,抗SSASSB抗体,荧光模式Hep-2片:细胞核呈细颗粒
8、荧光,核仁不发光。肝组织片:细颗粒荧光。,抗SSASSB抗体,自身抗原:SSA抗原是一个小核糖核蛋白,由一个RNA分子和两种不同的蛋白质组成。蛋白质的分子量为52KD和60KD。抗体直接针对蛋白质的抗原决定簇。SSB抗原是分子量为48kD的磷酸化蛋白。临床意义;最常见于干燥综合征(SS),也见于SLE、原发性胆汁性肝硬化(PBC),偶见于慢活肝。抗SSA抗体在新生儿红斑狼疮的发生率几乎为100%。,核仁阳性(Nucleolar),核仁荧光增强,核浆均质型-Scl-70抗体。核仁均质型-PM-Scl及其他抗原抗体。核仁细颗粒型-原纤维蛋白抗体。核仁粗颗粒型-RNA多聚酶-1抗体。,抗Scl-70
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